超级耐药基因NDM-1实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立超级耐药基因NDM-1的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。方法针对超级耐药基因NDM-1序列,合成其特异性引物,并对反应条件进行优化,建立基于SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,观察该方法的灵敏度和重复性。结果标准品在5.21×10^(1)~5.21×10^(8) copies/μL内具有良好的线性关系,标准曲线R 2值均在0.99以上,最低检出量为5.21×10^(1) copies/μL,稳定性好。结论成功建立了超级耐药基因NDM-1的检测方法。

基于HDA的超级细菌耐药基因NDM-1检测方法的建立

本研究以建立解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成特异性引物,建立和优化了可快速检测该种基因的HDA检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR。提示HDA是一种针对NDM-1的快速、灵敏、便捷的非PCR核酸扩增技术。

探讨ESR1基因突变与乳腺癌内分泌治疗耐药机制相关性

分析乳腺癌患者内分泌治疗耐药机制与雌激素受体α基因(ESR1)突变的相关性。方法 以100例2021年7月至2022年6月在本院进行诊治的乳腺癌患者为研究对象,患者均接受手术治疗及内分泌治疗,收集患者手术后新鲜组织及白片,通过二代高通量测序技术检测血液游离循环DNA(ctDNA)的浓度,观察和对比内分泌治疗过程中ER+患者ESR1基因突变率,比较ESR1野生型及突变型ER+乳腺癌患者PFS无进展生存时间(PFS)情况,比较不同TNM分期患者ER+乳腺癌患者ESR1基因突变率。结果 随着内分泌治疗时间延长ER+患者ESR1基因突变率呈升高趋势,内分泌治疗1年内患者ESR1基因突变率高于初诊患者,差异有统计学意义(P<0.05),内分泌治疗耐药患者ESR1基因突变率高于初诊患者及内分泌治疗1年内患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ESR1突变型ER+乳腺癌患者PFS短于ESR1野生型ER+乳腺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随着TNM分期增加,ER+乳腺癌患者ESR1基因突变率呈升高趋势,不同TNM分期ER+乳腺癌患者ESR1基因突变率差异有统计学意义(P<0.05)。结论 乳腺癌患者内分泌治疗耐药机制与ESR1突变存在相关性,临床可通过检测ESR1突变情况判断和明确患者是否对内分泌治疗耐药,及时调整治疗方案以使患者生存获益,延长患者生存周期。

白介素37下调多药耐药基因-1逆转肺腺癌紫杉醇耐药的研究

目的 本研究旨在探究白介素37(IL-37)在抑制肺腺癌细胞多药耐药性方面的潜在作用,及其对于耐紫杉醇的A549/TAX细胞的影响。方法 通过细胞培养、处理程序、实时荧光定量PCR、Western blot分析和统计学分析等实验方法,系统研究了IL-37对耐紫杉醇A549/TAX细胞的影响。结果 紫杉醇明显抑制了A549和A549/TAX细胞的增殖,其中A549/TAX的耐药指数RI为16.88。100ng/mL的rhIL-37显著抑制了A549/TAX细胞的增殖。在紫杉醇和rhIL-37联合处理组,细胞增殖的抑制率显著高于仅用紫杉醇处理组(P<0.05)。此外,rhIL-37在24小时后显著抑制了A549/TAX细胞的迁移和侵袭。非细胞毒性浓度的rhIL-37也能显著抑制A549/TAX细胞的集落形成。经rhIL-37作用48小时后,A549/TAX细胞中MDR1的表达水平比对照组下降了约66%(P<0.05)。结论 IL-37与紫杉醇联合处理可有效抑制A549/TAX细胞的增殖、迁移和侵袭,同时通过降低MDR1基因的表达水平可能逆转细胞的耐药性,为IL-37在肺腺癌治疗中的潜在应用提供了实验依据。

