血清CX3C基序趋化因子配体1及Ⅰ型纤溶酶原激活抑制物水平与慢性阻塞性肺疾病合并Ⅱ型呼吸衰竭患者病情严重程度及预后的关系研究

目的 研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3C基序趋化因子配体1(CX3CL1)、Ⅰ型纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)水平与病情严重程度及预后的关系。方法 选取2019年1月至2021年1月重庆医科大学附属永川医院收治的COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者96例为研究对象(呼吸衰竭组)、同期诊治的单纯COPD患者60例为单纯COPD组、同期健康体检的健康人群60例为健康对照组。检测受试者血清CX3CL1、PAI-1水平。比较不同健康状况受试者、不同病情严重程度呼吸衰竭组患者血清CX3CL1、PAI-1水平差异。分析影响COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后的因素以及血清CX3CL1、PAI-1对不良预后的预测价值。结果 呼吸衰竭组、单纯COPD组CX3CL1、PAI-1水平均高于健康对照组[(266±29)、(219±35)ng/L比(156±23)ng/L,(15.2±2.3)、(12.3±2.2)μg/L比(8.2±1.8)μg/L],且呼吸衰竭组高于单纯COPD组(均P<0.05)。呼吸衰竭组中轻度组、中度组、重度组血清CX3CL1、PAI-1水平随疾病严重程度加重呈上升趋势(均P<0.05)。COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3CL1、PAI-1水平与第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV1/FVC比值)呈负相关(均P<0.001)。呼吸衰竭组中预后不良组血清CX3CL1、PAI-1水平均高于预后良好组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清CX3CL1、PAI-1升高是COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后的独立危险因素(均P<0.001)。血清CX3CL1、PAI-1联合检测对COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者不良预后预测的曲线下面积大于CX3CL1、PAI-1单独诊断(均P<0.001)。结论 COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清CX3CL1、PAI-1水平升高,二者与病情严重程度有关,联合检测有助于评估COPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者的临床预后。

绝经后骨质疏松症患者血清CCL2,CX3CL1和CXCL10的水平表达及对骨折发生的预测价值

目的探讨血清CC趋化因子配体2(CC chemokine ligand 2,CCL2)、CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)及CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)在绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)患者中的表达及其联合骨折风险评估工具(fracture risk assessment tool,FRAX)预测骨折发生的价值。方法选取2022年1月~2023年6月海南西部中心医院收治的PMOP患者120例,根据其发生骨折情况分为骨折组(n=52)和未骨折组(n=68),根据FRAX评分检查分为骨折高风险组(n=73)和骨折低风险组(n=47)。比较各组血清CCL2,CX3CL1及CXCL10水平。多因素Logistic回归分析影响PMOP患者发生骨折的危险因素,绘制ROC曲线分析CCL2,CX3CL1及CXCL10联合FRAX评分预测PMOP发生骨折的价值。结果骨折组血清CCL2(134.98±32.24 pg/ml),CX3CL1(186.25±41.60 pg/ml)及CXCL10(223.47±56.43 pg/ml)水平均明显高于未骨折组(82.26±17.30 pg/ml,105.23±23.78 pg/ml,151.47±43.14 pg/ml),差异具有统计学意义(t=11.503,13.452,7.923,均P<0.001)。骨折高风险组血清CCL2(119.70±37.56 pg/ml),CX3CL1(161.43±53.79 pg/ml)及CXCL10(204.06±61.41pg/ml)水平均明显高于低风险组(82.43±17.23 pg/ml,107.55±24.75 pg/ml,149.45±42.50pg/ml),差异具有统计学意义(t=6.377,6.436,5.327,均P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,血清CCL2,CX3CL1及CXCL10水平升高是影响PMOP患者发生骨折的危险因素。ROC曲线显示,CCL2,CX3CL1及CXCL10联合FRAX评分预测PMOP发生骨折的AUC(95%CI)最大[0.951(0.892~0.993)],其敏感度和特异度分别为98.2%,85.6%。结论血清CCL2,CX3CL1及CXCL10水平升高是影响PMOP患者发生骨折的危险因素,联合FRAX评分对骨折具有较好的预测价值。

