基于超高液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法与网络药理学技术分析参葛颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病的活性成分及作用机制

目的运用超高压液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术结合网络药理学技术探究参葛颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病的活性成分及作用机制。方法通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定参葛颗粒中的化学成分,结合中药系统药理学数据库(TCMSP)、PubChem数据库以及SwissTargetPrediction数据库筛选参葛颗粒的活性成分和靶点,在GeneCards等数据库检索非酒精性脂肪性肝病的疾病靶点,在Venny 2.1.0在线作图平台绘制药物-疾病韦恩图,将交集靶点导入String数据库,再利用Cytoscape 3.10.0软件进行可视化处理,同时基于交集靶点通过DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集。利用Cytoscape 3.10.0软件构建核心靶点网络图以及疾病-通路-靶点-成分-药物网络图。结果质谱解析化合物75个,筛选得到药物活性成分29个,药物靶点499个,疾病靶点4776个,共同靶点353个,关键基因10个,分别为TP53、CASP3、HIF1A、JUN、BCL2L1、SRC、MTOR、HRAS、TNF、ALB,关键活性成分8个,分别为丹酚酸B、葛根素、Puerol B、芒柄花苷、葛苷A、丹参素、大豆苷、染料木素苷。结论参葛颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病具有多成分、多靶点、多通路的特点,主要通过减少肝脏脂肪堆积、调节内分泌减缓炎症以及细胞凋亡,从而发挥治疗非酒精性脂肪肝病的作用。

稳定同位素内标/超高压液相色谱-串联质谱法同时测定水果与豆芽中10种植物生长调节剂残留

建立了水果与豆芽中10种植物生长调节剂残留的超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。以酸化乙腈(1∶1 000,体积比)为提取液,样品经高速匀浆与超声辅助分散提取后,提取液采用固相萃取柱净化,甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,电喷雾电离,正负离子扫描,多反应监测模式(MRM)检测,基质匹配同位素内标标准曲线定量。最优条件下,10种植物生长调节剂残留在0.1~50.0μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)均大于0.995,检出限为0.2μg/kg,平均回收率为52.4%~119.6%,相对标准偏差(RSD)均小于13%。该方法样品前处理简单、净化效果好,同位素内标的使用解决了基质效应及前处理过程中待测物损失造成定量结果不准确的问题,适用于大批量果蔬中多种植物生长调节剂的快速测定。

超高压液相色谱-串联质谱法同时测定婴幼儿配方乳粉中11种B族维生素

目的：建立一种能够同时测定婴幼儿配方乳粉中11种B族维生素的超高压液相色谱-串联质谱法。方法：样品用0.1%甲酸溶液溶解,乙酸锌沉淀蛋白,滤液经ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸溶液和乙腈,梯度洗脱,采用电喷雾离子源正离子模式,多反应监测进行检测,分析时间12 min。结果：11种B族维生素在各自质量浓度范围内线性良好,R^2均大于0.99,加标回收率在85%-110%之间,相对标准偏差在1.03%-6.75%之间,VB1、VB2、烟酸、烟酰胺、泛酸（VB5）、吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺、叶酸、游离生物素和VB12的定量下限分别为40.0、40.0、30.0、30.0、50.0、0.9、1.2、1.2、2.0、2.0、0.2μg/100 g,与国家标准比较,部分维生素定量限提高了7.7%-60%。结论：该法具有灵敏度高、前处理操作简单快速、分析时间短的特点,而且具有良好的精密度和准确性,可以应用于婴幼儿配方乳粉中11种B族维生素的同时测定。