携带bla_(NDM-1)基因泛耐药肠杆菌科细菌的检测方案

近期发现的携带blaNDM-1基因泛耐药肠杆菌科细菌引起了全球的关注。卫生部细菌耐药监测网(MOHNAR IN)组织专家,特制定了携带blaNDM-1基因泛耐药肠杆菌科细菌的检测方案,供大家参考。

携带NDM-1基因合并膜孔蛋白OmpK36缺失肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的对产新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)肺炎克雷伯菌耐药情况、分子分型特点,携带耐药基因、传播方式,及其膜孔蛋白表达情况进行分析,以探讨产NDM-1酶肺炎克雷伯菌耐药机制。方法实验菌分离自前列腺增生患者尿液的标本,对其进行细菌鉴定和药敏试验、改良Hodge试验、EDTA协同试验和多位点序列分型(MLST);采用聚合酶链技术检测β-内酰胺酶相关耐药基因和膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因,并对NDM-1和膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因进行序列分析;利用SDS-PAGE电泳检测膜孔蛋白OmpK35、OmpK36;菌株质粒接合实验分析传播方式,对受体菌和接合子进行药敏结果比较。结果实验菌改良Hodge试验阴性、EDTA协同试验阳性,鉴定为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)株,对13种常见抗生素耐药,MLST基因分子分型为ST15;PCR检测其携带NDM-1基因,经序列测定比对确认,同时该菌株还携带KPC基因及SHV基因,未检测到VIM、IMP、OXA-48、GES、GIM基因;OmpK35、OmpK36基因存正点突变及片段缺失的现象,SDS-PAGE分析发现膜孔蛋白OmpK36缺失;质粒接合实验阳性,接合子E.coliJ53对3种碳青霉烯类药物的抑菌圈明显减小。结论了解NDM-1肺炎克雷伯菌携带耐药基因类型及传播方式、膜孔蛋白是否缺失以及分子分型,为指导临床正确使用抗菌药物及流行病学调查具有重要意义。

mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌耐药基因研究

目的调查鲁中地区禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带情况,了解mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌对常用β-内酰胺类药物、氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物耐药基因的携带情况,掌握其耐药性。方法收集2020年4月至2021年10月鲁中地区3家大规模养殖场302份健康活鸡、鸭肛拭子新鲜粪便,对分离的大肠埃希菌用聚合酶链反应(PCR)检测mcr-1基因的携带率。对mcr-1阳性大肠埃希菌,采用BD凤凰hoenix TM 100 NMIC/ID-4复合板鉴定菌种及进行药敏试验,采用PCR检测各种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类修饰酶耐药基因、16S rRNA甲基化酶耐药基因和质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因。结果302份样品中共分离出291株禽源性大肠埃希菌,其中27株携带mcr-1基因,mcr-1基因携带率为9.3%。27株mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌中:超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因CTX-M-14、CTX-M-15、TEM-1携带率分别为100.00%(27/27)、70.37%(19/27)、74.07%(20/27);质粒介导AmpC酶耐药基因CMY-2携带率为14.81%(4/27);未检出bla SHV、bla DHA、OXA等β-内酰胺类药物相关耐药基因;未检出碳青霉烯酶基因;16S rRNA甲基化酶耐药基因rmtB及氨基糖苷类修饰酶耐药基因aac(6′)-Ⅰb-cr、ant(3″)-Ⅰ的携带率分别为25.93%(7/27)及25.93%(7/27)、92.59%(25/27);喹诺酮类药物耐药基因qnrS的携带率为81.48%(22/27),未检出qnrA、qnrB基因。对多黏菌素B、头孢噻肟、头孢西丁、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑表现出了100.00%耐药,对头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为85.19%、33.33%、62.96%、14.81%、25.93%和77.78%,未出现对碳青霉烯类药物耐药的菌株。结论禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带率为9.3%,是引起多黏菌素耐药的主要耐药机制。mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌同时携带多种耐药基因,表现出多重耐药的特征。

