基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱非靶向筛查分析烤牛肉在不同温度下的差异标记物

肉类加热终点温度是影响熟肉安全的重要指标。为探讨不同温度对烤牛肉代谢物合成积累的影响,采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole-exactive-mass-spectrometry,UPLC-Q-Exactive-MS)结合化学计量学方法研究不同温度下烤制牛肉样品的代谢物差异。基于UPLC-Q-Exactive-MS非靶向筛查技术,结合软件数据库搜索进行标记物鉴定。采用主成分分析、偏最小二乘法判别分析和正交偏最小二乘法判别分析等方法筛选差异化学成分。结果显示,牛肉样品中的化学成分能够被显著区分,筛选出肌酸、肌酐、3-氨基-1,4-二甲基-5H-吡啶[4,3-b]吲哚、2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4,5-b]吡啶4个化合物作为有害标记物。随着加热温度升高,杂环胺的含量越来越高,转化为肌酐的肌酸越多,且极性杂环胺相对含量高于非极性杂环胺。该结果为热加工过程相关标记物和热致毒性化合物的研究提供了一定参考。

超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱法同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵的含量

建立了一种超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷和甘草酸铵含量的方法。采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱质谱,Hypersil Gold C_(18)型色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃,进样量1μL;采用电喷雾离子源,正离子模式下,在质荷比100~1500范围内全扫描,通过提取待测成分的精确质量数进行定量。结果表明,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵线性范围分别为0.0891~1.4250μg/mL、0.0984~12.6000μg/mL、7.4250~29.7000μg/mL(r≥0.9993),检测限分别为5.57、4.10、5.80 ng/mL,定量限分别为22.26、12.30、23.20 ng/mL,精密度、重复性及样品稳定性(24 h)良好,加样回收率91%~105%(δ_(RSD)≤5.0%,n=6)。本方法简便快捷、特异性强、灵敏度高,可同时检测补中益气丸中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、甘草酸铵的含量。

超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法快速鉴定鬼针草化学成分

利用超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱联用技术对鬼针草的化学成分进行快速鉴定。采用Hypersil GOLD C18(100 mm×2.1 mm,1.9µm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在加热电喷雾离子源(HESI)正负离子模式下对样品进行数据采集。采用高分辨质谱数据,结合对照品、文献、在线数据库,从鬼针草中鉴定出28种成分,包括10种黄酮类成分,6种氨基酸类成分,10种有机酸类成分,2种其它成分,其中壬二酸、7-羟基香豆素、没食子酸3种成分为首次在鬼针草中发现。该研究可为鬼针草的快速鉴定、质量控制方法建立和药效基础研究提供参考。

超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道肼高分辨质谱筛查测定饲料中19种磺胺类药物

建立了超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用（UPLC-Q-Exactive Orbitrap）快速筛查和确证定量饲料中19种磺胺类药物的分析方法。饲料样品经乙腈-0.1%甲酸溶液（80：20,V/V）超声提取,Agilent SB C18色谱柱（100 mm×3.0 mm,1.8μm）分离,以0.1%（V/V）甲酸乙腈溶液和0.1%（V/V）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。静电场轨道阱全扫描得到磺胺类药物的一级精确质量数与理论精确相对分子质量对比,相对质量偏差在0.006×10-6-1.252×10-6之间,有效去除了基质干扰,实现对饲料中磺胺类药物的快速筛查;同时建立了19种磺胺类药物的二级质谱数据库,实现对19种磺胺类药物的定性筛查及同步定量。19种磺胺类药物在0.1-200μg/L浓度范围内线性关系良好r〉0.99,方法检测限为50μg/kg,回收率在59.61%-106.45%之间。

高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱研究人工“无抗奶”中青霉素类药物的降解产物

目的研究人工"无抗奶"中青霉素类药物的降解产物。方法牛奶中的青霉素类药物经抗生素分解剂降解,采用乙腈-水(4:1,v:v)沉淀蛋白及提取后,采用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱对降解后的产物进行定性研究,确定残留标识物,并进行检测。结果几种青霉素类药物的残留标识物分别为相应的青霉噻唑酸及去羧青霉噻唑酸,对人工"无抗奶"的鉴别浓度低限为10μg/kg。结论此方法简单、快速、灵敏度高,可作为人工"无抗奶"的鉴别方法。

超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道肼高分辨质谱同时快速筛查与确证猪粪中33种磺胺类及四环素类药物

建立了超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道肼高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive Orbi-trap)同时快速筛查与确证猪粪中共33种磺胺类及四环素类药物的分析方法和目标化合物的质谱数据库.猪粪样品经Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲液及乙腈提取,利用通过式固相萃取柱PRiME H LB净化后上机检测.结果表明,33种目标药物添加浓度在50μg/kg检出限浓度时可全部检出,回收率集中在61.7%~118.4%.该方法高效、灵敏、准确,将粪便作为活体检材,减少了对活体动物的破坏性,同时适用于猪粪中多种抗生素的快速定性确证,有利于掌握养殖业用药情况.