超高压液相色谱-串联质谱法测定速溶咖啡和曲奇饼干中丙烯酰胺的含量

建立了超高压液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定速溶咖啡和曲奇饼干中丙烯酰胺含量的方法。分别称取速溶咖啡或曲奇饼干样品2.0 g,用乙腈提取2次(10 mL×2),正己烷除脂2次(10 mL×2),取10 mL乙腈相于40℃减压浓缩至近干,加水1 mL溶解,经0.45μm水系滤膜过滤,得待测液。以Aglient Eclipse Plus C_(18)色谱柱为固定相,以5%(体积分数)甲醇溶液为流动相,在流量0.15 mL·min^(-1)下进行等度洗脱,电喷雾正离子(ESI^(+))模式和多反应监测(MRM)模式下测定,内标法定量。结果显示:丙烯酰胺标准曲线的线性范围为0.005~1.00 mg·L^(-1),检出限(3S/N)为0.0003 mg·L^(-1);对速溶咖啡和曲奇饼干样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为88.9%~111%,测定值的相对标准偏差(n=5)为2.5%~14%。

超高压液相色谱-串联质谱法对马口铁罐内涂层中双酚A及其模拟迁移的测定

目的建立了超高压液相色谱-串联质谱法测定马口铁罐内涂层中双酚A迁移含量的方法。方法样品经模拟溶液提取后用C18色谱柱分离, UPLC-MS/MS多反应监测模式下进行定性定量分析,并对金属制品内涂层双酚A在不同食品模拟物环境下的迁移行为进行了研究。结果线性范围为5.0~100.0μg/L,最低检测浓度为1.0μg/L,回收率为78.6%~86.2%,相对标准偏差为7.3%~12.6%。结论双酚A迁移水平受模拟物性质影响,相对于水性模拟物,在醇溶性模拟物中更易发生迁移。双酚A迁移水平随迁移试验温度和接触时间的增加而升高。

QuEchERS/超高液相色谱-串联质谱法同时测定饲料中6种β-阻断剂类药物

本实验建立了饲料中阿替洛尔、纳多洛尔、醋丁洛尔、艾司洛尔、卡拉洛尔、卡维地洛6种β-阻断剂类药物的UPLC-MS/MS测定及确证方法。样品经乙腈-甲醇（3∶7,V/V）溶液振荡提取后,加入Qu Ech ERS吸附剂净化,经氮气吹干后用30%乙腈溶液定容,采用电喷雾正离子模式检测,同位素内标法定量。结果表明：6种β-阻断剂类药物在1-500μg/L线性相关系数均大于或等于0.9990,检出限为0.02-0.16μg/kg,定量限为0.07-0.54μg/kg;添加浓度水平为5、10、20μg/kg时,平均回收率为81.8%-119.6%,RSD为4.8%-11.3%。该方法灵敏度高,线性范围宽,且实用性强,可对饲料中6种β-阻断剂类药物进行定性和定量分析。

超高压液相色谱-串联质谱法测定鱼组织中卡巴氧及喹乙醇代谢物

目的建立鱼组织中卡巴氧代谢物喹恶啉-2-羧酸(QCA)及喹乙醇代谢物3-甲基-喹恶啉-2-羧酸(MQCA)的超高压液相色谱-串联四极杆质谱(UPLC-MS/MS)残留分析方法.方法样品在一定温度、Tris/HCL缓冲溶液作用下,经蛋白酶酶解,浓盐酸酸化,乙酸乙酯提取,提取液吹干后加入20%甲醇水溶解,过PAX固相萃取柱净化、富集;以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,经HSS T3色谱柱分离,采用多反应监测(MRM)正离子模式进行检测.结果 QCA和MQCA定量限(LOQ)均为0.5μg/kg ,在0.5~5.0μg/kg添加水平的平均回收率在93.1%~101.2%之间,相对标准偏差为1.4%~5.5%.结论本方法适用于鱼组织中卡巴氧及喹乙醇代谢物残留检测.