ARID1A基因突变与胃癌顺铂耐药的研究进展

胃癌在世界范围内具有很高的发病率和病死率,尤其是在东亚地区。化疗抵抗或化疗耐药仍然是影响胃癌患者预后的一个重要问题。AT丰富结合域1A(ARID1A)基因是染色质重塑复合物中的重要成员,其突变在胃癌中较为常见,并与患者的临床表现以及化疗反应密切相关。ARID1A基因的缺失或突变可能导致胃癌细胞对铂类化疗药物的耐药性增加。该文对ARID1A基因的生物学作用,顺铂耐药中DNA损伤修复及代谢重塑的改变以及ARID1A基因参与胃癌化疗耐药中的可能机制进行以下综述。

8株携带bla_(NDM-1)基因阴沟肠杆菌耐药性研究

目的对南昌大学第一附属医院发现的8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌进行相关耐药性研究。方法 2016年1月-2017年6月该院分离的501株阴沟肠杆菌中筛选145株对碳青霉烯类抗生素不敏感的阴沟肠杆菌,对其进行blaNDM-1基因筛查;运用改良碳青霉烯灭活试验(m CIM)进行碳青霉烯酶表型筛查;采用VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株体外药物敏感性试验;采用肠杆菌基因重复一致序列(ERIC)-PCR技术对blaNDM-1基因阳性菌株进行同源性分析。结果 145株对碳青霉烯类抗生素不敏感的阴沟肠杆中检出8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌,未发现其同时携带其他碳青霉烯酶基因;8株携带blaNDM-1基因的阴沟肠杆菌m CIM表型试验显示产碳青霉烯酶。药敏结果分析发现其对碳青霉烯类、头孢菌素类和青霉素类抗生素耐药率高。ERIC-PCR结果显示这8株blaNDM-1基因阳性的阴沟肠杆菌可以大致分为4个不同的基因指纹图谱型,且其在该院内存在部分克隆传播。结论该院对碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌主要是因携带blaNDM-1基因,由此产生NDM-1型碳青霉烯酶致该类细菌高度耐药,当引起重视。

山东省聊城地区耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌黏菌素耐药基因mcr-1相关感染的分子机制及临床特征

目的 探讨携带mcr-1耐药基因的耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌(CRE)相关感染的分子机制及临床特征,为该类菌株感染的临床诊疗及预防区域内传播与暴发流行提供参考依据。方法 收集聊城市第二人民医院2016年1月—2022年12月分离自临床的非重复CRE,采用乙二胺四乙酸碳青霉烯酶失活试验(eCIM)与改良碳青霉烯酶失活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶表型;采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)扩增并测序分析与黏菌素耐药相关的mcr-1基因及碳青霉烯类耐药基因;采用多位点序列分型技术(MLST)确定菌株的序列分型(ST)。收集mcr-1基因阳性菌株感染患者的病历资料,统计相关信息并进行分析。结果 共分离CRE菌株127株,包括65株大肠埃希菌,52株肺炎克雷伯菌,3株阴沟肠杆菌,3株产酸克雷伯菌,2株奇异变形杆菌,以及产气肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌各1株。所有CRE菌株中有6株携带mcr-1基因,且同时为blaNDM-5基因阳性。携带mcr-1的6株CRE仅对替加环素具有较高的敏感性,表现为低水平耐药。MLST分型结果显示有4种不同的ST型别,其中2株为ST167,2株为ST410,其余2株分别株为ST48和ST361。6例患者的性别、年龄、抗菌药物使用史、基础疾病及病情严重程度均不同,各项感染指标有不同程度的升高,患者最终均治愈出院。结论 黏菌素耐药基因mcr-1在聊城地区临床分离的CRE中检出率较低且呈低水平耐药,但已发现该基因与碳青霉烯酶耐药基因共存的现象,需引起临床重视并加强监测。

