基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法的清热凉血方化学成分分析

目的研究清热凉血方的化学成分。方法查阅中国知网、PubChem等数据库,检索清热凉血方药材化学成分的相关文献,建立化学成分数据库。采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法分析该方剂的图谱数据,并以Xcalibur 4.0软件拟合分子式,与自建数据库信息进行匹配,初步推测分子式信息,并结合相关化学成分数据和文献信息对目标化学成分进行鉴定和确证。结果共鉴定出66个化学成分,包括单萜苷类20个,酚酸类10个,环烯醚萜苷类8个,糖苷类、没食子酰葡萄糖类各4个,有机酸类、苯乙醇苷类、香豆素类各2个,苯丙素类、生物碱类、黄酮类、环肽类、萘醌类、糠醛类各1个,其他类8个。结论所建立的方法可系统地对清热凉血方中的化学成分进行定性分析。

基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱的寡糖轮廓分析用于蜂蜜中淀粉糖浆的掺假鉴别研究

采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱（HPLC-Q/Orbitrap MS）建立了寡糖轮廓分析的方法。通过对纯天然蜂蜜和淀粉类糖浆中的麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖进行定性定量分析,发现淀粉类糖浆中含有未被酶解完全的微量麦芽类寡糖,且麦芽七糖在所有检测样本中干扰小,对结果的定量无影响,而其他寡糖类物质的定性和定量结果会存在干扰。最终选择麦芽七糖作为蜂蜜中掺入淀粉糖浆的典型标志物。在实际样品分析中,根据麦芽七糖的保留时间和离子对的相对丰度比可以定性判断蜂蜜中是否掺有淀粉糖浆;通过标准曲线法可以定量测定样液中麦芽七糖的含量。在20,50,100 mg/kg 3个加标水平下,麦芽七糖的平均回收率为75%-82%,相对标准偏差（RSD,n=5）为3.1%-6.7%,方法检出限为0.1μg/m L。应用该方法可在10 min内完成整个分析过程,且样品前处理简单,结果可靠,灵敏度高,可用于纯天然蜂蜜中掺入淀粉糖浆的快速确证和检测。

基于超高效液相色谱-静电场轨道阱质谱技术的十二味参芍益脑合剂中12种主要化学成分定量检测研究

目的基于超高效液相色谱-静电场轨道阱质谱技术,同时测定十二味参芍益脑合剂中12种主要化学成分(绿原酸、栀子苷、芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷、黄芩苷、芹菜素、甘草素、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A)的含量。方法该研究起止时间为2021年3月至2022年5月。采用Waters UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8µm),以乙腈-0.1%甲酸和10 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相,线性梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温35℃,采用电喷雾离子化,平行反应监测离子扫描,以负离子模式检测16批十二味参芍益脑合剂。结果测定的12种主要化学成分在检测浓度范围内线性关系良好(r>0.99),加样回收率范围为80.58%~112.90%[相对标准差(RSD)<10%],基质效应范围为76.58%~110.80%(RSD<10%),进样精密度、重复性、稳定性均符合方法学测定要求。16批制剂检测结果显示13批质量相对稳定,其余3批有一定差异,栀子苷可以作为进一步评价制剂质量的指标。结论该方法专属性强、灵敏度高、重复性好,准确可靠,可用于十二味参芍益脑合剂中12种主要化学成分的同步含量测定。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法检测血液中的痕量溴敌隆

目的建立超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-HRMS)快速检测血液中的痕量溴敌隆的分析方法。方法血液样品经1mL乙腈提取、沉淀蛋白,直接过膜净化进样。采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1mm×50mm×1.8μm),以甲醇和含0.1%(体积分数)甲酸的水为流动相进行梯度洗脱,利用数据依赖二级扫描溴敌隆特征离子的精确质量数、同位素匹配、二级碎片信息和保留时间进行定性,全扫描外标标准曲线法定量。结果溴敌隆在质量浓度范围内线性关系良好(相关系数R^2=0.997 4),方法检出限为500ng/L,样品加标回收率为73.6%~87.3%,相对标准偏差为2.17%~5.69%(n=6)。结论该方法简单快速、灵敏度高、结果准确、可靠,利用该方法可以对溴敌隆中毒案(事)件中血液里的痕量溴敌隆成分定性定量。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法测定牛奶中19种喹诺酮类抗生素