分散固相萃取-超高压液相色谱-串联质谱法测定黄瓜中的嗪胺灵

目的：建立黄瓜中嗪胺灵残留的液质串联快速分析检测方法。方法样品中的嗪胺灵经乙腈提取用 N-丙基乙二胺(PSA)和石墨化碳黑(GCB)净化,利用超高压液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在多反应监测模式下进行检测。结果以碎片离子对432.8>212.9、432.8>82.9定性、离子对432.8>97.8进行外标法定量。仪器在0.01~1.00 mg/kg范围内,具有良好线性关系。在0.02~1.00 mg/kg添加水平范围内,嗪胺灵在黄瓜中的平均回收率为85.3%~92.2%,其相对标准偏差为2.8%~7.5%。该方法的检出限(LOD)为2.0μg/kg,定量限为(LOQ)为20μg/kg。结论本方法简便、快速、准确,能满足国内外法规的要求,可用于黄瓜样品中嗪胺灵的农药残留确证检测。

超高压液相色谱-串联质谱法快速测定人尿液和全血中3种乌头生物碱

目的建立快速检测人尿液和全血中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的超高压液相色谱-串联质谱分析方法。方法尿液样品直接进样,全血样品经乙腈-甲醇(9:1,v/v)沉淀蛋白,以甲醇和5.0 mmol/L碳酸氢铵水溶液作为流动相进行梯度洗脱,在BEH C18色谱柱上实现分离,电喷雾正离子多反应监测方式检测,以那可丁作为内标的基质标准内标法定量。结果尿液和全血中3种乌头生物碱的平均加标回收率分别为93.9%～108%和89.7%～109%,相对标准偏差为1.3%～11%和1.1%～18%(n=6),定量限(S/N=10)分别为0.05μg/L和0.1μg/L。结论此方法灵敏、准确,已成功应用于一起中毒事件的检测。

超高液相色谱-串联质谱法测定淡水水产动物中6种激素残留

目的建立超声提取-凝胶净化色谱(gel permeation chromatography,GPC)-超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测淡水水产动物中的雌酮、炔诺酮、炔雌醇、米非司酮、己烯雌酚和己酸羟孕酮残留量的方法。方法取淡水水产动物可食部分粉碎后,准确称取5.0 g,置于50 mL离心管中,加甲醇超声提取,放冷,8000 r/min离心5 min。离心后的溶液净化后,氮吹至近干,残渣加甲醇溶解,过滤后上UPLC-MS/MS进行定性、定量检测。结果各组分在0.01~10.00µg/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于0.995;检出限为0.121~0.285µg/kg,定量限为0.363~0.855µg/kg;加标回收率均在80.0%~110.0%范围内;重复性相对标准偏差均在5.0%以内(n=6)。结论方法专属性好、灵敏度高,适用于淡水水产动物中极微量激素残留的检测。

直接提取-超高压液相色谱-电喷雾串联质谱法检测原料奶及奶制品中的四环素类抗生素

目的建立直接提取-超高压液相色谱-电喷雾串联质谱法(UPLC-ESIMS/MS)同时测定原料奶及奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素4种四环素类药物的分析方法。方法原料奶及奶粉样品经少量高氯酸沉淀蛋白、低温冷冻除脂后,用C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,电喷雾串联质谱正离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。结果 4种四环素族药物在1～1000ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r均在0.993以上。本方法的定量限为(S/N≥10)为原料奶5μg/kg,奶粉25μg/kg,在10、50、100μg/kg三个加标水平下,加标回收率为73.4%～99.4%,相对标准偏差为0.8%～14.3%(n≥6)。结论该方法简便快速、灵敏可靠、经济有效,适用于原料奶及奶粉中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素4种四环素族药物残留的测定。