血清S100A4、ANGPTL4、CX3CL1水平联合检测对急性心肌梗死患者PCI术后MACE发生的预测价值

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后血清钙卫蛋白A4(S100A4)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)水平变化,并分析其对主要不良心血管事件(MACE)发生的预测价值。方法:选取2020年2月至2023年2月于平顶山市第一人民医院接受PCI治疗的152例AMI患者为研究对象,依据术后6个月MACE发生情况分为发生组、未发生组,比较两组临床资料及血清S100A4、ANGPTL4、CX3CL1水平。多因素Logistic回归分析MACE发生的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清S100A4、ANGPTL4、CX3CL1水平对MACE发生的预测价值。结果:152例AMI患者PCI术后6个月MACE发生率为34.21%(52/152);发生组术后1个月血清S100A4、CX3CL1水平高于未发生组,ANGPTL4水平低于未发生组(P<0.05);B型脑钠肽(BNP)、心功能分级及术后1个月血清S100A4、CX3CL1水平为MACE发生的独立危险因素,左心室射血分数(LVEF)、术后1个月血清ANGPTL4水平为MACE发生的独立保护因素(P<0.05);术后1个月血清S100A4、ANGPTL4、CX3CL1联合检测预测MACE发生的AUC大于单项指标预测(P<0.05)。结论:血清S100A4、ANGPTL4、CX3CL1联合检测对AMI患者PCI术后MACE发生具有一定预测价值。

趋化因子CX3C受体1基因rs3732378多态性与急性冠状动脉综合征的相关性

目的探讨趋化因子CX3C受体1(CX3CR1)基因rs3732378单核苷酸多态性与急性冠状动脉综合征(ACS)的相关性。方法连续收集中国北方汉族人群951例,其中男性520例,女性431例,年龄35~75岁。根据冠状动脉造影(CAG)结果分为2组:(1)病例组(n=512):ACS患者;(2)对照组(n=439):非冠心病患者。病例组根据CAG检查血管病变支数分为3个亚组。采用测序法测定CX3CR1基因rs3732378单核苷酸多态位点的基因型。用多因素Logistic回归分析CX3CR1基因rs3732378多态性与ACS发病风险的关系。应用酶联免疫吸附法检测血浆中趋化因子CX3C配体1(CX3CL1)表达水平。结果两组CX3CR1基因rs3732378的基因型及等位基因的分布频率无显著性差异(P>0.05)。rs3732378多态位点与ACS发病风险的总体和分层分析结果表明,CX3CR1基因rs3732378多态位点的3种基因型TT、TC和CC均不能增加ACS的发病风险(P>0.05)。亚组分析显示,rs3732378多态位点的基因型和等位基因与冠状动脉血管病变支数无相关性(χ2=0.135,P=0.998;χ2=0.026,P=0.987)。病例组和对照组血浆中CX3CL1表达水平在rs3732378三种基因型无差异(P>0.05)。结论 CX3CR1基因rs3732378多态位点不是ACS的易感基因,rs3732378多态性没有增加中国北方汉族人群ACS的风险。

急性牙髓炎患儿血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平与根管治疗期间急症发生的关系

目的 探讨急性牙髓炎患儿血清脂多糖信号受体(CD14)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、趋化因子CX3C配体1(CX3CL1)与根管治疗期间急症(EIAE)发生的关系。方法 选择急性牙髓炎患儿100例(牙髓炎组)、健康体检儿童100例(对照组),采用酶联免疫吸附法检测两组血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平;对牙髓炎组进行常规一次性根管治疗,记录EIAE的发生情况。采用Logistic回归分析血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平与EIAE发生的关系,采用ROC曲线分析相关指标对EIAE发生的预测价值。结果 牙髓炎组治疗前血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平均高于对照组(P均<0.05)。牙髓炎组发生EIAE 23例,其中前牙2例、前磨牙8例、磨牙13例。Logistic逐步回归分析结果显示,根尖X线阴影及术前血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平升高是EIAE发生的独立危险因素(P均<0.05)。术前血清CD14、HIF-1α、CX3CL1及有根尖X线阴影联合对急性牙髓炎患儿EIAE发生具有较好的预测价值(AUC=0.837)。结论 急性牙髓炎患儿血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平明显升高,与EIAE发生密切相关;根管治疗前检测上述指标有助于早期预测EIAE发生。