产NDM-1阴沟肠杆菌的耐药性与毒力基因分布

目的了解产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)阴沟肠杆菌(ECL)耐药性与毒力基因分布情况。方法收集2017年1月—2020年11月昆明医科大学第一附属医院分离的ECL,试验组为29株产NDM-1的耐碳青霉烯类ECL(CRECL),对照组为32株不产NDM-1的CRECL和35株碳青霉烯类敏感ECL(CSECL)。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)、全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,PCR方法检测NDM-1耐药基因、24对毒力基因,采用χ^(2)检验比较毒力基因分布差异。结果该院分离的CRECL菌株NDM-1基因检出率为47.5%,产NDM-1的CRECL对常用抗菌药物表现为多重耐药。96株ECL菌株中,毒力基因acr A、tol C、wca A、wca M、wza的检出率较高,分别为80.2%、90.6%、87.5%、75.0%、92.7%,clp B、icmf、V as D/L ip基因的检出率也均在60%以上,未检出esc V、nle B、pet、hly A等毒力基因。产NDM-1的CRECL组clp B、icmf、V as D/L ip、acr A基因检出率高于不产NDM-1的CRECL,CRECL组clp B、icmf、V as D/L ip基因检出率高于CSECL组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论产NDM-1 CRECL耐药形势严峻而且毒力基因的携带率也增高,临床用药应兼顾细菌的耐药性和毒力基因分布情况。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC和NDM-1β内酰胺酶耐药基因的研究

目的检测江苏盛泽医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的KPC和NDM-1耐药基因,分析耐碳青霉烯类的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌产酶情况;用PCR方法检测KPC及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果 29株分离菌中,26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南-EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC型碳青霉烯酶耐药基因,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论该院耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的耐药机制主要是携带KPC型碳青霉烯酶基因。

大肠埃希菌质粒介导的blaNDM-1基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带blaNDM-1基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1-12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行blaNDM-1基因筛查,并对blaNDM-1基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将blaNDM-1基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对blaNDM-1基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带blaNDM-1基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的blaNDM-1基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的blaNDM-1基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带blaNDM-1基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带blaNDM-1基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导blaNDM-1基因的水平传播。

1株携带bla_(NDM-1)的临床多重耐药豚鼠气单胞菌的基因组及表型鉴定

目的分析从粪便筛查分离出的产NDM-1型碳青霉烯酶的豚鼠气单胞菌(XX182)的抗菌药物耐药表型和基因组特征,阐明该菌株的抗菌药物耐药机制及其耐药性转移的能力。方法肉汤微量稀释法检测该菌株的抗菌药物敏感性,PCR检测碳青霉烯酶耐药基因亚型(bla_(NDM)、bla_(VIM)、bla_(IMP)、bla_(KPC)),接合试验检测耐药基因的可转移性,通过全基因组测序(WGS)和生物信息学分析明确该菌株的基因组特征。结果该菌株对头孢菌素、碳青霉烯类、环丙沙星和多黏菌素耐药,对替加环素、阿米卡星和氨曲南敏感。该菌株携带多种抗菌药物耐药基因,主要包括bla_(NDM-1)、bla_(MOX-6)、bla_(RSA-1)、bla_(TEM-1)、aac(3)-Ⅱd、cmlA5、arr-2等。毒力因子分析发现其携带有极鞭毛、侧鞭毛、Ⅵ型分泌系统(T6SS)和溶血素A等毒力因子。结论该豚鼠气单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药主要由产NDM-1型碳青霉烯酶导致,且bla_(NDM-1)耐药基因位于不可接合质粒上。尽管目前气单胞菌属对碳青霉烯类耐药率较低,但仍应加强对该克隆菌株的监测。