超高液相色谱串联质谱法测定贝类组织中环境雄激素睾酮的前处理方法优化

环境雄激素属于典型的内分泌干扰物,不仅干扰生物内分泌系统导致其生长发育受阻,还会对人体健康和生态安全造成威胁.为快速测定贝类组织中典型雄激素睾酮的质量浓度,分别在4种提取剂乙腈、乙酸乙酯、叔丁基甲醚、正己烷-二氯甲烷(1∶1)及3种净化方法超低温冷冻离心、超低温冷冻离心-净化剂、超低温冷冻离心-HLB固相萃取柱条件下提取河蚬组织中的睾酮,通过比较其回收率,优化超高液相色谱-串联质谱法测定睾酮的前处理方法.结果表明:4种提取剂中乙酸乙酯对睾酮提取效果最好,回收率高达101.6%;提取液经超低温(-80℃)冷冻离心法净化后回收率最高,且操作简便.在此优化条件下,睾酮在质量浓度为0.05~1.00μg/mL范围内与对应的峰面积呈现良好的线性正相关关系(R 2=0.9989),检出限为6.25 ng/g,定量限为20 ng/g.不同添加水平的加标回收率为66.4%~101.1%,相对标准偏差为2.3%~11.6%.经本研究优化后的前处理方法,操作简便、重现性好、稳定性高,具有良好的准确度和精密度,适用于贝类样品中睾酮的提取分析.

多功能净化柱净化-超高液相色谱串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中的6种真菌毒素

目的建立多功能净化柱净化-超高液相色谱-串联质谱法检测云南所售部分面条及面条制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮6种真菌毒素的含量。方法样品经乙腈-水-甲酸(70:29:1,F:F:F)溶液浸泡提取,通过Pribo Fast®M226多功能净化柱净化,采用超高液相色谱-串联质谱的多反应监测模式进行分析,外标法进行定量。结果6种真菌毒素在0.05~400 ng/L范围内线性关系良好(r>0.994),加标回收率为87.6%~10丨.3%,相对标准偏差为1.09%~3.65%。81份面条样品中,脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出含量为15.2~664 ng/kg,检出率为98.77%,检测值均未超过国家食品安全标准规定的参考限量值,其余5种真菌毒素均为未检出。结论本检测方法具有快速便捷、准确性好、灵敏度高、特异性强等特点,适用于面条中6种真菌毒素的同时测定。

同位素稀释-超高压液相色谱-串联质谱法测定维生素营养液中的泛酸含量

目的建立测定维生素营养液中泛酸含量的同位素稀释-超高压液相色谱-串联质谱法(ID-UHPLCMS/MS)。方法样品经高氯酸水溶液涡旋提取和除杂、超纯水稀释后,以HSS T3色谱柱和0.1%(v:v)甲酸水溶液-乙腈进行梯度洗脱分离,以串联质谱的多反应监测模式检测,内标法定量。结果泛酸在5~1000μg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9998;方法检出限为0.02 mg/100 g,定量限为0.07 mg/100 g,3个添加水平的回收率为93.4%~105%,相对标准偏差(n=6)为2.3%~4.4%,日间相对标准偏差(n=3)为2.72%。结论本方法操作简便、分析速度快、灵敏度高、重复性好,为维生素营养液中泛酸含量的定性定量分析提供了可靠的依据。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定大米中14种农药残留

利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪(UPLC-MS/MS),建立了大米中14种农药残留的快速测定方法。样品经直接提取稀释后,利用C18色谱柱分离,通过动态多反应监测(DMRM)模式进行定量分析。结果表明,14种农药残留具有良好的线性关系,加标回收率为87.0%~115.6%,相对标准偏差为0.5%~8.7%。该方法简便、快速,可满足大米农药残留的日常检测和监测工作的需要。

