植物凝集素的超级家族

凝集素是一类专一、可逆地和糖类结合的蛋白质，迄今已经分离纯化并测定了氨基酸序列的凝集素已有不少，一些凝集素以及它们与配体糖相互结合的复合物的高级结构也已经给出，许多工作已深入到基因水平．就目前已有的知识，说明植物凝集素是一个庞大的蛋白质家族．

探讨免疫球蛋白超级家族成员9促进肺腺癌细胞增殖的作用及机制

肺癌是全球发病率与死亡率均位于第一位的恶性肿瘤。肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)大约占整个肺癌的40%。但是,目前对肺腺癌发生发展的机制尚未阐明。TCGA在线数据库GEPIA证实,免疫球蛋白超级家族成员9(immunoglobulin superfamily member 9,IGSF9)在肺腺癌中的平均表达量是6.56,其在正常癌旁组织中的平均表达量是0.55,提示IGSF9在肺腺癌中的表达量是正常癌旁组织的11.93倍。人类蛋白组学数据库也提示,IGSF9在肺腺癌中高表达。通过qRT-PCR检测IGSF9在肺腺癌细胞中的表达量,发现其在A549和H1299细胞中的表达量分别是其在BEAS-2B细胞中的4.17倍和6.6倍。细胞功能实验发现,过表达IGSF9,其LUAD细胞的增殖能力显著增加。平板克隆形成实验发现,在A549细胞中,对照组平板克隆大约有240个,过表达IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是385个,实验组的克隆数目是对照组的1.60倍(P<0.01)。敲低IGSF9,则LUAD细胞增殖能力明显降低。平板克隆形成实验发现,在H1299细胞中,对照组平板克隆大约有320个,敲低IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是164个,实验组的克隆数目仅为对照组的51.25%(P<0.01)。生物信息学预测结合后期研究证实,IGSF9可显著抑制叉头蛋白K2(forkhead box protein K2,FOXK2)的表达。MTS实验发现,过表达FOXK2可显著逆转IGSF9对LUAD细胞增殖的促进作用,而敲低FOXK2则可明显补偿敲低IGSF9对LUAD细胞的增殖抑制作用。这些结果提示,IGSF9通过下调FOXK2从而促进LUAD细胞的增殖。

铁皮石斛纤维素合成酶超级基因家族生物信息学分析

纤维素合成酶超级基因家族是植物体纤维素合成的重要基因。为研究铁皮石斛纤维素合成酶和类纤维素合成酶基因(CESA/CSL)家族的功能,利用从铁皮石斛转录组中鉴定出的32个在茎中高表达量的纤维素合成酶超级基因家族成员为研究对象,使用MEGA5.0、GSDS、SMART、TMHMM、WoLFPSORT等软件对其构建系统进化树,并对基因结构及蛋白质保守结构域、跨膜结构和亚细胞定位等进行综合分析。结果显示,CESA/CSL基因在铁皮石斛不同组织中表达的数目和表达量均不同,具有组织表达特异性。铁皮石斛茎中表达量较高的CESA/CSL基因家族可分为6个亚族,外显子数目1~21个。CESA/CSL基因编码的蛋白质保守性较强,除CSLA亚族外,其余亚族均含有该基因家族的保守结构域Cellulosesynthase。CESA/CSL蛋白主要分布于质膜上,大部分具有跨膜结构域。

超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中的表达

目的 观察超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2（HCN2）在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心房组织中的表达,探讨伴发心房颤动的发生机制.方法 收集43例风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者（AF组）,对照组为窦性心律患者（SR组）,采用荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）、Western blot法和免疫组织化学法,检测风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者右心耳组织中HCN2 mRNA及蛋白的表达.结果 FQ-PCR结果显示AF组和SR组HCN2 mRNA表达量分别为0.70±0.14和0.39±0.08;而Western blot结果显示AF组和SR组HCN2蛋白表达量分别为0.52±0.19和0.21 ±0.12,AF组均明显高于SR组（P＜0.01）;免疫组织化学结果显示AF组右心耳心肌细胞溶解、肥厚并广泛间质纤维化,且HCN2蛋白表达量明显高于SR组（P＜0.01）.结论 HCN2在风湿性心脏病二尖瓣狭窄伴心房颤动患者右心耳组织中表达明显上调,并参与其心房颤动的发生发展过程.