基因捕获元件int1和ISCR1在临床菌株中的分布及与细菌耐药性的关系研究

目的研究临床多种细菌中的Ⅰ型整合酶编码基因int1和ISCR1的分布情况,探究其与细菌多药耐药表型的关系。方法收集2011-2012年河北省某医院临床菌株,应用VITEK2COMPACT全自动微生物生化鉴定系统和16SrDNA序列分析进行种属鉴定,利用PCR方法进行int1基因和ISCR1筛查;两种可移动元件的携带情况和菌株的多药耐药表型之间的关系采用卡方检验进行统计计算。结果共收集临床菌株372株,包括325株革兰氏阴性菌和47株革兰氏阳性菌;int1基因和ISCR1在22种(属)175株和18种(属)90株革兰氏阴性细菌中检出,同时在17种(属)71株革兰氏阴性细菌中检出,革兰氏阳性细菌int1基因和ISCR1检测均为阴性;通过对数据分层对比,统计分析发现,在int1基因不存在时,ISCR1的存在与否与菌株是否为多药耐药的关系明显,差异有统计学意义(P<0.01),其存在亦能介导更广泛种类药物耐受,差异亦有统计学意义(P<0.01)。在int1基因存在时,ISCR1的存在能介导更广泛种类药物耐受,差异有统计学意义(P=0.02);在ISCR1不存在时,int1基因的存在与否与菌株是否多药耐药的关系明显,差异有统计学意义(P<0.01),其存在亦能介导更广泛种类药物耐受,差异亦具有统计学意义(P<0.01)。而在ISCR1存在的情况下,上述两种关系不明显。结论基因捕获元件int1基因及ISCR1在革兰氏阴性临床菌株中分布广泛,并与细菌的多重耐药、泛耐药明显相关,特别是ISCR1;应加强可移动元件int1基因或ISCR1流行状况的监测,为其在耐药基因捕获中的作用机制研究和控制多药耐药细菌在临床散播提供可靠的基础数据。

动物源碳青霉烯耐药基因blaNDM-1阳性IncHI5质粒的发现

碳青霉烯类抗生素因其具有良好的抗菌活性和稳定性,被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的"最后一道防线"。虽然碳青霉烯类药物禁止用于畜牧养殖业,但碳青霉烯耐药菌株已在我国动物源细菌中出现。作为耐药基因重要的储存库之一,动物源耐药菌的产生和流行不仅阻碍了畜牧养殖业的健康发展.

RNA干扰技术抑制耐药细胞MDR1基因表达的研究

目的:探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)抑制MDR1基因的表达,并逆转卵巢癌耐药细胞多药耐药的可行性。方法:浓度梯度诱导法和人MDR1基因载体转染法建立阿霉素耐药细胞株OVCAR/AR和多药耐药亚株OVCAR/MDR细胞。脂质体介导将MDR1特异性siRNA的表达载体(pSN/mdr1a和pSN/mdr1b)转染耐药细胞,实时定量RT-PCR方法检测MDRl mRNA的表达,流式细胞术检测P-gp的表达,MTT法检测耐药细胞对化疗药的抵抗性。结果:耐药细胞OVCAR/MDR细胞MDR1 mRNA的表达高于OVCAR/AR细胞,两者均高于其亲代细胞OV-CAR-3;转染pSN/mdr1a和pSN/mdr1b可显著抑制两株耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达,OVCAR/MDR和OV-CAR/AR细胞对阿霉素抗药性的逆转率分别为79.5%和93.9%。结论:载体表达的MDR1特异性siRNA可抑制卵巢癌耐药细胞亚株MDR1基因的表达,因而增加耐药细胞对化疗药物的敏感性。

