超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法——介绍一种高效、快速的生物同工酶分析方法

介绍了一种简易、高效、快速的生物同工酶分析方法——超薄平板微型聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳方法。该方法与目前国内外市场销售的同种用途等电聚焦的产品 (如BIO- RAD公司的 model1 1 1 Mini IEF Cell)相比 ,具有以下优点 :实验操作灵活 ,用途更广 ;谱带清晰 ;每次可实验的样本量大 ;电泳所需时间短 ;实验费用低 ;适用于多种酶系统的同工酶和等位酶分析 ;凝胶干燥不需任何设备且能长期保存 ;样本用量少。

全唾液中蛋白质含量检测及其等电聚焦、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的 :探讨唾液成分的变化 ,观察其与疾病发生、发展的关系。方法 :收集无口腔疾患的健康人 10 3例、牙周炎患者 2 6例、口腔颌面部恶性肿瘤患者 41例全唾液标本 ,采用Lowry法、等电聚焦 (IEF)和聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳方法进行分析。结果 :①正常人组、牙周炎和肿瘤组全唾液中蛋白质含量 (mg/ml)分别为 1.0 9± 0 .2 4、1.11± 0 .0 9和 1.0 5± 0 .0 5(P >0 .0 5) ,牙周炎组及肿瘤组与正常人组相差不显著。②肿瘤组蛋白质等电点区带较正常人组数量略有增加 ,但其区带的分布与正常人组未见明显差异 ;正常人组和牙周炎组蛋白质的等电点区带总数分别为 3 0条和 3 9条 ,其等电点区带与正常人在数量和区带分布上均不相同。当pH偏酸或偏碱的情况下 ,其数量均相应发生变化 ,其中 pH偏碱时表现更为显著 ,少量增加表现在 pH偏酸区域。③正常人与肿瘤全唾液的SDS PAGE样本区带数量分别为 6.4和6.2 4,其区别主要在于 50 0 0 0～ 52 0 0 0、770 0 0、3 80 0 0等不同相对分子质量区域以及 3 0 0 0 0以下相对分子质量附近区域可见新的区带分布。结论 :牙周炎状态以及肿瘤发生时 ,唾液蛋白质总含量虽变化不显著 ,但SDS PAGE、IEF图谱蛋白质区带的等电点及相对分子质量的分布区域发生改变 ,表明唾液分泌蛋白质?

超薄层分析性等电聚焦电泳技术在β-内酰胺酶检测中的应用

采用“拍板技术”(Flap technique),自制超薄层(0.2mm)聚丙烯酰胺凝胶板.检测了九株Ceftazidime耐药细菌的β-内酰胺酶,并与标准染色体介导的β-内酰胺酶进行比较。除R27853具有两条酶带外,其余均为一条酶条。R1006,R8701,R884三种酶的等电点(pI)与标准酶D-31一致,pI为8.6;R222,R1029两种酶的pI与标准酶P99吻合,pI为8.0。同时,还发现了pI为8.2的R27853和pI为8.4的R471、R855、R875四种酶,目前尚未见文献报道。这一超薄层凝胶技术具有操作简便、快速、灵敏、省时,便于同步比较多个样品及实验结果更易保存等优点,可用作β-内酰胺酶的鉴定与分类,以及进行蛋白质成份分析的方法。

超薄层等电聚焦电泳技术检验燕麦种子的真实性

利用种子醇溶蛋白超薄层等电聚焦电泳(UTL IEF)技术对青海和河北省燕麦属(A vena spp)16个品种真实性进行了比较分析。结果表明,参试样品的种子醇溶蛋白UTL IEF电泳图谱共分离出34条不同迁移率的谱带;依据蛋白电泳图谱等电点(P I值)为4.8、6.55、6.9、7.7、8.4和8.6等位置谱带的有无以及数目,可鉴别16个参试样品中的13个样品;对同一样品的整粒种子、1/2粒和1/4粒种子,以及人工老化处理获得的同一样品不同发芽率的种子进行超薄层等电聚焦电泳,结果表明破损程度到1/2粒种子和不同生活力种子甚至死种子对电泳鉴定结果基本没有影响。

