风湿性心脏瓣膜病合并心房颤动患者右心耳中超级化激活环核苷酸调控通道2和4的协同表达

目的探讨超级化激活环核苷酸调控通道-2(HCN2)和HCN4在风湿性心脏瓣膜病(RHD)患者右心耳组织的协同表达。方法收集2019年1月至2020年12月广西医科大学第二附属医院63例RHD患者的右心耳组织,RHD并发心房颤动患者30例作为心房颤动组,RHD合并窦性心律患者33例作为窦性心律组。分别采用RT-PCR、FQ-PCR和Western blot检测HCN2及HCN4的基因及蛋白表达水平,采用Spearman分析两者的相关性。结果RTPCR显示心房颤动组HCN2和HCN4 mRNA表达量均明显高于窦性心律组(t=8.587、13.213,P<0.01)。FQ-PCR显示心房颤动组HCN2和HCN4 mRNA表达量均明显高于窦性心律组(t=10.016、9.105,P<0.01)。Western blot显示心房颤动组HCN2和HCN4蛋白表达量均明显高于窦性心律组(t=13.658、8.590,P<0.01)。心房颤动组HCN2与HCN4 mRNA和蛋白水平上调率均呈现正相关作用(r_(RT-PCR)=0.636,P_(RT-PCR)<0.01;rFQ-PCR=0.683,P_(FQ-PCR)<0.01;r_(wb)=0.641,P_(wb)<0.01)。结论心房颤动组HCN2与HCN4在基因及蛋白表达水平明显高于窦性心律组,且两者的表达水平呈现协同表达,在RHD合并心房颤动的发生发展过程中可能起着重要的作用。

超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中的表达

目的 观察超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2（HCN2）在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心房组织中的表达,探讨伴发心房颤动的发生机制.方法 收集43例风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者（AF组）,对照组为窦性心律患者（SR组）,采用荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）、Western blot法和免疫组织化学法,检测风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织中HCN2 mRNA及蛋白的表达.结果 FQ-PCR结果显示AF组和SR组HCN2 mRNA表达量分别为0.70±0.14和0.39±0.08;而Western blot结果显示AF组和SR组HCN2蛋白表达量分别为0.52±0.19和0.21 ±0.12,AF组均明显高于SR组（P＜0.01）;免疫组织化学结果显示AF组右心耳心肌细胞溶解、肥厚并广泛间质纤维化,且HCN2蛋白表达量明显高于SR组（P＜0.01）.结论 HCN2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中表达明显上调,并参与其心房颤动的发生发展过程.

流式细胞术检测风湿性心脏病合并心房颤动患者HCN2蛋白的表达

目的对风湿性心脏病合并心房颤动患者右心耳组织超级化激活环核苷酸门控阳离子通道-2(HCN2)蛋白的表达进行分析和研究。方法风湿性心脏病患者84例分为研究组(心房颤动)和对照组(窦性心律),每组42例,对两组临床资料进行回顾性分析。结果研究组患者的左心房内径(LAD)、右心房内径(RAD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显高于对照组,右心室内径(RVD)明显小于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且研究组HCN2蛋白表达水平高于对照组。结论风湿性心脏病合并心房颤动患者HCN2蛋白的表达与患者的心房颤动具有相关性。

