两种不同方法提取骨髓间充质干细胞来源外泌体的比较

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体的提取方法。方法 提取大鼠原代BMMSCs,分别采用超速差速离心法和ExoQuick-TC^(TM)法提取外泌体,随后采用透射电子显微镜(TEM)观察形态特征,BCA测定蛋白浓度,Western blot检测典型标志蛋白质,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)分析其粒径。结果 通过TEM和NTA分析表明,两种提取方法均可得到具有双层膜、茶托样结构的囊泡,直径为30~150 nm。超速差速离心法提取的外泌体颗粒浓度[(399.00±55.56)×10^(8)particles·mL^(-1)vs.(7.94±0.50)×10^(8)particles·mL^(-1)]及电镜下数量[(13.53±2.55)个vs.(1.60±0.20)个]均较ExoQuick-TCTM法增加(P均<0.05),粒径峰值[(109.53±6.45)nm]较ExoQuick-TCTM法[(139.27±1.45)nm]降低(P<0.05)。BCA测定蛋白浓度显示,超速差速离心法提取的外泌体蛋白浓度[(12.43±0.98)mg·mL^(-1)]较ExoQuick-TCTM法[(4.30±0.48)mg·mL^(-1)]增高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,超速差速离心法提取的外泌体标志性蛋白CD63和CD81的表达呈阳性,而ExoQuick-TC^(TM)法提取的外泌体呈阴性。结论 超速差速离心法是一种更为可靠有效的BMMSCs外泌体提取方法。