越南伯克霍尔德氏菌B418培养条件的优化

以越南伯克霍尔德氏菌B418为研究对象,采用均匀设计实验、正交设计实验和单因子实验研究了各种因素对菌株生长的影响.确定了B418生长最佳培养基配方为（g· L-1）：葡萄糖10,蛋白胨5,硫酸镁2,硫酸铵3,玉米粉30,黄豆粉10,磷酸二氢钾1,磷酸氢二钾1,初始pH值7.5.主要影响因子为硫酸镁,其次为硫酸铵.其它优化培养条件包括：接种量5％、培养温度28℃、培养时间28 h、转速180 r·min-1.利用优化条件上500 L发酵罐,通气量1 ～3 L· min-1,B418在16 h进入对数生长期,28 h进入稳定期,活菌数达210.5×108 cfu·mL-1.

越南伯克霍尔德氏菌B418杀线虫活性产物的分离鉴定

为探寻越南伯克霍尔德氏菌B418代谢产物中的杀线虫活性物质,采用色谱分离技术和活性跟踪的方法,从越南伯克霍尔德氏菌B418代谢产物中分离鉴定出六氢-3-(异丙基)-吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮和六氢-3-(苯甲基)-吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮两种活性化合物。生物测定结果显示,两化合物在相对含量比为2.81∶1,使用浓度为20mg/mL情况下,对南方根结线虫和秀丽隐杆线虫48h校正致死率分别为60.45%和67.37%,即对南方根结线虫和秀丽隐杆线虫均有杀虫活性。

越南伯克霍尔德氏菌B418杀线虫活性产物的稳定性研究

研究越南伯克霍尔德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）B418产生的杀线虫活性代谢产物,采用根结线虫（Meloidogyne spp.）2龄幼虫生物测定法对B418发酵液上清液的热稳定性、酸碱稳定性及有机溶剂的稳定性进行了研究。结果表明,B418代谢产物的处理温度最高不应超过60℃;pH稳定范围为7.0～10.0,其中pH为7.0时B418代谢产物活性最高,B418代谢产物处理后8 h试虫最高校正致死率为76.63%;以乙酸乙酯、石油醚、丙酮、正丁醇均降低了B418代谢产物的杀线虫活性,氯仿不影响代谢产物活性,氯仿处理后的代谢产物线虫死亡率稳定在74%以上。

越南伯克霍尔德氏菌B418的红色荧光蛋白标记及功能稳定性

利用氨基纳米黏土介导的转化方法,应用红色荧光蛋白DsRed标记生防细菌越南伯克霍尔德氏菌Burkholderia vietnamiensis B418并研究标记菌株的功能稳定性。将带有DsRed基因的重组质粒pGEX-4T-1-DsRed转化导入B418菌株中,采用细菌培养法、继代培养法和平板对峙培养法检测标记菌株的功能稳定性。通过氨基纳米黏土转化体系成功获得了荧光标记菌株B418-DsRed,与野生菌株B418相比,其生长曲线和形态学特征基本一致。继代培养10代后,标记菌株在共聚焦显微镜下呈现亮红色荧光,能够提取到外源质粒pGEX-4T-1-DsRed,并通过聚合酶链式反应扩增获得荧光基因序列DsRed,证明标记菌株具有较好的遗传稳定性。平板对峙培养试验显示,标记菌株B418-DsRed对尖孢镰孢菌和大丽轮枝菌抑制率分别为55.25%和67.55%,与野生菌株B418无显著性差异,表明外源质粒的导入未影响菌株的抑菌能力。以上结果表明通过氨基纳米黏土介导成功实现了伯克霍尔德氏菌B418的红色荧光蛋白标记,构建的标记菌株B418-DsRed可用于该生防菌在植物根际的定殖及与病原菌的互作研究。

越南伯克霍尔德氏菌B418配合噻唑膦提高对黄瓜根结线虫的防控效果

根结线虫是严重影响我国蔬菜生产的重要病害之一。本试验改进了根结线虫小区试验设计,依据土壤中根结线虫数量将试验地划分为线虫轻度、中度、重度3种类型区组,区组内再随机排列,克服了直接随机排列出现的结果偏差。结果表明,在黄瓜根结线虫防治过程中,采用越南伯克霍尔德氏菌B418配合噻唑膦处理土壤,可以明显降低黄瓜根结线虫病情指数,提高噻唑膦对黄瓜根结线虫病的防效,定植后105 d防治效果显著高于单一噻唑膦处理,在线虫轻度、中度、重度3种类型小区的平均防效达到63.99%,同时促进了植株的根系发育,产量也有明显提升,实现了协同增效的作用。

越南伯克霍尔德氏菌B418微胶囊的制备及其稳定性

[方法]越南伯克霍尔德氏菌B418是优良的生物控制剂,在前期研究中其主要应用剂型为可湿性粉剂,但其保存期较短,而微胶囊的应用可解决该问题。利用双流体气流式雾化器制备越南伯克霍尔德氏菌B418的微胶囊,采用单因子实验研究微胶囊制备的合适条件,利用经典加速实验确定微胶囊的保存期。[结果]微胶囊最佳制备条件包括:壁材海藻酸钠20～30 g/L,固化剂氯化钙40～50 g/L,芯材B418菌液1.0×1012 cfu/L,搅拌速度150～200 r/min,保护剂脱脂奶粉500 g/L,乳化剂吐温80 5 g/L,微胶囊释放液为pH值6.8的磷酸缓冲液。在25℃下保存677 d,微胶囊中菌株B418的存活率仍在90%以上。[结论]微胶囊是适合菌株B418的剂型,该剂型的保存期接近2年,完全满足大生产的需求。