建立基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱筛查和确证牛奶中19种喹诺酮类抗生素的方法。牛奶样品经酸化乙腈提取并沉淀蛋白,PRiME HLB固相萃取柱净化,用Waters Acquity BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,2.5μm)分离,以乙腈和0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱,在全扫描(full MS)-数据依赖扫描(ddMS2)模式下检测。结果表明:19种喹诺酮类抗生素的精确质量相对偏差小于3.0×10-6,在0.2~200 ng/mL范围线性关系良好;检出限0.1~0.5μg/kg,定量限0.2~1.0μg/kg;加标水平0.2~10.0μg/kg时,方法回收率62.1%~100.4%,相对标准偏差低于10%。该方法简便、快速、准确,适用于牛奶中19种喹诺酮类抗生素的快速筛查和定量分析。

超高效液相色谱-四极杆/轨道阱高分辨质谱法快速筛查功能性保健食品中19种特征性成分

目的建立超高效液相色谱-四极杆/轨道阱高分辨质谱法快速筛查功能性保健食品中19种特征性成分的分析方法。方法以甲醇为提取液,样品经超声、高速离心、过滤,通过XDB-C18色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液(含0.02mol/L醋酸铵)和甲醇作为流动相梯度洗脱,选择正负离子实时切换和一级离子/自动触发二级离子扫描模式,利用保留时间、一级离子和二级离子信息建立质谱数据库,完成定性分析,利用一级分子离子峰完成定量测定。结果19种特征性成分的一级离子质荷比实测值与理论值相对偏差均小于等于8.10×10^(-6),19种特征性成分在其相应的线性范围内存在线性关系,相关系数均大于0.99,检出限为0.25~1.00mg/kg,加标回收率为72.33%~97.93%,精密度为1.09%~4.86%。结论该方法抗干扰能力强,准确度高,可用于保健食品中19种特征性成分的快速筛查,同时结合产品标签标识,鉴别其使用原料的真伪性。

连朴饮基准样品高效液相色谱指纹图谱建立及化学成分鉴定

采用高效液相色谱(HPLC)技术建立连朴饮(LPD)基准样品的指纹图谱,并对其中的化学成分进行分析。该实验使用Welch Ultimate®XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,柱温为30℃,体积流量为1.0 mL/min,进样量为10μL。通过相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对不同批次连朴饮进行质量评价。运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,识别连朴饮中的化学成分。结果表明,15批连朴饮基准样品与对照指纹图谱的相似度均高于0.9,连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法学验证良好。确定23个共有峰,指认8个成分,分别为3号峰栀子苷、7号峰表小檗碱、8号峰盐酸黄连碱、11号峰盐酸小檗碱、12号峰盐酸巴马汀、19号峰染料木素、21号峰和厚朴酚和22号峰厚朴酚。通过聚类分析和主成分分析2种化学模式识别方法,将15批基准样品划分为3类,结果互相印证。主成分1-4是影响其质量评价的主要因子,OPLS-DA共确定12个差异标志物。在连朴饮中鉴定出了91个化合物,主要包含环烯醚萜类、有机酸类、黄酮苷类、黄酮类和异黄酮类、生物碱类、木脂素类和氨基酸类。建立的连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法简单且稳定性、重复性良好,与质谱检测方法相结合,可为其后续制剂开发和质量控制研究提供参考。

超高效液相色谱和质谱联用在药物研究领域的应用

超高效液相色谱(UPLC)在分离能力、灵敏度和专属性等方面有着巨大优势,与质谱(MS)联用后可以展现出强大的定性、定量分析能力,并已经在药物研究的各领域得到广泛应用。本文综述近年来超高效液相色谱和质谱联用(UPLC-MS)在药物研究领域应用取得的成果,着重介绍在药代动力学、药物成分分析、药物活性筛选研究等方面的应用。

