Cryoloop和CPS超速玻璃化冷冻人三原核胚胎效果比较

目的:比较冷冻环(Cryoloop)和闭合型拉细麦管(CPS)超速玻璃化冷冻方法冻存人早期卵裂期胚胎的效果差异,以期建立1种有效的超速玻璃化冷冻方法。方法:将人三原核孕卵发育形成的126个6-10细胞胚胎随机分为3组:对照组30个、Cryoloop组36个和CPS组60个。通过形态学观察,比较胚胎复苏后存活率;经罗丹明123染色,激光扫描共聚焦显微镜摄片分析,测定复苏后存活胚胎线粒体跨膜电位(△Ψm)。结果:Cryoloop组复苏后胚胎存活率达100%,显著高于CPS组(P<0.05);Cryoloop组△Ψm显著高于CPS组(P<0.05),而与未冷冻对照组相比,无明显差异(P>0.05)。结论:Cryoloop超速玻璃化冷冻法获得了更高的胚胎存活率和胚胎活力,该方法更适于冷冻人早期卵裂期胚胎。

超速玻璃化冷冻载体Cryotop和Cryoloop冻存小鼠卵裂期胚胎的效果比较

目的应用冷冻薄膜(Cryotop)和冷冻环(Cryoloop)两种超速玻璃化冷冻载体,氯化胆碱替代氯化钠的低钠磷酸盐缓冲液配置的玻璃化冷冻保护剂冷冻小鼠胚胎,比较两种载体的效果差异。方法将300个小鼠胚胎随机分为3组:对照组60个、Cryotop组120个和Cryoloop组120个。比较复苏后胚胎存活率和继续发育能力。结果 Cryotop组复苏后胚胎存活率达93.3%,Cryoloop组90.4%,无显著性差异(P>0.05);继续发育率:Cryotop组和Cryoloop组比较,4细胞率分别为48.2%和29.8%(P<0.05),囊胚率分别为31.5%和16.1%(P<0.05),差异具有显著性。结论Cryotop和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体相比,Cryotop操作更为简便,复苏后小鼠胚胎获得了更高的继续发育能力。

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。