细胞色素P450 3A5和多药耐药基因1基因多态性在肾移植患者他克莫司血药浓度监测中的应用

目的 :研究细胞色素P4 5 0 3A5 (CYP3A5 )和多药耐药基因 1 (MDR1 )基因多态性对他克莫司 (FK5 0 6 )血药浓度的影响 ,探讨FK5 0 6在不同个体间吸收、代谢差异的基因背景 ,建立个体化用药的药物代谢遗传学监控体系。 方法 :观察 1 1 8例肾移植术后常规使用FK5 0 6 +霉酚酸酯 +强的松三联免疫抑制治疗的成年患者 ,记录体重 ,FK5 0 6剂量 ,术后第 7天、术后 1个月和术后 3个月的FK5 0 6全血谷浓度等指标。采用PCR 限制性长度多态性的方法检测CYP3A5 1 / 3和MDR1 3435位点C/T多态性 ,比较不同基因型之间FK5 0 6的浓度 /剂量比的差异。 结果 :CYP3A5基因为 1 / 1、 1 / 3和 3/ 3型的患者数分别有 1 2、36和 70例。 1 / 1型和 1 / 3型患者的FK5 0 6浓度 /剂量比明显低于 3/ 3型的患者 (术后第 7天分别为 32 8± 1 7 7,4 1 6± 1 5 8,1 0 2 3± 5 1 2 ;术后 1个月分别为 33 1± 7 5 ,4 6 4± 1 2 9,1 0 3± 4 7 5 ;术后 3个月分别为 35 3± 2 0 9,5 9 0± 2 0 6 ,1 5 0± 85 3;P均 <0 0 0 1 ) , 1 / 1纯合子患者的血药浓度略低于 1 / 3杂合子 ,具有统计学意义 (术后第 7天P >0 0 5 ,术后 1个月和 3个月P <0 0 1 )。动态观察MDR1基因型与FK5 0 6血药浓度之间无明显相关性。 结论 :?

多药耐药基因-1高表达可加剧类风湿关节炎患者对氨甲蝶呤的耐药

目的观察多药耐药基因-1(MDR1)在类风湿关节炎(RA)患者氨甲蝶呤(MTX)耐药中的作用。方法体外利用重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),获得MDR1过表达RA FLS。采用Real-time PCR和Western blot法检测MDR1过表达RA FLS中 MDR1基因转录水平及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的表达水平,罗丹明123外排实验验证MDR1过表达RA FLS外排罗丹明123功能,MTT法检测MDR1过表达RA FLS对MTX的耐药性。结果重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA FLS 72 h后,MDR1过表达RA FLS细胞内颗粒增加,细胞体积变大,生长速度变慢。MDR1过表达组RA FLS中MDR1 mRNA表达水平(1.4325±0.3924比0.0650±0.0070;t=6.035, P=0.004)、 P-gp 蛋白表达水平(1.8667±0.2857比 0.9367±0.0551;t=5.536, P=0.005)和细胞外排罗丹明123能力(979.43±196.81比1680.06±147.04;t=-4.940, P=0.008)均明显高于阴性病毒对照组。MTX各个浓度下MDR1过表达RA FLS的存活率均显著增高( P 均<0.05)。结论MDR1基因高表达可通过上调P-gp蛋白的表达影响RA FLS对MTX的外排能力,从而增强RA FLS对MTX的耐药性。

人脑胶质瘤耐药基因mdr1、ERCC2、MGMT的表达及相关性分析

目的：探讨人脑胶质瘤组织中三种耐药基因 mdr1、 ERCC2和 MGMT mRNA表达之间的相关性。方法：采用双管 RT- PCR方法检测 14例正常脑组织和 56例人脑胶质瘤组织中 mdr1、 ERCC2和 MGMT mRNA水平，并分析其相关性。结果：正常脑组织中 mdr1、 ERCC2和 MGMT的表达量分别为 (0.75± 0.36)， (1.43± 0.92)和 (2.48± 1.83)， mdr1和 ERCC2、 ERCC2和 MGMT之间具相关性 (P< 0.01和 P< 0.001)；胶质瘤组织中三种基因表达量分别为 (0.53± 0.42)， (1.75± 1.16)和 (2.88± 1.92)， ERCC2和 MGMT之间具极显著相关性 (P< 0.001)。结论： ERCC2和 MGMT基因的表达之间可能具有内在的联系，共同参与细胞对 DNA损伤的修复，并形成耐药；而 mdr1与上述两者之间不具有这种关系。