电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病神经病理性疼痛模型大鼠脊髓背角CX3CL1、AC3、CGRP和SP物质表达的影响

目的观察电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病(cervical spondylotic radiculopathy,CSR)神经病理性疼痛大鼠脊髓背角CX3C趋化因子配体1(C-X3-C motif chemokine ligand 1,CX3CL1)、腺苷酸环化酶3(adenylate cyclase 3,AC3)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物质(substance P,SP)表达的影响,探讨电针颈夹脊穴治疗CSR引起的神经病理性疼痛的相关镇痛机制。方法48只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和电针组,每组12只。电针组给予电针双侧C6、C7夹脊穴,模型组和假手术组在电针组干预同时间点进行绑缚处置。观察大鼠在术前第1天、术后第14天、术后第28天患侧前足热刺激缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)的变化,采用Western blot法和Real time PCR法检测患侧脊髓背角CX3CL1蛋白和基因的表达,采用免疫荧光法检测患侧脊髓背角AC3、CGRP和SP的表达。结果各时间点与空白组比较,假手术组患侧前足PWTL差异均无统计学意义(P>0.05);术后第14天,与假手术组比较,模型组和电针组大鼠患侧前足PWTL均减少(P<0.01);术后第28天,与模型组大鼠比较,电针组大鼠患侧前足PWTL升高(P<0.01);电针组大鼠术后第28天患侧前足PWTL较术后第14天升高(P<0.01)。与空白组比较,假手术组大鼠患侧脊髓背角CX3CL1、AC3、CGRP、SP蛋白和CX3CL1基因的表达差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,模型组大鼠患侧脊髓背角CX3CL1、AC3、CGRP、SP蛋白和CX3CL1基因的表达均明显升高(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠患侧脊髓背角CX3CL1、AC3、CGRP、SP蛋白和CX3CL1基因的表达均明显降低(P<0.05)。结论电针颈夹脊穴治能够改善CSR神经病理性疼痛模型大鼠的热痛觉过敏,并通过抑制脊髓背角初级感觉神经元的CX3CL1、AC3、CGRP和SP合成表达,减轻了神经炎性反应,降低脊髓背角初级感觉神经元的兴奋性,从而阻碍神经中枢的敏化。

沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞生长及其趋化效应的影响

目的构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,b MSCs)生长及其趋化效应的影响。方法首先分离、培养大鼠骨髓b MSCs,并予以流式细胞术检测鉴定。针对CX3CL1基因mRNA序列,筛选3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点并予以合成。把合成的siRNA导入b MSCs,Western blot检测其对靶基因编码蛋白的抑制效应,以此明确最佳siRNA。设计与合成针对最佳siRNA序列的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA),连入CD513B-1慢病毒载体,构建CD513B-1/CX3CL1 shRNA慢病毒,并行测序鉴定。测序正确者用293T细胞包装成具有高效感染力的CD513B-1/CX3CL1 shRNA重组慢病毒,该重组病毒用于感染b MSCs。分离培养大鼠脾巨噬细胞,将其与被感染的b MSCs共培养。倒置显微镜下观测被感染b MSCs的绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;CCK-8检测被感染b MSCs的生长变化;Real-time PCR检测被感染b MSCs的CX3CL1与核抗原PCNA基因的表达变化;Western blot检测被感染b MSCs的CX3CL1和PCNA蛋白,与被感染的b MSCs共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF和IL-8的表达变化。结果大鼠b MSCs得以分离、培养和鉴定。筛检得CX3CL1基因的最佳干扰序列:CTCTATGAGCAATTATTTA;测序证实,成功构建重组慢病毒载体CD513B-1/CX3CL1 shRNA。荧光观察表明,被CD513B-1/CX3CL1shRNA病毒感染的b MSCs明显表达GFP。CCK-8检测结果显示,与对照细胞比较,沉默CX3CL1的b MSCs的生长减慢,48 h开始更为明显(P<0.01);Real-time PCR、Western blot检测结果证实,CX3CL1基因的shRNA慢病毒能有效沉默b MSCs的CX3CL1,并下调其核抗原基因PCNA及其蛋白的表达,沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。结论成功构建CX3CL1基因RNAi重组慢病毒载体。该病毒载体能有效沉默b MSCs的CX3CL1基因,使b MSCs的生长减慢并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达。沉默CX3CL1的b MSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达。