基于超高效液相色谱-质谱联用技术和化学计量学方法比较白芥子炒制前后的化学成分

目的:比较白芥子炒制前后的化学成分。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Obitrap MS)联用技术对白芥子炒制前后的化学成分进行分析。色谱柱为Waters CORTECS T3,流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为2μL;高分辨MS采用加热电喷雾离子源,于正离子扫描模式下扫描,扫描范围为m/z 120~1000。采用Compound Discover 3.2软件结合相关数据库等对白芥子炒制前后的化学成分进行鉴定,以峰面积对成分含量变化进行初步评价,再以峰面积为变量对成分含量变化进行化学计量学分析。结果:从白芥子中共鉴定出54种化学成分,主要为脂肪酸类(以芥子酸为代表)、生物碱类(以芥子碱为代表)、黄酮类等化合物。经炒制后共有19种化学成分的含量发生了明显变化,其中10种显著降低、9种显著升高(P<0.05)。主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析均能将白芥子与炒白芥子明显区分开。结论:白芥子经炒制后,其部分化学成分含量发生了明显变化,这可能是该药材炒制后功效发生改变的重要原因之一。

基于超高效液相色谱-质谱的胶质瘤患者血浆代谢组学研究

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-OrbitrapHRMS)技术对胶质瘤患者和正常对照人群的血浆进行代谢轮廓分析,筛选胶质瘤代谢标志物,为其发病机制阐明和临床早期诊断提供科学依据。通过对UHPLC-Q-OrbitrapHRMS采集得到的谱图进行峰识别、峰匹配和去噪等处理后,应用主成分和正交偏最小二乘-判别分析法对代谢组学数据进行统计分析,筛选VIP>1.0及P<0.05的差异代谢物,并进一步对其诊断能力进行评价。结果显示,胶质瘤患者的血浆代谢轮廓发生明显变化,发现并鉴定得到10个差异代谢物,其中亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、胆碱和牛磺酸在胶质瘤患者血浆中含量降低,组氨酸、柠檬酸、乳酸、肌酸和丙酮酸含量升高,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.05),提示氨基酸和能量等代谢异常可能对胶质瘤的发生发展具有重要影响。此外,各差异性代谢物对胶质瘤均显示出较好的诊断能力(AUC>0.8),可作为潜在诊断标志物。

超高效液相色谱-串联质谱在食品农药残留和兽药残留及添加剂检测分析中的应用

超高效液相色谱-串联质谱联用仪(UPLC-MS/MS)结合了液相色谱与串联质谱仪两者的优点,多反应监测模式(MRM)具有分析范围宽、灵敏度高,抗干扰能力强,分离能力强,选择性好,还可以对复杂食品基质中低含量农药残留物进行分析的优势,大大降低了分析结果的假阳性概率;且可以同时检测多种化合物,现已成为食品分析中有效的分离检测方法。超高效液相色谱-串联质谱联用技术在检测农药残留、兽药残留、食品添加剂等方面取得了一定研究成果。本文将从农药残留和兽药残留以及食品添加剂的检测等方面进行分析。

