超声辅助酶切法用于溶液内蛋白质样品酶切特点分析

目的分析超声辅助酶切法对溶液内蛋白质样品酶切的特点。方法分别应用超声辅助酶切法与传统酶切法对牛血清白蛋白进行溶液内酶切,通过飞行时间质谱进行分析,对数据库检索后得到的多肽进行比较分析。结果超声辅助酶切法的酶切时间可缩短到10 min,酶切后多肽的回收率比传统酶切法低8%,但飞行时间质谱鉴定评分(MASCOT评分)比传统方法高约1倍,肽段的覆盖率高10%,匹配的多肽数多40%以上。对超声辅助酶切法鉴定出的多肽进一步分析表明,这些多肽的误切率较传统方法高22%,比传统方法多鉴定出的多肽分子质量主要在2～3 ku之间,且大部分为含有误切位点的多肽。结论超声辅助酶切可明显缩短蛋白质酶切时间,得到更好的多肽鉴定,但部分多肽酶切不完全,样品损失会更多。

用于质谱分析的细胞总蛋白三种酶切方法比较

目的比较无去污剂的细胞总蛋白三种酶切样品制备方法。方法采用细胞吸入胶内酶切法、蛋白吸入胶内酶切法及超滤管辅助溶液酶切法对细胞总蛋白进行酶切,再用液质联用技术对三种酶切方法制备的多肽样品进行蛋白鉴定。结果通过液质联用技术鉴定,细胞吸入胶内酶切法制备的样品获得3835个蛋白,蛋白吸入胶内酶切法制备的样品获得2340个蛋白,超滤管辅助溶液酶切法制备的样品获得4248个蛋白。韦恩图分析显示,不同酶切方法得到的蛋白种类存在差异。对细胞吸入胶内酶切法和超滤管辅助溶液酶切法所获得的蛋白进行基因本体(geneontology,GO)分析发现,细胞吸入胶内酶切法能获得更多膜结合蛋白。结论三种无去污剂酶切方法,避免了去污剂的种种弊端,其中超滤管辅助溶液酶切法和细胞吸入胶内酶切法更优。

超滤精制弹性酶的实验研究

弹性酶是一种肽链内断酶,由240个氨基酸组成,分子量25,900。它具有多种生理活性,临床上用于防治动脉硬化,高脂血症,糖尿病,脂肪肝等疾病,亦可作为肺炎,心内膜炎等症的辅助治疗剂。本品是从猪胰脏提取纯化而得到的,由于生产工艺不同它的纯度有所差异。我厂采用碳酸盐缓冲溶液从胰酶中提取。盐析的方法制备,每毫克弹性酶的效价不得低于25活力学单位。作者对不符合标准的弹性酶用超滤法精制,该法简单、方便,条件缓和,可避免酶的变性,失活和自溶,精制后效价提高,炽灼残渣量减少,达到了药用质量标准的要求。

川芎微波提取工艺对酪氨酸酶活性的影响

以提取物产率和对酪氨酸酶的相对抑制率为评价指标,考察了川芎微波提取工艺对酪氨酸酶活性的影响。得到了最佳提取工艺条件:以90%乙醇溶液为提取剂,乙醇溶液与川芎的质量比为10∶1,微波450W提取7min,提取2次。提取物(干基)产率约4.59%,对酪氨酸酶的相对抑制率为75.1%。与直接加热提取法进行了比较,结果表明,微波辅助提取能缩短提取时间,并能提高提取物产率和对酪氨酸酶的相对抑制率。

一种从链霉菌和大肠杆菌提取大分子量总DNA的新方法

近年来,我们在进行基因工程试验中,探索建立了一种避免使用苯酚、简化操作程序的DNA提取方法。利用该法所得DNA不仅分子量大(约300kb),且纯度完全能满足内切酶消化,接连和转化。在提取链霉菌和大肠杆菌染色体DNA时,称1g湿菌体,加9ml溶菌缓冲液(50mMol/L Tris.Hcl PH8.0;25mmolL EDTA;0.3mol/l sucrose)。混匀菌体后加入1ml溶菌酶溶液(20mg/ml和200ul

藏药雪莲花活性成分的提取与分析

目前关于藏药雪莲花成分提取与分析的系统研究较少。作者以单因素实验为基础,系统研究了去离子水回流提取法、乙醇溶液回流提取法、酶辅助水提取法对藏药雪莲花提取率的影响。研究发现,经去离子水回流提取法处理的藏药雪莲花的提取率始终大于乙醇溶液回流提取法的,其最佳提取条件为回流温度60℃、回流时间3 h、料液质量比1∶30。同时,酶辅助水提取法具有更温和的提取温度和更短的提取时间。此外,利用液质联用技术对藏药雪莲花进行成分分析,发现其含有较高含量的东莨菪素、芹菜素、绿原酸、咖啡酸、水杨酸、甜菜碱、柠檬酸、葫芦巴碱、芦荟苦素等,在洗发水中具有潜在的应用价值。