基于脂噬介导的mTOR/TFEB信号通路探讨当归红芪超滤物干预糖尿病肾病作用机制

目的以当归红芪超滤物干预糖尿病肾病模型大鼠,探讨其对糖尿病肾病脂噬的效应机制。方法50只SPF级雄性Wistar大鼠随机选取7只为空白组,其余43只采用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素联合高脂高糖饲料喂养制备糖尿病肾病模型。将成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(17.9 mg/kg)和中药低、中、高剂量组(1.5、3、6g/kg),分别灌胃相应溶液,连续12周。检测大鼠随机血糖、体质量及24h尿蛋白含量,生化检测糖化血清蛋白(GSP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量,HE染色观察肾组织形态变化,Masson染色观察肾组织纤维化情况,透射电镜观察肾组织超微结构,RT-qPCR检测肾组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3(LC3B)mRNA表达,Westernblot检测肾组织mTOR、转录因子EB(TFEB)、p-TFEB、LC3B蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠随机血糖显著升高(P<0.01),体质量显著减少(P<0.01),24h尿蛋白含量显著升高(P<0.01),GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);肾小管上皮细胞空泡变性、胞质空泡化、有大量炎性细胞浸润,胶原纤维增多且分布杂乱,脂滴数量增加,自噬体数量减少;肾组织mTORmRNA表达显著升高(P<0.01),LC3BmRNA表达显著降低(P<0.01),mTOR、p-TFEB蛋白表达显著升高(P<0.01),TFEB、LC3BⅡ蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠给药12周随机血糖、24h尿蛋白含量降低,体质量增加,GSP、SCr、BUN、TG、TC、LDL-C、FFA含量降低,HDL-C含量升高;肾组织炎性细胞浸润、纤维化、脂滴沉积有不同程度缓解,肾组织mTORmRNA表达降低,LC3BmRNA表达升高,mTOR、p-TFEB蛋白表达降低,TFEB、LC3BⅡ蛋白表达升高,其中厄贝沙坦组和中药高剂量组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论当归红芪超滤物能改善糖尿病肾病模型大鼠糖脂代谢紊乱、拮抗肾脏异位脂质沉积、促进脂噬、延缓糖尿病肾病进程,其机制可能与mTOR/TFEB信号通路有关。

当归黄芪超滤物通过调控ROS/GSH/GPx4轴抑制铁死亡改善放射性大鼠心肌纤维化

目的探讨ROS/GSH/GPx4轴介导的心肌铁死亡在放射性心肌纤维化中的作用机制及当归黄芪超滤物的干预作用。方法50只大鼠随机分为5组。除空白组外,其余各组大鼠均接受X射线单次局部胸部照射建立放射性心肌纤维化模型。辐射后,当归黄芪超滤物各组大鼠分别灌胃给药30 d后,用小动物超声评价心功能;比色法检测SOD、GSH、MDA及Fe^(2+)活性;免疫荧光检测ROS表达;HE、Masson染色观察病理变化及纤维化;透射电镜观察心肌超微结构;Western blot检测铁死亡及纤维化蛋白表达。结果与空白组比较,模型组LVEF和LVFS值降低;Fe^(2+)、MDA、ROS水平上升,SOD、GSH水平下降;HE及Masson显示有炎性细胞聚集及胶原纤维沉积;透射电镜显示受损线粒体数量增多、排列紊乱,形态不规则、变小、嵴紊乱;Western blot显示α-SMA、Collagen I、NOX1蛋白表达升高,GPx4、FTH1蛋白表达降低;与模型组比较,当归黄芪超滤物组大鼠心功能改善,ROS、抗氧化指标恢复,Fe^(2+)水平降低;线粒体结构及纤维化程度减轻;α-SMA、Collagen I、NOX1蛋白表达下降,GPx4、FTH1蛋白表达上升。结论当归黄芪超滤物对放射性心肌纤维化具有抑制作用,其机制可能是通过调控ROS/GSH/GPx4轴抑制心肌铁死亡发挥作用。

