基于NanoLC-Orbitrap MS技术分析牛乳中的乳脂肪球膜蛋白质

运用纳升高效液相色谱与静电场轨道阱组合式高分辨质谱(Nano LC-Orbitrap MS)技术对牛乳中的乳脂肪球膜蛋白质进行定性、定量分析。采用超高速离心提取的方法,从牛乳中分离提取乳脂肪球膜蛋白,经超滤管辅助酶解法前处理,用Nano LC-Orbitrap MS技术分析酶解后的肽段,与数据库检索比对识别蛋白质,并利用PANTHER数据库对所识别的肽段匹配数≥2的蛋白质进行基因本体功能注释和分类。运用两个技术重复和3次连续进样,验证方法的重复性和精确度;从比对结果中提取部分离子流色谱图和二级质谱图,显示出质谱的高可靠性和灵敏度。采用此方法一次进样分析,可识别的蛋白质多达658种,选取识别出611种蛋白质的数据进行分析,具有可靠定量信息的蛋白593种,特异性肽段匹配数≥2的蛋白244种,对这244种蛋白进行GO注释,结果显示这些蛋白主要分布在细胞部分、细胞器、细胞膜和一些高分子复合物中,参与代谢过程、细胞过程、定位、生物调节和免疫系统过程等生物途径,具有很多的分子功能,如催化活性、粘合作用、转运活性、酶调节活性和结构分子活性等。此方法可为基于质谱技术的蛋白组学在乳脂肪球膜蛋白质的应用中提供理论指导。