超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用法分析不同西洋参加工品的皂苷类成分

采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱联用法(UPLC Orbitrap HRMS)对西洋参不同加工品中的皂苷类成分差异进行分析。高分辨质谱条件为电喷雾电离源,轨道阱质量分析器,负离子模式采集。结果显示,根据一级质谱精确质荷比信息,获得化合物的精确分子量;根据二级串联质谱信息,获得化合物的碎片信息。总结了不同类型皂苷的特征质谱碎裂规律,并对碎裂规律进行比对,初步归属和鉴定西洋参中55种皂苷类成分,其中原人参二醇型皂苷成分28种、原人参三醇型皂苷成分17种、奥克梯隆型皂苷成分5种和齐墩果烷型皂苷成分5种。通过比较不同西洋参加工品中皂苷类组成的差异,为揭示不同加工方法对西洋参皂苷成分的影响规律提供了依据,并为西洋参的开发利用以及阐明药效物质基础提供了参考。

超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法筛查测定饲料中16种硝基咪唑类药物

建立了基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-Q-Exactive Orbitrap)快速筛查和确证定量饲料中16种硝基咪唑类药物的分析方法。饲料样品经含0.1%甲酸的乙腈-水(80:20,V/V)溶液震荡提取,Waters ACQUITY UPLC○R BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)分离,以(含0.1%甲酸)乙腈-甲醇(50:50,V/V)溶液和(含0.1%甲酸)水溶液为流动相进行梯度洗脱。静电场轨道阱全扫描得到16种硝基咪唑类药物的一级精确质量数与理论精确质量数对比,质量偏差在0.04975~0.93988mDa;同时建立了二级质谱数据库,实现对16种硝基咪唑类药物的定性筛查及同步定量。16种硝基咪唑类药物在0.1~200μg/L浓度范围内线性关系良好r>0.9990,方法检测限在25μg/Kg^100μg/Kg,回收率在49.47%~105.4%。

超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法快速鉴定柴胡化学成分

采用超高效液相色谱-四级杆静电轨道阱质谱联用技术,对柴胡的化学成分进行快速鉴定。使用ACQUITY UPLCHSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以0.05%甲酸水溶液-0.05%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源(ESI)正负离子监测模式下对样品进行数据采集。利用高分辨质谱数据,结合文献、对照品质谱数据、Mass Frontier验证,从柴胡中鉴定出65种成分,包括32种皂苷类成分,11种黄酮类成分,18种酸类成分,4种其它成分,其中壬二酸、3,5,6-三羟基-4’,7-二甲氧基黄酮、13-羟基-9,11-十八二烯酸、甲氧基-十五烷酸4种成分为首次在柴胡中发现。该方法可为柴胡的快速鉴定、药效基础发现和质量控制方法建立提供参考。

超高效液相色谱-二极管阵列-串联四极杆静电轨道阱质谱法对杆菌肽组分的分析

开发建立了超高效液相色谱-二极管阵列-串联四级杆静电场轨道阱高分辨质谱联用分析杆菌肽组分的方法。采用(Phenomenex C_(18)100 mm×3.0 mm,2.6μm)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-0.1%甲酸甲醇乙腈(75+25)溶液为流动相,0.3 mL/min线性梯度洗脱分离,紫外吸收波长为254 nm。采集杆菌肽各组分质谱母离子及其对应子离子,并进行解析,推测组分的结构。在所建立的条件下,检测出9个组分,杆菌肽各组分之间分离良好。利用紫外与质谱归一化法测定含量,两种结果相对偏差在0.01%~3.53%之间。建立的超高效液相色谱-二极管阵列-串联四级杆静电场轨道阱高分辨质谱法能有效分析多肽类药物杆菌肽各组成成分,为杆菌肽的质量控制和工艺优化提供了参考。

超高液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中二十三种喹诺酮类和四环素类药物

为了快速筛查与确证喹诺酮类及四环素类药物,及时掌握畜禽养殖过程中抗菌药物的使用情况,本研究建立了利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中23种常见喹诺酮类及四环素类抗菌药物的方法。建立了目标药物的质谱数据库,优化了猪粪中23种常见抗菌药物喹诺酮类和四环素类药物的前处理过程。23种目标药物在一定的质量浓度范围内呈良好线性(R~2≥0.99),检出限为50μg/kg,回收率为60.0%~118.4%。该方法以猪粪便作为检材,实现了单次进样分析即可精准确证23种抗菌药物,有利于将养殖业用药监管窗口"前移"。