生防菌剂YKT41及B418防治茄子根结线虫病的田间试验

为了验证褐球固氮菌YKT41和越南伯克霍尔德氏菌B418对茄子根结线虫病的防治作用,进行了田间防治效果试验。结果表明,在使用30.0 kg/hm2微生物制剂(活菌数≥20×108 cfu/g)的情况下,YKT41及B418活菌制剂的防治效果分别达到了72.8%和75.6%,增产效果分别达到了14.6%和12.7%,具有良好的推广使用价值。试验还表明,该微生物菌剂主要以活体微生物起作用,灭活后使用效果较差,因此一定要在保质期内使用。

臭氧水与生防菌剂组合应用对番茄根结线虫及根际微生物群落的影响

为了明确臭氧水与菌剂组合应用对番茄根结线虫的防治效果,采用定量接种法探究臭氧水与不同菌剂组合处理对沙培和土培番茄生长、南方根结线虫防治效果及根际土壤微生物群落的影响。结果表明,单独臭氧水处理对番茄生长无影响,8 mg/L的臭氧水可显著减少番茄根系根结的形成,使盆栽番茄根际土中南方根结线虫群体密度降低90.79%。臭氧水与哈茨木霉T11-W和伯克氏菌B418组合处理,番茄株高和鲜质量与对照相比分别增加61.64%、90.90%,对根结线虫的相对防效为69.95%。臭氧水与B418组合处理,番茄株高和鲜质量分别增加59.10%、68.86%,对根结线虫的相对防效为64.39%。臭氧水与哈茨木霉T11-W和伯克氏菌B418组合处理可降低细菌的丰富度,增加真菌群落多样性和丰富度,显著降低链格孢属(Alternaria)、镰刀菌属(Fusarium)等潜在植物病原真菌的相对丰度。该研究为臭氧水与菌剂组合防治番茄根结线虫病提供了理论依据。

一株烟草疫霉菌拮抗菌的筛选及应用潜力初探

从烟草疫霉病发病严重的烟田取健康植株根系土壤,通过平板对峙法筛选对烟草疫霉菌有拮抗作用的菌株,获得1株对烟草疫霉菌有明显抑制作用的菌株LZW-118,平板抑制率达到71.14%。通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,该菌株为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)。促生潜力试验结果表明,该菌株对烟草疫霉的抑制作用显著,同时兼具溶磷固氮功能,能够提高烟草株高、叶长、叶宽、茎围、叶片数等农艺性状,具有较好的生物防治应用潜力。

生防细菌T132的鉴定及其对采后柑橘炭疽病的抑制效果

【目的】柑橘(Citri)是世界上重要的果树。由胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)]引起的柑橘炭疽病是柑橘生产的主要病害之一。为探索对采后柑橘炭疽病有效的生防措施,分离鉴定柑橘根围土壤中一株细菌T132,并研究其特性及生防效果。【方法】根据菌株T132的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA序列对其进行鉴定;通过连续8次在人工培养基上传代培养,测定该菌株的遗传稳定性;采用柑橘果实刺伤挑战接种和拮抗菌液直接浸泡健康果实两种方法研究该菌株对柑橘炭疽病的抑菌防病效果;利用洋葱伯克霍尔德氏菌致病因子的特异性引物检测菌株T132是否为潜在的人类致病菌。【结果】菌株T132鉴定为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)。连续8次在人工培养基上传代培养,菌株T132抑制胶孢炭疽病菌生长的能力没有发生明显改变。菌株T132对胶孢炭疽菌C.gloeosporioides引起的柑橘炭疽病有明显的防治作用,刺伤接种的防效为88.2%,自然发病的防效为54.9%。未检测到该拮抗菌株有人体致病相关的洋葱伯克霍尔德氏菌致病因子(BCESM)毒力基因。【结论】首次报道对柑橘采后炭疽病具有生防效果、对人类相对安全的越南伯克霍尔德氏菌生防菌株。

水稻纹枯病生防菌株的筛选、鉴定及其防治效果

为获得对水稻纹枯病有生防潜力的菌株,从湖北省恩施土家族苗族自治州植物根际土壤中分离获得菌株,筛选对水稻纹枯病菌有拮抗作用的菌株,并测定其发酵液的抑菌活性、抑菌谱及生物学特性;基于形态学特征、生理生化特征及分子生物学特征对其进行分类鉴定,并通过离体叶片、室内盆栽和田间试验进一步评价其生防潜力。结果显示,从根际土壤中共分离获得162株菌株,其中生防菌株E12对水稻纹枯病菌的抑制率最高,达94.93%,且该菌株对常见的12种植物病原菌均有抑制作用,抑制率在59.84%~93.14%之间;生防菌株E12能分泌蛋白酶、嗜铁素和淀粉酶,具有固氮及形成生物被膜的能力;结合形态学特征、生理生化特征及分子生物学特征,将菌株E12鉴定为越南伯克霍尔德氏菌Burkholderia vietnamiensis;生防菌株E12处理离体水稻叶片后,其相对病斑长度较对照显著减小,对水稻纹枯病的室内盆栽和田间防治效果分别为62.51%和67.78%。表明越南伯克霍尔德氏菌E12在防控水稻纹枯病方面有较好的潜力。