超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法——介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操作灵活 ,用途更广 ;谱带清晰 ;每次可实验的样本量大 ;电泳所需时间短 ;实验费用低 ;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析 ;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存 ;样本用量少。

应用超薄层平板聚丙烯酰胺等电聚焦电泳分析伊氏锥虫可溶性抗原的初步研究

将广西骡株伊氏锥虫通过生物增殖，ＤＥＡＥ纯化，反复冻融，１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟，得到伊氏锥虫可溶性抗原（ＳＡｇ），在１０℃，１５００Ｖ，３ＯｍＡ，２５Ｗ的条件下进行起薄层聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，结果出现１８条蛋白带。各自的等电点为４．６２、４．８２、４．９６、５．０３、５．１０、５．１３、５．２２、５．３２、５．４４、５．５１、５．６５、５．７２、５．９６、６．０２、６．０９、６．３０、６．５６、７．３。各条蛋白带的绝对含量为０．０２、０．０４、０．０２、０．０４、０．７１、０．０２、０．８０、０．４２、６．００、１０．５４、９．９７、７．９２、１１．８４、１５．１８、９．７８、３．４３、３．０６、３．１８μｇ。等电点在５．４４～６．０９之间的蛋白分子是伊氏锥虫可溶性抗原的主体。

用聚丙烯酰胺薄层平板等电聚焦测定明胶等电点分布的研究

通过对聚丙烯酰胺薄层平板等电聚焦电泳的系统研究,建立了一套适合于分析明胶等电点分布的薄层平板等电聚焦电泳技术。实验结果表明,明胶等电聚焦要求相当低的凝胶浓度、较高的电功率和较长的电泳时间,这是由于明胶中含有较大的分子量级分及其松散的构象所致。在建立方法的基础上,测试了大量的照相明胶等电点分布,发现明胶分子等电点分布是由一系列不连续级分所组成,其中含量最大的主级分则对明胶的等电点及分布起主导作用。

新型电泳介质——超薄层聚丙烯酰胺凝胶膜的制备及特性

本文报道超薄层聚丙烯酰胺凝胶电泳膜的制备及特性。该膜是用丙烯酰胺单体聚合在醋酸纤维素微孔膜的支撑体上,制备方法简便;具有染色、脱色容易的特点;分离血清蛋白可得十条区带。可调节单体浓度来控制凝胶膜的孔径。实验表明凝胶单体浓度与血清蛋白的泳动度对数基本上呈直线关系。

全唾液中蛋白质含量检测及其等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的 :探讨唾液成分的变化 ,观察其与疾病发生、发展的关系。方法 :收集无口腔疾患的健康人 10 3例、牙周炎患者 2 6例、口腔颌面部恶性肿瘤患者 41例全唾液标本 ,采用Lowry法、等电聚焦 (IEF)和聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳方法进行分析。结果 :①正常人组、牙周炎和肿瘤组全唾液中蛋白质含量 (mg/ml)分别为 1.0 9± 0 .2 4、1.11± 0 .0 9和 1.0 5± 0 .0 5(P >0 .0 5) ,牙周炎组及肿瘤组与正常人组相差不显著。②肿瘤组蛋白质等电点区带较正常人组数量略有增加 ,但其区带的分布与正常人组未见明显差异 ;正常人组和牙周炎组蛋白质的等电点区带总数分别为 3 0条和 3 9条 ,其等电点区带与正常人在数量和区带分布上均不相同。当pH偏酸或偏碱的情况下 ,其数量均相应发生变化 ,其中 pH偏碱时表现更为显著 ,少量增加表现在 pH偏酸区域。③正常人与肿瘤全唾液的SDS PAGE样本区带数量分别为 6.4和6.2 4,其区别主要在于 50 0 0 0～ 52 0 0 0、770 0 0、3 80 0 0等不同相对分子质量区域以及 3 0 0 0 0以下相对分子质量附近区域可见新的区带分布。结论 :牙周炎状态以及肿瘤发生时 ,唾液蛋白质总含量虽变化不显著 ,但SDS PAGE、IEF图谱蛋白质区带的等电点及相对分子质量的分布区域发生改变 ,表明唾液分泌蛋白质?