高分辨质谱联合核磁共振波谱技术鉴定色胺类新精神活性物质4-OH-MET和4-AcO-DMT

目的利用高分辨质谱和核磁共振波谱技术检测涉毒案件中涉及的未列管的色胺类新精神活性物质。方法将实际案例中缴获的白色和褐色粉末经提取后使用气相色谱-四极杆飞行时间质谱(gas chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,GC-QTOF-MS)、超高效液相色谱-线性离子阱-四极杆-轨道阱质谱(ultra-high performance liquid chromatography-linear ion trap quadrupole-orbitrap mass spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap MS)和核磁共振氢谱(1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy,1HNMR)等方法进行分析。结果白色粉末经GC-QTOF-MS检测,组分的主要特征碎片离子峰有m/z 218.1410(分子离子峰)、72.0806(基峰)等;经UPLC-LTQ-Orbitrap MS检测,质子化分子离子为m/z 219.1494,碰撞诱导解离模式下主要的二级质谱离子有m/z 160.0763、72.0808。褐色粉末经GC-QTOF-MS检测,组分的主要特征碎片离子峰有m/z 246.1357(分子离子峰)、58.0651(基峰)等;经UPLC-LTQ-Orbitrap MS检测,质子化分子离子为m/z 247.1450,碰撞诱导解离模式下主要的二级质谱离子有m/z 202.0871、160.0763、134.0605。经NIST 17谱库检索和1H-NMR共同确认白色粉末和褐色粉末分别含有色胺类新精神活性物质N-甲基-N-乙基-4-羟基色胺(4-OH-MET)和N,N-二甲基-4-乙酰氧基色胺(4-AcO-DMT)。结论GCQTOF-MS、UPLC-LTQ-Orbitrap MS和1H-NMR多种方法联合应用可对未知的新精神活性物质进行鉴定。

基于超高效液相色谱指纹图谱和主成分分析法评价不同主产地半枝莲的质量

目的建立半枝莲药材的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,综合比较不同主产区的半枝莲质量;方法采用UPLC建立半枝莲药材的指纹图谱,应用超高效液相飞行时间高分辨质谱技术对色谱峰进行指认;应用PCA法对UPLC指纹图谱进行分析。结果半枝莲药材UPLC指纹图谱共11个共有峰,其中4个为野黄芩苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、野黄芩素、芹菜素;产自河南、安徽和四川3个产地的半枝莲药材相似度为0.871-0.999;从主成分分析来看,野黄芩苷、芹菜素-7-O-葡糖糖苷、成分1、4、6、7、8及10在半枝莲质量上起重大作用。结论UPLC指纹图谱结合PCA可以客观地评价不同主产地半枝莲药材的质量及各成分对质量的贡献。

基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术的曲妥珠单抗辅助治疗人类表皮生长因子受体-2阳性乳腺癌血清代谢组学研究

目的采用代谢组学技术,筛选可以用于预测曲妥珠单抗辅助治疗人类表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性乳腺癌疗效的生物标志物。方法收集2017年1月至2019年12月金华市人民医院治疗的乳腺癌患者60例的血清样本,分为化疗组(30例)和化疗+曲妥珠单抗治疗组(30例),分别采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术和SIMCA 14.1软件中的多元变量模式对样本及数据进行检测和分析。结果两组代谢物构建的正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型稳健性良好,以P<0.05且VIP>1.0为筛选条件,筛选并鉴定出8个差异代谢物,可用于预测曲妥珠单抗辅助治疗HER-2阳性乳腺癌的疗效。结论代谢组学技术可揭示化疗+曲妥珠单抗组治疗HER-2阳性乳腺癌血清中内源性代谢物的变化特点,筛选出的生物标志物可用于疗效预测,同时为研究曲妥珠单抗的疗效评价提供新思路。

基于UPLC-Q-Exactive-Plus-Orbitrap-MS技术分析蛇含委陵菜的化学成分

目的:利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-Q-Exactive-Plus-Orbitrap-MS)技术对蛇含委陵菜的化学成分进行定性分析。方法:液相色谱采用Hypersil GOLD C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸-水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL。质谱采用电喷雾离子源,以正、负离子交换模式检测,扫描范围为m/z 100~1500,扫描模式为Full MS/dd-MS^(2)。采用Compound Discoverer 3.1软件分析,参考数据库,同时结合对照品的碎片离子信息和相关文献鉴定化合物结构。结果:从蛇含委陵菜中共分析鉴定了99个化学成分,包括有机酸32个、黄酮22个、生物碱15个、苯丙素7个、氨基酸4个、三萜3个、多酚二内酯3个,其他成分13个。结论:该研究首次采用UPLC-Q-Exactive-Plus-Orbitrap-MS技术对蛇含委陵菜的化学成分进行定性分析,可为进一步研究其药效物质基础及质量控制方法提供参考依据。