ZD7288抑制风湿性心瓣膜病变心房颤动患者右心耳心肌细胞HCN2表达

目的:观察ZD7288抑制超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)在风湿性心瓣膜病变心房颤动(房颤)患者右心耳组织中的作用。方法:收集43例风湿性心瓣膜病变患者右心耳组织,分为窦性心律患者(SR组)、心房颤动组(AF组)、ZD7288(10μmol/L)干预房颤组(Z1组)和ZD7288(50μmol/L)干预房颤组(Z2组);采用全细胞膜片钳技术记录If电流密度,荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测右心耳组织心肌细胞中HCN2表达水平。结果:相同激活电位时,AF组心肌细胞If电流密度明显大于SR组、Z1组和Z2组,且随电位增加激活更快,尤其在-70 mV时,AF组电流密度明显高于SR组、Z1组和Z2组,分别为(48.36±1.05)pA/pF、(31.03±1.17)pA/pF、(31.12±1.48)pA/pF和(30.32±1.33)pA/pF(P<0.01)。荧光定量聚合酶链反应结果显示AF组、SR组、Z1组和Z2组HCN2 mRNA表达水平分别为1.60±0.36、0.24±0.02、0.28±0.02和0.25±0.03;Western blot结果显示AF组、SR组、Z1组和Z2组HCN2蛋白表达量分别为0.95±0.21、0.22±0.08、0.27±0.07和0.23±0.08;AF组HCN2 mRNA和蛋白表达水平均明显高于SR组、Z1组和Z2组(P均<0.01)。结论:HCN2参与风湿性心瓣膜病患者房颤的发生发展过程,而ZD7288可抑制HCN2的表达。

风湿性二尖瓣狭窄心房颤动患者HCN4基因cDNA序列测定及mRNA的表达

目的通过分析风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者心房肌组织超级化激活环核苷酸调控通道基因家族4(HCN4)基因表达与心房颤动发生的关系,为探讨心房颤动发生的机制奠定理论基础。方法52例风湿性二尖瓣狭窄患者,根据是否合并心房颤动将其分为两组,实验组:38例,男18例,女20例;年龄26～68岁,平均年龄46.47岁;均合并心房颤动。对照组:14例,男6例,女8例;年龄21～62岁,平均年龄42.93岁;不合并心房颤动。提取并逆转录两组患者心房肌组织中HCN4基因的总核糖核酸(RNA),应用SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测HCN4基因信使RNA(mRNA)的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,并对PCR产物测序进行分析。根据标准曲线计算出两组心房肌组织中HCN4基因mRNA含量,并以HCN4基因mRNA和内参β肌动蛋白(β-actin)含量的比值作为评价HCN4基因mRNA表达水平指标。结果测定HCN4基因cDNA序列同源性为100%。建立的实时荧光定量PCR方法在103～107拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内r为0.999。实验组HCN4基因mRNA与β-actin含量的相对表达值比值与对照组比较明显升高(1.323±1.226 vs.0.116±0.192,P<0.05)。结论实时荧光定量PCR对HCN4基因mRNA能进行准确定量,HCN4基因的过度转录表达提示其可能参与了调控风湿性二尖瓣狭窄心房颤动的发生过程。

HCN2与HCN4在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动中的协同表达

目的:分析超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因及超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-4(HCN4)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄(风心二狭)患者并发心房颤动中的协同表达作用,探讨其并发心房颤动的机制。方法:收集43例风心二狭患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者(AF组),对照组为窦性心律患者(SR组)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HCN2及HCN4的表达,分析两者的相关性。结果:RT-PCR及FQ-PCR结果均显示,AF组HCN2及HCN4表达量均高于SR组(P<0.01),AF组HCN2与HCN4表达上调率均呈现正相关(r1=0.697,P1<0.01;r2=0.659,P2<0.01)。结论:HCN2与HCN4的协同表达作用在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动的发生发展中起重要的作用。

二尖瓣狭窄合并心房颤动患者HCN2表达与测序

目的:探讨超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄合并心房颤动患者右心耳组织中的表达。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法分析HCN2mRNA在43例风湿性二尖瓣狭窄患者右心耳组织中的表达,并对反应产物进行测序。结果:测定HCN2基因cDNA序列同源性为100%,风湿性心脏病二尖瓣狭窄合并心房颤动组HCN2mRNA表达量明显高于窦性心律组(P<0.01),HCN2mRNA的表达与左心房内径、心胸比例呈正相关,而与二尖瓣瓣口面积呈负相关。结论:风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动的发生发展过程中,HCN2mRNA表达明显上调。