基于网络药理学与分子对接的当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病作用机制

为了探讨当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病的作用机制,利用网络药理学与分子对接检索TCMSP、UniProt数据库筛选当归黄芪超滤物活性成分和作用靶点;通过DisGeNET等数据库得到疾病靶点;利用Venny2.1.0获取交集靶点;使用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(Protein-Protein Interaction, PPI)网络;Metascape平台进行GO功能和KEGG通路富集分析,PyMOL对活性成分和关键靶点做分子对接验证.筛选出1 185个药物作用靶点,2 307个疾病靶点,217个交集靶点;获得β-谷甾醇、槲皮素、黄芪甲苷等22个活性成分,得到NLRP3、IL1β、CASP1等61个关键靶点;KEGG分析获得了272条信号通路,包括NOD样受体通路、NF-kappa B通路等.分子对接的最小结合能均<-5.0 kJ·mol^(-1),表明相互对接良好.初步预测了当归黄芪超滤物改善冠状动脉微血管疾病的核心靶点和信号通路,并进行了分子对接验证,为进一步体内外实验提供了思路.

基于网络药理学和实验验证探讨当归黄芪超滤物治疗放射性心肌纤维化的作用机制

目的:通过网络药理学联合实验验证探讨当归黄芪超滤物(RAS-AM)治疗放射性心肌纤维化(RIMF)可能的作用靶点和机制。方法:使用TC-MSP数据库、TCM@TAIWAN台湾中医药资料库和TCMID中医药数据库筛选RAS-AM的成分和靶点,并使用Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测。从GeneCards和OMIM数据库获得RIMF疾病靶点,疾病和药物的交集靶点通过韦恩在线工具获得,交集靶点通过STRING数据库获得蛋白互作关系(PPI),使用Cytoscape3.9.1软件构建“药物-成分-靶点-疾病”的可视化网络拓扑关系图。通过David数据库对核心靶点进行GO和KEGG富集分析,利用微生信平台作图。实验验证:将60只Wi-star大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组(1.0mg/kg)、RAS-AM低剂量组(150mg/kg)、RAS-AM中剂量组(300 mg/kg)、RAS-AM高剂量组(600 mg/kg),采用38Gy剂量辐射诱导建立RIMF模型,灌胃给药4周,同时观察大鼠一般情况。大鼠取血和心脏后,HE染色观察心肌组织形态学改变,ELISA法和Western blot法检测网络药理学预测的关键靶点。结果:网络药理学分析得到RAS-AM活性成分34个,靶点705个,共有靶点154个,以IL-6、VEGFA、MMP-2、MMP-9、ACE为前五的核心靶点;GO富集分析共筛选出153个条目,KEGG富集有25条通路。实验部分:HE染色结果显示各用药组心肌细胞变性、坏死好转,心肌间质中炎症细胞浸润减轻,心肌间质纤维结缔组织增生减少。ELISA与Westernblot结果显示,与空白组比较,模型组IL-6、VEGFA、MMP-9表达均升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各用药组IL-6、VEGFA、MMP-9表达均不同程度降低(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:RAS-AM;可能通过下调IL-6、VEGFA蛋白、MMP-9蛋白等为代表的核心靶点和调控炎症通路、胶原分解等过程,多途径协同以抗RIMF。

当归红芪超滤物对电离辐射引起HUVECs氧化应激和炎症损伤的影响及其机制

目的探讨当归红芪超滤物(Radix Angelica sinensis and Radix Hedysari ultrafiltration,RAS-RH)对电离辐射致人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激和炎症损伤的影响。方法6 Gy X射线构建辐射HUVECs损伤模型,用不同浓度(100、200、400μg·L^(-1))RAS-RH作用于HUVECs,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,透射电镜观察细胞线粒体的结构变化,DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平,JC-1试剂盒检测细胞内线粒体膜电位变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA法检测细胞内IL-6和TNF-α含量,生化试剂盒检测MDA、CAT、SOD及GSH-PX活性,qRT-PCR检测细胞内Nrf2、HO-1、NF-κB、eNOS、IL-6基因表达水平,Western blot法检测细胞内Nrf2、HO-1、eNOS、NF-κB、p-NF-κB和IL-6蛋白的表达水平。结果与模型组相比,给药组HUVECs活性更高,细胞凋亡率下降,细胞内ROS水平降低,细胞内线粒体结构更加完整,线粒体膜电位水平更高,细胞内Nrf2、HO-1和eNOS的表达增加,p-NF-κB、IL-6的表达降低。结论RAS-RH具有抗辐射、抗氧化及抗炎作用,可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路活性,降低电离辐射导致的HUVECs氧化应激及炎症损伤,从而促进细胞增殖活性。