超薄层等电聚焦技术检测β-内酰胺酶

分析性等电聚焦电泳是蛋白质分析中高分辨的技术之一,也是对β-内酰胺酶进行分类的重要依据手段。该技术利用各型β-内酰胺酶的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中对β-内酰胺酶进行分离和分析。本文采用国产试剂,建立超薄层(0.2mm)

应用窄范围两性电解质聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法检验人血痕中的Gc亚型

采用窄范围两性电解质聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦加免疫吸印技术,对人血痕中 Gc 亚型进行分型,并调查了北京地区284名无关汉族群体的 Gc 亚型的分布及基因频率。结果显示:Gc^(IF)0.4287,Gc^(IS)0.2500.Gc^20.3222.观察值与期望值吻合度良好(ΣX^2=0.7530,P>0.80).Gc 的个人识别率为0.6507.且室温下保存7周的血痕可以准确判型。将调查结果与中国其它地区及国外不同人种 Gc 亚型的表型的分布与基因频率进行了比较,发现地理及人种间差异明显。

超薄层分析性等电聚焦电泳技术在β-内酰胺酶检测中的应用

采用“拍板技术”(Flap technique),自制超薄层(0.2mm)聚丙烯酰胺凝胶板.检测了九株Ceftazidime耐药细菌的β-内酰胺酶,并与标准染色体介导的β-内酰胺酶进行比较。除R27853具有两条酶带外,其余均为一条酶条。R1006,R8701,R884三种酶的等电点(pI)与标准酶D-31一致,pI为8.6;R222,R1029两种酶的pI与标准酶P99吻合,pI为8.0。同时,还发现了pI为8.2的R27853和pI为8.4的R471、R855、R875四种酶,目前尚未见文献报道。这一超薄层凝胶技术具有操作简便、快速、灵敏、省时,便于同步比较多个样品及实验结果更易保存等优点,可用作β-内酰胺酶的鉴定与分类,以及进行蛋白质成份分析的方法。

超薄层等电聚焦电泳技术检验燕麦种子的真实性

利用种子醇溶蛋白超薄层等电聚焦电泳(UTL IEF)技术对青海和河北省燕麦属(A vena spp)16个品种真实性进行了比较分析。结果表明,参试样品的种子醇溶蛋白UTL IEF电泳图谱共分离出34条不同迁移率的谱带;依据蛋白电泳图谱等电点(P I值)为4.8、6.55、6.9、7.7、8.4和8.6等位置谱带的有无以及数目,可鉴别16个参试样品中的13个样品;对同一样品的整粒种子、1/2粒和1/4粒种子,以及人工老化处理获得的同一样品不同发芽率的种子进行超薄层等电聚焦电泳,结果表明破损程度到1/2粒种子和不同生活力种子甚至死种子对电泳鉴定结果基本没有影响。

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定烟草品种

在本实验条件下 ,得到的 8个烟草品种种子的可溶性蛋白质的 SOD-聚丙烯酚胺凝胺电泳 ( SDS- PAGE)和聚丙烯酚胺等电聚焦电泳 ( IEF- PAGE)图谱 ,分辩率高 ,重复性强 ,其多态性条带分别占 6 1.5 %和 5 2 .6 % ,各品种的电泳图谱可以相互区别 ,表明种子的可溶性蛋白的 SDS- PAGE和 IFF-

草坪种子品种快速鉴定技术研究 I超薄层等电聚焦(IEF)电泳技术

草坪草种的品种真实性鉴定是评定草种质量的重要指标。依据《国际种子检验规程》 ,采用等电聚焦电泳技术对适于西北地区的几种冷季型草坪草种进行了品种真实性鉴定研究 ,确定了两性电解质的pH值范围、酶提取液浓度及最佳取材时间 ,证明等电聚焦电泳方法是鉴别草坪草品种的有效测定技术。

非平衡超薄层等电聚焦同步检测EsD,EAP,ADA同功酶

在超薄层聚丙烯酰胺凝胶溶液中加入生化缓冲剂N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)进行等电聚焦,对血样中的酯酶D(Esterase D,EsD),酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,EAP)和腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)等同功酶同步进行了分型。与普通电泳和常规等电聚焦相比,该法快速,可靠,分辨率高,适合对多个同功酶系统同时进行测定。