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定烟草品种

在本实验条件下 ,得到的 8个烟草品种种子的可溶性蛋白质的 SOD-聚丙烯酚胺凝胺电泳 ( SDS- PAGE)和聚丙烯酚胺等电聚焦电泳 ( IEF- PAGE)图谱 ,分辩率高 ,重复性强 ,其多态性条带分别占 6 1.5 %和 5 2 .6 % ,各品种的电泳图谱可以相互区别 ,表明种子的可溶性蛋白的 SDS- PAGE和 IFF-

草坪种子品种快速鉴定技术研究 I超薄层等电聚焦(IEF)电泳技术

草坪草种的品种真实性鉴定是评定草种质量的重要指标。依据《国际种子检验规程》 ,采用等电聚焦电泳技术对适于西北地区的几种冷季型草坪草种进行了品种真实性鉴定研究 ,确定了两性电解质的pH值范围、酶提取液浓度及最佳取材时间 ,证明等电聚焦电泳方法是鉴别草坪草品种的有效测定技术。

利用超薄层等电聚焦电泳技术对燕麦种子进行蛋白多态性和品种鉴定方法的研究

本文探索研究了利用超薄层等电聚焦电泳进行燕麦品种鉴定所需的各种试验条件。结果显示:燕麦种子贮藏蛋白以醇溶蛋白为主,水溶蛋白次之,盐溶蛋白最少,因此应将醇溶蛋白作为燕麦品种鉴定的生化标记;一次性提取法与分步提取法相比,步骤较为简单,需时短,所得电泳谱带较多,更适用于燕麦种子蛋白提取;4种醇溶蛋白提取液中,以1%(V／V)巯基乙醇+1mol/L(W／V)尿素+乙二醇溶液所得电泳效果最佳,确定其为燕麦种子醇溶蛋白提取液以进一步研究。

超薄层等电聚焦技术检测β-内酰胺酶

分析性等电聚焦电泳是蛋白质分析中高分辨的技术之一,也是对β-内酰胺酶进行分类的重要依据手段。该技术利用各型β-内酰胺酶的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中对β-内酰胺酶进行分离和分析。本文采用国产试剂,建立超薄层(0.2mm)

超薄层等电聚焦电泳检测红细胞PGM_1亚型

我们采用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（UTL PAGIEF）电泳技术检测了红细胞PGM1亚型,并对郑州地区356例汉族无关健康个体进行了PGM1亚型分析。现将结果报告如下: 表1为郑州地区356例无关健康个体的PGM1亚型分布。按Hardy-Weinberg平衡定律进行吻合度检验,x2=4.3154;df=6;0.50【p【0.75。

三种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用

目的探讨3种聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳在蛋白质提纯中的应用。方法用普通聚丙烯酰胺凝胶提纯电泳(PAGE)、等电聚焦提纯电泳(IEF)和等速提纯电泳(ITP)对样品进行分离。结果3种提纯电泳均可分离蛋白质。PAGE的区带分辨率低,加样量不高;IEF的区带分辨率最高,可分离同种蛋白的亚成分,加样量最小;ITP区带分辨率较高,可将样品分成单一成分,加样量最大。结论低离子强度提纯电泳是可行的,分离效果令人满意。

盐溶蛋白超薄层等电聚焦电泳技术鉴定近缘玉米杂交种

利用盐溶蛋白超薄层等电聚焦电泳技术对6个同父异母、5个同母异父共11个玉米杂交种进行检测分析,通过试验共获得32条不同迁移率的谱带,其中62.5%的谱带具有多态性,可将所有供试的玉米杂交种区分开。结果表明,该技术不但操作简单、快速,而且分辨率高,可用于快速鉴定血缘关系较近的玉米杂交种。