基于网络药理学和实验验证探讨当归红芪超滤物对放射性心脏病的作用机制

目的 基于网络药理学和动物实验探讨当归红芪超滤物(RAS-RH)防治放射性心脏病(RIHD)的潜在机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库遴选“当归-红芪”的活性成分及预测干预靶点。在GeneCards、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索RIHD靶点蛋白,采用R软件整合共同靶点,利用STRING数据库构建药物成分-疾病交集靶点蛋白互作网络(PPI),并R软件对PPI结果进行可视化分析;运用R软件与Bioconductor平台对将成分-疾病交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。将Wistar雄性大鼠40只,随机分为空白组、模型组、中药组、西药组,除空白组外其余各组采用X线(10Gy)单次辐射诱导构建RIHD大鼠模型,饲养30 d后持续给药4周,采用ELISA法检测给药4周后各组大鼠血清中肌钙蛋白I、脑钠肽水平,Western Blot检测预测的核心靶标半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、白介素(IL)-6、人表皮生长因子受体(EGFR)在各组大鼠心肌组织中的表达。结果 网络药理学分析:RAS-RH的主要活性成分16个、对应靶标210个,药物与疾病交集靶标58个;GO富集1792个条目(P<0.05),其中生物过程(BP)1559个条目、细胞组分(CC)38个条目、分子功能(MF)95个条目;KEGG通路富集分析共筛选出135条信号通路(P<0.05),主要涉及致癌-受体激活信号通路、脂质和动脉粥样硬化信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、癌症中的蛋白聚糖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、肿瘤坏死因子(TNF)、缺氧诱导因子(HIF)-1等信号通路。动物实验:ELISA检测结果提示模型组大鼠血清cTnI、BNP显著升高,与模型组相比药物组cTnI、BNP显著降低(P<0.05);Western Blot检测结果提示:模型组大鼠心肌组织Caspase-3、IL-6蛋白表达升高、EGFR蛋白表达降低,与模型组相比药物组Caspase-3、IL-6降低、EGFR蛋白表达升高(P<0.05)。结论 当归红芪超滤物的有效成分主要通过作用HIF-1α、MYC、Caspase-3、EGFR、IL-6、CCND1、VEGFA等核心靶点调节PI3K/Akt、TNF、HIF-1等信号通路从而发挥防护RIHD的作用,为中药抗辐射研究提供一定的参考。

当归红芪超滤物通过抑制心脏CILP1过表达对放射性心肌纤维化的干预效应

目的明确当归红芪超滤物(RAS-RH)通过抑制心脏CILP1过表达对放射性心肌纤维化的干预效应。方法将40只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸贝那普利组、RAS-RH组、盐酸贝那普利+RAS-RH组,采用X-ray诱导心肌细胞损伤制备心肌纤维化大鼠模型,盐酸贝那普利组给予盐酸贝那普利1.0 mg·kg^(-1)灌胃;RAS-RH组给予RAS-RH 0.6 g·kg^(-1)灌胃;盐酸贝那普利+RAS-RH组给予盐酸贝那普利1.0 mg·kg^(-1)与RAS-RH 0.6 g·kg^(-1)灌胃;模型组及正常组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,药物干预4周后,采用ELISA法检测各组大鼠血清NT-ProBNP、CTnⅠ、CTnT的含量;HE染色评价各组大鼠心肌组织病理变化;Masson染色评价各组大鼠心肌胶原沉积情况并计算胶原容积分数(CVF);免疫组化检测各组大鼠心肌组中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白的表达水平;Western blot法检测各组大鼠心肌组织中TGF-β1、smad3、CILP1蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠血清中NT-ProBNP、CTnⅠ、CTnT的含量明显增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,胞间存在大量纤维组织及炎性细胞浸润,心肌组织中蓝染纤维组织明显增多,心肌CVF显著增加,心肌组织α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、CILP1蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,盐酸贝那普利组、RAS-RH组、盐酸贝那普利+RAS-RH组大鼠血清中NT-ProBNP、cTnⅠ、CTnT含量明显降低(P<0.01),心肌细胞排列稍整齐,纤维组织及炎性细胞浸润有所改善,心肌CVF显著降低(P<0.01),心肌组织中α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-β1、Smad3、CILP1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物可通过抑制心脏CILP1的过表达减轻X线辐射诱导的大鼠心肌纤维化。