UHPLC-Orbitrap HRMS技术分析常通口服液的化学成分

目的明确常通口服液(CTOL)中的化学成分,为其药效物质基础研究及二次开发提供参考。方法采用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Orbitrap HRMS)技术进行分析。将CTOL检测样品上样Hypersil Gold色谱柱,以0.1%甲酸(含5 mmol/L甲酸铵)-乙腈作为流动相进行梯度洗脱;采用电喷雾离子源,在正、负离子模式下进行检测,数据使用Xcalibur qual browser 4.3和Compound Discoverer 3.3软件进行处理。收集各化合物的一级、二级质谱数据,根据仪器自带的质谱库以及网络数据库mzCloud、mzVault等对未知化合物进行鉴定,并通过同中药系统药理学数据库与分析平台进行匹配,从而对各化学成分进行药材归属。结果从CTOL中共鉴定分析出53个化学成分,包括24个黄酮类化合物、8个醌类化合物、5个苯丙素类化合物、4个糖和苷类化合物、5个有机酸类化合物、3个氨基酸类化合物、1个生物碱类化合物、1个酚类化合物和2个其他类化合物。53个化合物中有12个来源于丹参,9个来源于枳实,7个来源于大黄,4个来源于当归,1个来源于厚朴,16个来源于甘草,4个来源于多味药材。结论CTOL中主要含黄酮类、醌类、苯丙素类、糖和苷类化合物,且化学成分主要来源于甘草、丹参和枳实。

基于UFLC-QTRAP-MS/MS技术分析三叶崖爬藤不同部位的多元活性成分

基于三叶崖爬藤不同部位中60种多元活性成分的差异,对不同部位质量进行综合评价。采用超快速高效液相色谱-三重四极线性离子阱质谱联用技术测定三叶崖爬藤块根、茎、叶中60种活性成分的含量,应用多元统计分析方法比较了不同部位间差异活性成分,并对不同部位进行了质量等级排序。含量测定结果显示,60种活性成分总含量在不同部位中的分布规律为叶>茎>块根,分别达到了14263、11583、4603μg/g;主成分分析显示不同部位样本分类明显,差异较大;偏最小二乘回归分析及方差分析显示,8种活性成分可作为区分不同部位的活性成分标志物;灰色关联度分析结果显示,不同部位等级排序为叶>茎>块根,叶的整体质量优于其他两个部位。本实验结果可为三叶崖爬藤不同部位多种活性成分的快速鉴定及质量控制提供方法参考,也为其资源合理开发利用奠定基础。

基于超高效液相色谱-高分辨质谱技术的普洱茶年份鉴别方法研究

本研究选自云南昌源2017年、2018年、2019年的普洱茶作为样本,采用超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术,对不同年份普洱茶的主要化学成分进行了研究分析,发现不同年份普洱茶的化学成分在含量上具有较大差异。采用主成分分析(Principal component analysis,PCA),可以对来自不同年份的普洱茶进行有效区分,结合组学分析(Compound Discoverer,CD)软件筛选出在不同年份普洱茶中含量具有显著差异的5个标志物并对其进行了结构鉴定,采用Origin软件进行差别分析,建立了最大化地凸显不同组别之间的差异模型。试验结果表明,模型通过对已知样本的预判测试,显示出所建立模型能很好地区分三组不同年份的普洱茶。

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS的胃康灵胶囊化学成分分析

目的 建立超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-OrbitrapMS)法准确、快速定性鉴别胃康灵胶囊中的化学成分。方法 采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×150 mm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量2μL,电喷雾电离源(ESI)在正、负离子两种模式下采集数据,扫描方式为全扫描/数据依赖二级扫描(Full MS/dd-MS~2)。结果 在胃康灵胶囊水提液中共鉴定出142个化学成分,包括三萜类58个、生物碱类32个、单萜类17个、黄酮类12个、多酚类10个、有机酸类6个,菲类3个、香豆素类1个、木脂素类1个、苯并吡喃类1个和氮苷类1个。结论 UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术能够快速有效地对胃康灵胶囊中化学成分进行鉴定,为进一步明确其药效物质提供参考。