高分辨质谱联合超高效液相色谱筛查饲料中非法添加物米诺地尔

利用高分辨质谱技术筛查鉴定饲料中不在常规检测范围内的、完全未知的非法添加物。待测样品经酸性甲醇提取后,经超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱采集全扫描数据进行非目标物分析。经分子特征搜索,生成分子式再结合标准品确证为米诺地尔(C_(9)H_(15)N_(5)O)药物。再通过超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱对比相互印证,最后经超高效液相色谱定量,米诺地尔质量分数为0.003%。表明液相色谱-串联三重四级杆飞行时间高分辨质谱、液相色谱-静电场轨道肼高分辨质谱以及超高效液相色谱等多方法联合应用,可对饲料中的完全未知的非法添加物(米诺地尔)进行筛查、确证。

基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多种成分定量测定研究

目的建立基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多成分(绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A)的定量分析方法。方法采用BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.2 m L/min;质谱采用ESI离子源,平行反应监测(PRM)的扫描方式进行检测。结果在优化的色谱质谱条件下,绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A分别在0.3～3.0、0.000 5～0.005 0、0.01～0.10、0.04～0.40、0.1～1.0、5.0～50.0、0.2～2.0、0.1～1.0、0.1～1.0、0.004～0.040、5.0～50.0μg/m L线性关系良好(r≥0.999 5);精密度、重复性及稳定性良好;加样回收率在99%～102%,RSD均小于3%;本研究所测成分在各批次样品中的质量分数依次为绿原酸217.80～502.25μg/g、芦丁0.50～0.59μg/g、咖啡酸8.45～13.54μg/g、阿魏酸2.61～3.56μg/g、迷迭香酸66.70～188.56μg/g、丹酚酸B 4 002.53～8 793.80μg/g、丹酚酸A 158.04～321.65μg/g、丹参酮Ⅰ 127.72～612.48μg/g、隐丹参酮75.56～285.70μg/g、欧当归内酯A 2.68～3.98μg/g、丹参酮Ⅱ_A 2 921.86～6 085.88μg/g。结论本实验建立的方法灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于益心舒片中多种活性成分的快速测定;并为其质量评价提供新的科学依据和参考。

基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术的曲妥珠单抗辅助治疗人类表皮生长因子受体-2阳性乳腺癌血清代谢组学研究

目的采用代谢组学技术,筛选可以用于预测曲妥珠单抗辅助治疗人类表皮生长因子受体-2(HER-2)阳性乳腺癌疗效的生物标志物。方法收集2017年1月至2019年12月金华市人民医院治疗的乳腺癌患者60例的血清样本,分为化疗组(30例)和化疗+曲妥珠单抗治疗组(30例),分别采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术和SIMCA 14.1软件中的多元变量模式对样本及数据进行检测和分析。结果两组代谢物构建的正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型稳健性良好,以P<0.05且VIP>1.0为筛选条件,筛选并鉴定出8个差异代谢物,可用于预测曲妥珠单抗辅助治疗HER-2阳性乳腺癌的疗效。结论代谢组学技术可揭示化疗+曲妥珠单抗组治疗HER-2阳性乳腺癌血清中内源性代谢物的变化特点,筛选出的生物标志物可用于疗效预测,同时为研究曲妥珠单抗的疗效评价提供新思路。

超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱测定豆芽中的11种植物生长调节剂

建立了超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱测定豆芽中11种植物生长调节剂的检测分析方法。样品基于QuEChERS技术,以10 mL含1%甲酸的乙腈提取,C18净化,0.1%甲酸5 mmol/L乙酸铵水溶液梯度洗脱,RRHD SB-Aq色谱柱分离,在电喷雾离子源(ESI)、全扫描/数据依赖二级质谱扫描(Full MS/dd-MS^2)监测模式下正负切换同时进行检测。结果表明,11种化合物线性关系良好(相关系数噻苯隆R^2=0.992,其余R^2>0.998),定量限为(0.3～3)μg/kg;平均加标回收率为84.6%～113.1%,相对标准偏差为0.6%～8.3%。该方法简单快速、灵敏度高、结果准确,可对豆芽中11种植物生长调节剂进行有效的快速筛查和定量分析。