囊素和法氏囊超滤物对杂交瘤细胞抗体分泌的影响

以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过间接ELISA法测定抗体的OD490值。结果表明,随着囊素和法氏囊超滤物浓度的增加,细胞抗体分泌逐渐增加,当囊素浓度为50μg/mL、超滤物浓度为2.5mg/mL时,OD490值达到最高,分别比对照组增加8.83％和5.72％（P<0.01）;随着浓度的继续增加,OD490值开始下降。同时观察到,处理48h后,500μg/mL囊素组和5mg/mL法氏囊超滤物组有部分细胞死亡,1000μg/mL囊素组及40,20,10mg/mL法氏囊超滤物组细胞全部死亡,其它组细胞正常。动态试验表明,加入50μg/mL囊素后3h,OD490值增加最高,达24.93％（P<0.01）。因此,囊素和法氏囊超滤物能直接与杂交瘤细胞作用,并提高其抗体分泌水平。

当归红芪超滤物对自然衰老大鼠抗氧化作用机制的研究

目的探讨当归红芪超滤物的抗衰老作用及其机制并比较不同分子量超滤物的作用效果。方法将42只Wistar老年雄性大鼠随机分为衰老对照组和当归红芪超滤膜提取物20万、10万、5万分子量组,给药组连续灌胃10周后,按试剂盒说明书测定血清及心肌组织中SOD、GSH-Px的活力及MDA含量水平。结果与衰老对照组相比,当归红芪超滤膜提取物20万、10万、5万分子量组的血清及心肌组织中SOD、GSH-Px活力水平不同程度提高(P<0.05),MDA水平不同程度降低(P<0.05);不同分子量组间比较,10万分子量组的SOD、GSH-Px的活性水平提高最显著(P<0.05),且MDA含量水平降低最显著(P<0.05)。结论当归红芪超滤物抗衰老的作用机制可能与提高心肌组织中的SOD、GSH-Px活力和降低MDA含量从而发挥抗氧化作用相关,其抗氧化的有效成分可能在10万分子量上下。

黄芪与红芪超滤物对血瘀性脑缺血大鼠脑组织代谢水平的影响

目的研究黄芪与红芪超滤物对血瘀性脑缺血大鼠脑组织代谢水平的影响。方法采用连续注射地塞米松后结扎双侧颈总动脉复制血瘀性脑缺血大鼠模型,观测大鼠脑组织病理学及其代谢水平,分析黄芪与红芪超滤物抗脑缺血的作用及其机制。结果 1.32 g/kg黄芪超滤物与1.68 g/kg红芪超滤物可减缓血瘀性脑缺血大鼠体重的下降,提高模型大鼠脑组织中葡萄糖、总氨基酸、ATP、Na+-K+-ATPase的含量,降低脑组织中乳酸含量(P<0.05),改善缺血脑组织病理学改变。结论黄芪与红芪超滤物具有一定的抗脑缺血作用,改善脑组织代谢是其抗脑缺血机制之一。

红芪超滤物对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响

目的观察红芪超滤物(UEMHP)对人肝癌HepG2细胞辐射增敏的作用,并探讨其可能机制。方法用CCK-8法检测UEMHP对HepG2细胞生长抑制的影响;克隆形成实验检测UEMHP对HepG2的辐射增敏作用;通过流式细胞仪检测HepG2细胞周期分布的变化和凋亡率;采用RT-PCR法检测Survivin mRNA表达。结果在5～50mg/L浓度范围内,UEMHP对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);加药辐射组与单纯辐射组比较,克隆存活曲线显示加药辐射组各剂量点的存活分数均低于单纯辐射组(P<0.05),UEMHP能抑制HepG2细胞克隆形成,对HepG2有辐射增敏作用;流式细胞仪检测显示UEMHP具有去G2/M周期阻滞效应,加药辐射组细胞凋亡率(21.42%±3.74%)高于对照组(5.35%±0.41%)、单纯药物组(10.36%±1.75%)和单纯辐射组(10.58%±2.01%,P<0.01);RT-PCR显示加药辐射组Survivin mRNA(0.31±0.02)表达低于对照组(0.82±0.06)和单纯辐射组(0.58±0.04),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 UEMHP对人肝癌HepG2细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能通过下调SurvivinmRNA的表达与促进细胞凋亡有关。