应用窄范围两性电解质聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法检验人血痕中的Gc亚型

采用窄范围两性电解质聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦加免疫吸印技术,对人血痕中 Gc 亚型进行分型,并调查了北京地区284名无关汉族群体的 Gc 亚型的分布及基因频率。结果显示:Gc^(IF)0.4287,Gc^(IS)0.2500.Gc^20.3222.观察值与期望值吻合度良好(ΣX^2=0.7530,P>0.80).Gc 的个人识别率为0.6507.且室温下保存7周的血痕可以准确判型。将调查结果与中国其它地区及国外不同人种 Gc 亚型的表型的分布与基因频率进行了比较,发现地理及人种间差异明显。

非平衡超薄层等电聚焦同步检测EsD,EAP,ADA同功酶

在超薄层聚丙烯酰胺凝胶溶液中加入生化缓冲剂N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)进行等电聚焦,对血样中的酯酶D(Esterase D,EsD),酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,EAP)和腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase,ADA)等同功酶同步进行了分型。与普通电泳和常规等电聚焦相比,该法快速,可靠,分辨率高,适合对多个同功酶系统同时进行测定。

AZTREONAM与阴沟杆菌β-内酰胺酶相互作用的等电聚焦电泳分析

用超薄层等电聚焦电泳（STL-IEF）研究β-内酰胺抗生素和β-内酰胺酶相互作用过程对分析以酶介导的细菌对抗生素耐药有重大临床意义。取不同剂量Aztreonam（AZ）和4.0mg/ml耐AZ阴沟杆菌1029β-内酰胺酶于25℃混和孵育不同时间,观察酶活性及等电点（PI）变化情况,当AZ浓度为10-5Mol时,孵育至0.5h,18h及36h。

一种改良的薄层等电聚焦电泳新方法

目的介绍一种高效新颖的IFE方法。方法采用簿层等电聚焦电泳。结果该方法简便实用,并可节省昂贵试剂的用量。结论此方法可用于药物蛋白质成分的研究。

苦瓜水溶蛋白超薄等电聚焦电泳条件的优化

为了建立等电聚焦电泳进行苦瓜种子纯度及品种真实性鉴定的技术体系,本试验利用苦瓜水溶蛋白进行超薄等电聚焦电泳条件优化,结果表明,在0.15 mm超薄层凝胶和1 mm普通凝胶对比中,超薄层凝胶电泳效果最好,基本无背景、条带多,节省药品;1.5 h是提取苦瓜水溶蛋白的最佳时间;10μl是最佳上样量;半粒种子加蛋白提取液效果最好的是0.6 ml。

单克隆抗体的超薄琼脂糖等电聚焦

单克隆抗体(McAb)lgG和IgM都具有各自不同的等电点(PI)所以测定它们的PI是鉴定和研究McAb性质不可缺少的项目之一。进行等电聚焦(IEF)最常用的抗对流介质虽是聚丙烯酰胺胶,但因该胶的适合分子量超过400KD以上的样品,而McAblgM的分子量约为800KD。

等电聚焦电泳测定糖化血红蛋白

建立超薄层平板聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＩＥＦ）的方法测定糖化血红蛋白（ＨｂＡ１ｃ）。取正常人及糖尿病人血９７例，制成血红蛋白溶液，使用瑞典ＬＫＢ公司等电聚焦电泳及激光扫描设备，用０．５ｍｍ聚丙烯酰胺平板凝胶及两性载体电解质进行电泳分离，凝胶经固定、染色、脱色后，激光扫描定量。糖化血红蛋白对照组平均值ｘ±ｓ＝５．０４％±１．４３％，糖尿病人１１．１７％±２．２５％，Ｐ＜０．０１，血糖值与糖化血红蛋白值有显著相关性，ｒ＝０．９３６，回归方程Ｙ＝０．７６２＋０．９００Ｘ。该法与其他方法相比，标本用量少，分辨率高，重复性好。