改良QuEChERS技术结合超高效液相色谱-串联质谱法同时测定果蔬中高氯酸盐、氯酸盐和溴酸盐

基于改良的QuEChERS方法,建立同时测定果蔬中高氯酸盐、氯酸盐和溴酸盐的超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测方法。实验以回收率为考察指标对N-丙基乙二胺、石墨化碳黑(graphitizing of carbon black,GCB)和C18三种吸附净化剂用量进行优化。样品经50%乙腈溶液提取2次,提取液经GCB 40 mg和C18200 mg混合吸附剂萃取净化,经IC-PakTM Anion HR色谱柱分离,UPLC-MS/MS进行检测,基质外标法进行定量分析。3种基质中(苹果、梨和青菜)高氯酸盐、氯酸盐和溴酸盐在0.5~100 mg/L范围内线性关系良好,线性相关系数均大于0.99。在5.0、20.0 mg/kg和50.0 mg/kg三个添加水平下的平均回收率为80.3%~110.1%,相对标准偏差在2.1%~9.6%之间,方法检出限为0.5~1.5 mg/kg,方法定量限为2.0~5.0 mg/kg。该方法快速便捷、灵敏可靠、回收率稳定,适用于果蔬中高氯酸盐、氯酸盐和溴酸盐的同时测定。

超高效液相色谱-串联质谱法测定辣椒及其栽培土壤中烯酰吗啉和唑嘧菌胺

目的建立用于辣椒和土壤中烯酰吗啉和唑嘧菌胺残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法。方法辣椒和土壤样品采用乙腈和水提取,盐析后取上清液,通过优化色谱分离等条件,建立超高效液相色谱-串联质谱方法,结合目标物标准曲线进行定量分析。结果经过3个水平的加标回收率实验,所建立方法的平均回收率在85.2%~97.8%,相对标准偏差0.1%~2.2%(n=5)。烯酰吗啉在辣椒的定量限为0.04mg/kg,在土壤中定量限为0.01 mg/kg;唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的定量限均为0.01mg/kg。结论所建立的分析方法操作简便,分离净化效果良好,灵敏度、准确度和精密度均达到农药残留检测要求。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定2种茄果类有机蔬菜中三唑酮及其代谢物

目的建立QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定2种茄果类蔬菜中三唑酮及其代谢产物三唑醇对映异构体的分析方法。方法采用乙腈作为提取溶剂,N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)混合石墨化碳黑净化,样品经CHIRAL?OD-RH手性柱分离,采用UPLC-MS/MS测定,基质外标法定量。结果三唑酮和三唑醇在0.02~1.00 mg/L范围内线性良好,相关系数均在0.99以上,定量限(limits of quantitation,LOQ)为0.02 mg/L。有机茄子、有机青椒中3个添加水平的平均回收率为71.0%~97.8%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)(n=6)在1.2%~9.9%之间。结论该方法操作简便,准确度高、成本低,可以用于测定茄果类有机蔬菜中三唑酮及代谢物三唑醇残留。

超高液相色谱-串联质谱法测定猪肉中8种喹诺酮类兽药残留的不确定度评定

目的评定超高液相色谱-串联质谱法测定猪肉中8种喹诺酮类兽药残留量的不确定度。方法根据JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》中的有关规定,建立不确定度的数学模型,逐层对不确定度进行分析。结果添加量为1.0μg/kg时,8种喹诺酮类兽药残留量测定的相对标准不确定度为2.77%~6.65%;添加量为2.0μg/kg时,8种喹诺酮类兽药残留量测定的相对标准不确定度为1.69%~6.67%;添加量为4.0μg/kg时,8种喹诺酮类兽药残留量测定的相对标准不确定度为1.31%~5.43%。结论在实际检测中,提高天平精度及定容精度,控制标准溶液配制过程,提高检验员工作质量和效率均可降低引入的不确定度,使检测结果更可靠。

超高效液相色谱-串联质谱法测定水果中42种农药残留

目的建立QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法检测水果中42种农药残留的分析方法。方法优化前处理的步骤、质谱参数和流动相组分,分析水果中检出率较高的42种农药。样品经乙腈提取,以900 mg MgSO4和150 mg乙二胺-N-丙基硅烷对样品进行净化,利用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离,在多反应监测模式下监测,外标法定量。结果42种农药在10~200ng/mL线性范围内相关系数均大于0.995,方法定量限为0.9~3.6μg/kg,回收率为70.7%~118.8%,相对标准偏差为1.2%~13.1%。结论该方法操作简便、灵敏度高,适用于水果中农药残留的分析。