当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠的保护作用及对热休克蛋白70表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠乳酸脱氢酶(actate dehydrogenase,LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(lactate dehydrogenase,LDH1)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70 mRNA)表达的影响,阐明当归红芪超滤物对梗死心肌的保护作用。方法结扎左前降支建立大鼠心梗模型。将80只雄性Wistar大鼠随机分成5组,每组16只,分别为造模组(myocardial infarction,MI)、假手术组(sham-operation,SH)、低剂量组(low-dose drug,LD)、中剂量组(middle dose group,MD)、大剂量组(high-dose drug HD),各组动物分别于治疗后(36 h、14 d)断头处死,分别检测外周血LDH、LDH1和采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠心肌组织HSP70 mRNA的表达。结果与MI相比,显著降低了ST段抬高、LDH、LDH1水平(P<0.05,P<0.01)和增强了HSP70的表达(P<0.05,P<0.01)。结论当归红芪超滤物可通过抗氧化作用、降低LDH、LDH1、增加HSP70的表达发挥抗心肌缺血损伤,对大鼠心肌有明显的保护作用。

当归红芪超滤物对过氧化氢致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70及内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨当归红芪超滤物对过氧化氢(H2O2)致内皮细胞凋亡中热休克蛋白70(HSP70)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 H2O2诱导ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡制备模型,实验分为正常对照组、模型组、单纯药物组、药物干预组,并给予相应药物干预,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度,RT-PCR法检测HSP70、eNOS的基因表达,蛋白印迹法检测HSP70的蛋白表达,硝酸还原酶法及分光光度法检测一氧化氮(NO)的含量。结果与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率明显增加、细胞内Ca2+浓度明显上升(P<0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达下调及NO含量降低(P<0.05);与模型组比较,药物干预组细胞凋亡率、细胞内Ca2+浓度明显降低(P<0.05),细胞HSP70基因和蛋白表达上调、eNOS基因表达上调及NO含量升高(P<0.05)。结论当归红芪超滤物通过上调HSP70、eNOS的表达及NO含量,降低细胞内钙超载,发挥抗H2O2致ECV-304人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。

当归补血汤超滤物抗H_2O_2致人脐静脉内皮细胞(ECV-304)氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。

当归红芪超滤物对辐射致新生大鼠心肌细胞氧化应激和炎性因子的影响

目的探讨当归红芪超滤物对辐射致新生大鼠心肌细胞氧化应激和炎性因子的影响。方法用X线照射新生大鼠原代培养的心肌细胞建立辐射损伤细胞模型,实验分为空白组、模型组、低剂量干预组、中剂量干预组和高剂量干预组,干预组分别用使用3 mg/ml、6 mg/ml和9 mg/ml浓度的当归红芪超滤物对辐射损伤细胞模型进行干预。对各组心肌细胞进行细胞活性检测,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)等氧化应激指标检测及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β等炎性因子指标检测。结果各干预组心肌细胞生长抑制率均低于模型组,心肌细胞SOD含量均高于模型组,MDA、LDH含量及TNF-α和IL-1β含量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈明显剂量依赖性(P<0.05)。结论当归红芪超滤物可有效改善辐射致新生大鼠心肌细胞的氧化应激及炎性因子指标,避免心肌细胞受损,并与剂量存在密切关系。

当归红芪超滤物对心肌细胞Hsp70表达的影响

目的:探讨当归红芪超滤物对凋亡心肌细胞热休克蛋白70(Hsp70)表达的影响,阐明当归红芪超滤物对心肌细胞的抗氧化作用。方法:原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞用高浓度的H2O2(400μmol.L-1)建立细胞凋亡模型,用不同浓度(3.75、7.50和15.00g.L-1)的当归红芪超滤物进行干预,倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞搏动频率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,分别用RT-PCR技术和Western blotting技术检测心肌细胞中Hsp70基因及蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,H2O2损伤组心肌细胞搏动频率显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01);与H2O2损伤组比较,当归红芪超滤物高、中、低剂量组心肌细胞搏动频率显著增加,但低于对照组(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.01),Hsp70mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:当归红芪超滤物具有抗氧化损伤心肌细胞凋亡的作用,且可上调心肌细胞Hsp70的表达。