基于Q-Exactive高分辨质谱的蒙中药材苦参化学成分的快速分析鉴定

目的:运用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-ExactiveMS)建立一种对苦参复杂成分实现精准、高效、快速分析鉴定的方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-Aq色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以5 mmol/L乙酸铵/0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,采用热电喷雾(HESI)质谱离子源,在正、负离子模式下采集数据,依据精确质量数和Chemspider数据库确定化合物分子式及结构式,通过比较对照品及文献报道的保留时间、一级质谱以及二级碎片离子,结合此类化合物的裂解规律,对其进行准确结构鉴定。结果:共鉴定了49个化合物,其中12个异戊二烯黄酮类和3个生物碱类化合物为该药材首次鉴定。结论:该方法可系统、准确、快速鉴定苦参复杂化学成分,为阐明该药材的物质基础以及制定质量标准提供了实验依据。

UPLC-Q-Orbitrap HRMS四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪在复方扶芳藤合剂中的定性应用

目的:利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)的高分辨率筛查方法,建立对中成药复杂成分快速鉴定的高效分析方法。方法:采用Thermo Gold C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,质谱采用正负离子同时采集模式、全扫描及自动触发二级质谱扫描模式,对复方扶芳藤合剂中的化合物进行快速筛查及定性分析。结果:通过高分辨数据从复方扶芳藤合剂中共鉴定出38个化合物,包括黄酮类11个、萜类10个、有机酸类8个、酚类2个、糖及糖醇类3个、氨基酸及核苷类4个。结论:使用UPLC-Q-Orbitrap HRMS的高分辨率筛查方法,建立的定性方法可快速、准确、系统地识别出复方扶芳藤合剂中多种化合物,可用于复方扶芳藤合剂中多种组分进行系统的快速测定,为该制剂质量控制、药效物质基础研究及进一步的临床应用提供了扎实的理论依据及研究思路,并为其整体药物质量评价的提供了新的科学依据及参考。

基于深度神经网络的黄酮与[口山]酮类高分辨质谱数据的分析与识别

目的建立基于深度神经网络的黄酮和[口山]酮高分辨质谱数据的识别分类技术。方法基于超高液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱联用技术(UHPLC-Q-Orbitrap MS)对供试样品进行条件的优化和分析,使用Xcalibur 4.0软件对148个对照品的高分辨质谱数据进行提取,包括了正负离子的一、二级碎片,总计为42维,使用深度神经网络对上述数据进行二分类的建模分析,并且利用108个对照品数据作为训练集对模型进行参数调优,使其学习到区分两类化合物的能力。结果UHPLC-Q-Orbitrap MS最终采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,经乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,柱温30℃,源喷雾电压正负离子分别为3.2 kV和2.8 kV;毛细管温度200℃;辅助器加热温度400℃。使用128个对照品(108个作为训练集和20个作为验证集)的高分辨质谱数据进行深度神经网络建模,并对另外20个对照品的高分辨质谱数据进行模型的测试,平均正确率达80%。结论基于UHPLC-Q-Orbitrap MS技术采集高分辨质谱数据,并使用深层前馈神经网络进行建模的分类方法,可以有效地对黄酮类和[口山]酮类化合物进行区分。

协日嘎-4味散成分组成分析及6种成分含量测定

目的分析协日嘎-4味散成分组成,并测定黄柏碱、绿原酸、栀子苷、小檗碱、芦丁、姜黄素的含量。方法高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)定性分析采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.35 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子扫描。高效液相色谱串联三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)定量分析采用Shim-pack GIST-HP C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm);流动相甲醇-0.1%甲酸;体积流量0.25 mL/min;柱温35℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果共鉴定出65种成分,包括19种生物碱、13种有机酸、13种黄酮、7种姜黄素、6种环烯醚萜、4种脂肪酸、2种醛、1种氨基酸。6种成分在各自范围线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率96.44%~102.37%,RSD 2.05%~3.74%。结论本研究可为协日嘎-4味散的质量控制提供参考。

基于UHPLC-Q-Orbitrap-MS比较不同产地黄芪饮片的成分差异

目的探究黄芪的3个重要产地(山西浑源与朔州、甘肃渭源与岷县、陕西子洲)所产黄芪饮片的成分差异,为其基原鉴定与质量研究提供参考依据。方法用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap-MS)测定3个不同产地黄芪饮片的化学成分。以变量投影重要性(VIP)>1、P<0.05为标准,筛选获得其显著差异成分,用SIMCA软件对所得化合物及差异化合物进行聚类分析、偏最小二乘法判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)。结果4-羟基肉桂酸、胱氨酸、刺芒柄花素等21个化合物在甘肃、陕西、山西3个产地黄芪之间存在显著差异,其中甘肃与山西产地的黄芪差异性成分有1个,山西与陕西产地的黄芪差异成分有11个,甘肃与陕西产地的黄芪差异成分有18个。结论基于UHPLC-QOrbitrap-MS液质联用技术及聚类分析、PLS-DA等成分分析方法所得21个差异性成分,可为不同产地及品种黄芪饮片的来源鉴定及质量控制提供理论依据。