利用超薄层等电聚焦电泳技术对燕麦种子进行蛋白多态性和品种鉴定方法的研究

本文探索研究了利用超薄层等电聚焦电泳进行燕麦品种鉴定所需的各种试验条件。结果显示:燕麦种子贮藏蛋白以醇溶蛋白为主,水溶蛋白次之,盐溶蛋白最少,因此应将醇溶蛋白作为燕麦品种鉴定的生化标记;一次性提取法与分步提取法相比,步骤较为简单,需时短,所得电泳谱带较多,更适用于燕麦种子蛋白提取;4种醇溶蛋白提取液中,以1%(V／V)巯基乙醇+1mol/L(W／V)尿素+乙二醇溶液所得电泳效果最佳,确定其为燕麦种子醇溶蛋白提取液以进一步研究。

应用超薄层琼脂糖凝胶等电聚焦技术检测人红细胞酸性磷酸酶表型

应用超薄层琼脂糖凝胶等电聚焦（ＵＬＡＧＩＦ），随机检测武汉地区５１１例健康成人红细胞酸性磷酸酶（ＥＡＰ）表现型，结果ＥＡＰ－Ａ型２４例（４．７０％），ＥＡＰ－ＢＡ型１７３例（３３．８６％），ＥＡＰ－Ｂ型３１４例（６１．４５％），计算出基因频率ＥＡＰａ＝０．２１６２，ＥＡＰｂ＝０．７８３８。经Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡公式检验Ｐ＞０．９９５，吻合度良好，频率分布与北京、西安、辽宁等地区对比差异无显著性意义，室温保存６周血痕ＥＡＰ分型无困难，为法医物证学提供了一项灵敏、可靠的检测方法。

超薄层等电聚焦电泳检测红细胞PGM_1亚型

我们采用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（UTL PAGIEF）电泳技术检测了红细胞PGM1亚型,并对郑州地区356例汉族无关健康个体进行了PGM1亚型分析。现将结果报告如下: 表1为郑州地区356例无关健康个体的PGM1亚型分布。按Hardy-Weinberg平衡定律进行吻合度检验,x2=4.3154;df=6;0.50【p【0.75。

三种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用

目的探讨3种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用。方法用普通聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳(PAGE)、等电聚焦提纯电泳(IEF)和等速提纯电泳(ITP)对样品进行分离。结果3种提纯电泳均可分离蛋白质。PAGE的区带分辨率低,加样量不高;IEF的区带分辨率最高,可分离同种蛋白的亚成分,加样量最小;ITP区带分辨率较高,可将样品分成单一成分,加样量最大。结论低离子强度提纯电泳是可行的,分离效果令人满意。

盐溶蛋白超薄层等电聚焦电泳技术鉴定近缘玉米杂交种

利用盐溶蛋白超薄层等电聚焦电泳技术对6个同父异母、5个同母异父共11个玉米杂交种进行检测分析,通过试验共获得32条不同迁移率的谱带,其中62.5%的谱带具有多态性,可将所有供试的玉米杂交种区分开。结果表明,该技术不但操作简单、快速,而且分辨率高,可用于快速鉴定血缘关系较近的玉米杂交种。

聚丙烯酰胺压裂液流变行为影响因素研究

通过考察聚丙烯酰胺(PAM)压裂液质量分数,温度,pH及金属离子研究了聚丙烯酰胺压裂液的黏度。结果表明,增加PAM质量分数,压裂液黏度上升,非牛顿性增强,质量分数1.0%PAM压裂液黏度可达到施工要求;温度升高,压裂液黏度下降,非牛顿性减弱;改变PAM压裂液的pH环境也可造成黏度下降;金属离子对PAM黏度影响从大到小顺序依次为Mg2+>Ca2+>Na+>K+,符合扩散电层理论。静态悬砂实验表明,聚丙烯酰胺压裂液在质量分数为1.0%及60℃时,悬砂沉降速度达14.88 min/cm,能满足压裂液携砂标准。