当归红芪超滤物对衰老大鼠脑组织氧化损伤及线粒体DNA缺失的影响

目的探讨当归红芪超滤物延缓老龄大鼠脑衰老的作用及其机制。方法选用3月龄大鼠12只作为青年组,选用24月龄大鼠36只随机分为老年组、当归红芪超滤物组、维生素E组。给予相应处理后检测各组学习记忆功能、脑指数测定,组织形态学观察,脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)含量测定及脑组织线粒体DNA(mt-DNA)缺失的表达。结果与青年组大鼠相比:老年组大鼠学习能力下降,脑组织形态学存在差异,脑指数存在差异(P<0.05),脑组织SOD活力明显降低,MDA含量明显升高,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例明显增高(P<0.05);与老年组相比:用药组大鼠学习能力明显增加,脑组织形态学存在差异,脑指数无明显差异,脑组织中SOD活力显著增高,脑组织中MDA含量显著降低,脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例降低(P<0.05)。与维生素E组相比,用药组大鼠学习能力、脑指数、脑组织SOD活力、MDA含量、脑缺失mt-DNA/内参mt-DNA比例均无显著差异(P>0.05)。结论当归红芪超滤物可能通过清除自由基,防止mt-DNA片段丢失发挥延缓老龄大鼠脑组织衰老的作用,其功效与维生素E相当。

当归红芪超滤物对重离子12C6+辐射肝癌细胞DNA损伤修复的影响

将人肝癌H22细胞分成4组,分别为对照组、药物组(100 mg/L)、辐射组(2 Gy)及联合组(100 mg/L药物+2 Gy照射),采用CCK-8法、单细胞凝胶电泳、γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术以及Western Blotting印迹法,研究当归红芪超滤物(Radix Angelicae Sinensis and Radix Hedysari, RAS-RH)对重离子12C6+辐射引起人肝癌H22细胞DNA损伤修复的影响和其可能的机制。结果表明,在0~72 h和给药剂量为5~200 mg/L范围内,RAS-RH对人肝癌H22细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其20%抑制浓度IC20为(117.6±2.15)mg/L;单细胞凝胶电泳显示联合组头部DNA含量低于辐射组,而尾部DNA含量、尾距TM、Olive尾距OTM均高于辐射组;γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术发现RAS-RH不增加重离子12C6+辐射引起的DNA损伤,但在2-12 h,DNA双链断裂的γ-H2AX foci修复作用被RAS-RH抑制,DNA损伤持续存在;Western Blotting显示RAS-RH通过下调Ku70/80及Rad51的蛋白表达,抑制γ-H2AX的聚集。以上结果说明RAS-RH对人肝癌H22细胞的辐射增敏作用可能是下调DNA损伤修复相关因子Ku70/80及Rad51的表达。

当归红芪超滤物抗辐射致心肌细胞损伤的作用及机制

目的探讨当归红芪超滤物抗辐射致乳鼠心肌细胞损伤的作用及其可能机制。方法用X线照射Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞建立辐射损伤模型,用不同浓度的当归红芪超滤物进行干预,实验分正常对照组、辐射损伤模型组、当归红芪超滤物不同浓度(3、6、9 mg·mL-1)干预组(UFE-AH)。MTT法检测各组心肌细胞的存活率,2,4二硝基苯肼显色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性,免疫组化法观测各组细胞Bax的表达,蛋白印迹半定量测定各组细胞Bax蛋白的表达。结果与辐射损伤模型组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞存活率明显升高,LDH含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著提高(P<0.05),Bax表达显著降低(P<0.05)。结论当归红芪超滤物具有拮抗辐射致心肌细胞损伤的作用,其机制与清除自由基有关。

当归补血汤超滤物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的探讨当归补血汤超滤膜提取物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响。方法原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,阿霉素诱导心肌细胞凋亡。实验分正常组、阿霉素组(2.5 mg/L)、当归补血汤超滤膜提取物低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前,预先给予含30,60,120 mg/L当归补血汤超滤膜提取物完全培养基培养2 h)。MTT法检测各组细胞存活率,荧光显微镜下各组细胞凋亡形态学观察,激光共聚焦技术测定各组心肌细胞线粒体膜电位水平,蛋白印迹法测定各组Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达水平。结果与正常组相比,阿霉素组心肌细胞存活数明显降低,可见细胞凋亡及线粒体膜电位降低;Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、Caspase-3表达水平升高(P<0.05);与阿霉素组比较,当归补血汤超滤膜提取物干预组的心肌细胞存活数明显升高,凋亡细胞数目减少,线粒体膜电位升高,Bax、Caspase-3表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论线粒体凋亡通路的激活是阿霉素诱导心肌细胞凋亡的机制之一,当归补血汤超滤膜提取物可调控该通路发挥心肌细胞保护作用。