风湿性二尖瓣狭窄心房颤动患者HCN4基因cDNA序列测定及mRNA的表达

目的通过分析风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者心房肌组织超级化激活环核苷酸调控通道基因家族4(HCN4)基因表达与心房颤动发生的关系,为探讨心房颤动发生的机制奠定理论基础。方法52例风湿性二尖瓣狭窄患者,根据是否合并心房颤动将其分为两组,实验组:38例,男18例,女20例;年龄26～68岁,平均年龄46.47岁;均合并心房颤动。对照组:14例,男6例,女8例;年龄21～62岁,平均年龄42.93岁;不合并心房颤动。提取并逆转录两组患者心房肌组织中HCN4基因的总核糖核酸(RNA),应用SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测HCN4基因信使RNA(mRNA)的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,并对PCR产物测序进行分析。根据标准曲线计算出两组心房肌组织中HCN4基因mRNA含量,并以HCN4基因mRNA和内参β肌动蛋白(β-actin)含量的比值作为评价HCN4基因mRNA表达水平指标。结果测定HCN4基因cDNA序列同源性为100%。建立的实时荧光定量PCR方法在103～107拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内r为0.999。实验组HCN4基因mRNA与β-actin含量的相对表达值比值与对照组比较明显升高(1.323±1.226 vs.0.116±0.192,P<0.05)。结论实时荧光定量PCR对HCN4基因mRNA能进行准确定量,HCN4基因的过度转录表达提示其可能参与了调控风湿性二尖瓣狭窄心房颤动的发生过程。

外胚层发育不良受体EDA2R的研究进展

外胚层发育不良受体EDA2R(ectodysplasin A2 receptor)是肿瘤坏死因子受体超级家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRSF)中的一个较新的成员,在发育中的胚胎里有很高的表达,在成年人和动物的多个器官组织中也有表达。与其它TNFRSF成员不同,尽管EDA2R蛋白在胞内没有死亡结构域(death domain,DD),但它仍可激活NF-κB和JNK通路,并介导细胞的凋亡。本文广泛回顾了近年来与EDA2R有关的文献,就该蛋白分子的相关研究进展进行综述,以期为与该蛋白相关的分子功能或其介导的相关疾病的研究提供新的思路。

斑马鱼肿瘤坏死因子(tnfα)及其受体(tnfrsf1a)应答细菌和病毒感染的表达

肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,Tnf)作为重要的炎症因子,在抵抗细菌和病毒感染以及清除被感染的细胞等方面发挥着重要的作用。对斑马鱼进行腹腔注射免疫刺激物、细菌和病毒病原,并采用荧光定量PCR技术分析tnfα及其受体[tnf receptor superfamily(tnfrsf)member 1a]在肾脏和脾脏中的表达。实验结果显示:tnfα和tnfrsf1a在斑马鱼各组织中均有常量表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和聚肌苷酸-聚胞苷酸[polyinosinic acid-polycytidylic acid,poly(I:C)]能够调控肾脏和脾脏中tnfα和tnfrsf1a的表达。腹腔注射嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染斑马鱼后,tnfα在脾脏(48 h和72 h)和肾脏(72 h)中表达显著升高;tnfrsf1a在脾脏(48 h)表达水平也有显著上调。在注射迟缓爱德华氏菌(Edwardasiella tarda)的斑马鱼中,肾脏的tnfα表达显著增加,但在脾脏的表达则完全被抑制;tnfrsf1a基因在脾脏和肾脏(6 h和72 h)有明显上调。鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)感染斑马鱼后,tnfα和tnfrsf1a在感染早期表达量有显著升高;而且在感染1~7 d中,肾脏的tnfrsf1a始终维持高水平诱导表达。实验结果表明:tnfα和tnfrsf1a在鱼类抵抗细菌和病毒感染过程中发挥重要作用。

HCN2与HCN4在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动中的协同表达

目的:分析超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因及超极化激活环核苷酸调控通道基因家族-4(HCN4)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄(风心二狭)患者并发心房颤动中的协同表达作用,探讨其并发心房颤动的机制。方法:收集43例风心二狭患者右心耳组织,实验组为并发心房颤动患者(AF组),对照组为窦性心律患者(SR组)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HCN2及HCN4的表达,分析两者的相关性。结果:RT-PCR及FQ-PCR结果均显示,AF组HCN2及HCN4表达量均高于SR组(P<0.01),AF组HCN2与HCN4表达上调率均呈现正相关(r1=0.697,P1<0.01;r2=0.659,P2<0.01)。结论:HCN2与HCN4的协同表达作用在风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动的发生发展中起重要的作用。

二尖瓣狭窄合并心房颤动患者HCN2表达与测序

目的:探讨超级化激活环核苷酸调控通道基因家族-2(HCN2)基因在风湿性心脏病二尖瓣狭窄合并心房颤动患者右心耳组织中的表达。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法分析HCN2mRNA在43例风湿性二尖瓣狭窄患者右心耳组织中的表达,并对反应产物进行测序。结果:测定HCN2基因cDNA序列同源性为100%,风湿性心脏病二尖瓣狭窄合并心房颤动组HCN2mRNA表达量明显高于窦性心律组(P<0.01),HCN2mRNA的表达与左心房内径、心胸比例呈正相关,而与二尖瓣瓣口面积呈负相关。结论:风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者并发心房颤动的发生发展过程中,HCN2mRNA表达明显上调。