慢性萎缩性胃炎患者血清LTB4和CX3CL1表达水平及其诊断价值研究

目的 探讨慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)患者血清白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)和CX3C趋化因子配体1(CX3C ligand 1,CX3CL1)表达水平及其诊断价值。方法 研究对象为2018年3月~2021年3月忻州市中医医院收治的98例CAG患者,另选取同期80例健康体检者为对照组。采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清LTB4和CX3CL1水平,并分析两者与患者临床病理特征的关系。采用Pearson法分析CAG患者血清中LTB4与CX3CL1表达的相关性,采用Logistic回归分析影响该疾病发生的危险因素。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清LTB4和CX3CL1水平对CAG患者的诊断价值。结果与对照组相比,CAG患者血清中LTB4(8.15±2.13 pg/ml vs 5.89±1.26 pg/ml)和CX3CL1(132.06±30.59 pg/ml vs 100.26±12.61 pg/ml)表达均明显升高,差异具有统计学意义(t=8.368,8.710,均P <0.05);LTB4和CX3CL1表达水平与患者年龄、性别、Hp感染无关(χ^(2)=1.521~3.397,均P>0.05),与慢性炎症、胃黏膜萎缩、肠化生、不典型增生有关(χ^(2)=4.083~11.975,均P<0.05)。Pearson法分析显示,CAG患者血清中LTB4与CX3CL1表达呈正相关(r=0.235,P=0.020)。Logistic回归分析结果显示,血清LTB4(OR=1.777,95%CI=1.398~2.259)和CX3CL1(OR=1.054,95%CI=1.031~1.077)是影响CAG发生的独立危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,LTB4和CX3CL1及二者联合检测诊断CAG患者的AUC分别为0.805,0.822和0.877,二者联合诊断效能优于血清LTB4和CX3CL1各自单独诊断(Z二者联合-LTB4=3.031,P=0.024;Z二者联合-CX3CL1=2.340,P=0.019)。结论 CAG患者血清中LTB4和CX3CL1均呈高表达,是影响CAG发生的独立危险因素,且二者联合检测的诊断价值较高,可作为判断CAG病情活动期的观察指标。

血清cTnI、MYO、CX3CL1与AMI患者PCI术后心功能的关系及对短期内不良心血管事件的预测价值

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清肌红蛋白(MYO)、肌钙蛋白I(cTnI)、CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)水平,并分析其与经皮冠状动脉介入术(PCI)后心功能相关性及其对主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法 选取2021年1月至2023年1月该院收治的112例AMI患者为研究组,另选取同期于该院体检的健康志愿者37例为对照组。比较两组血清cTnI、MYO、CX3CL1水平及超声心动图参数[左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDV)]。比较研究组PCI术后不同心功能分级者血清cTnI、MYO、CX3CL1水平。分析血清指标与PCI术后心功能分级、超声心动图参数相关性。术后随访6个月,依据是否发生MACE分为发生者、未发生者,并比较血清指标水平变化。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清指标水平对MACE的预测价值。结果 研究组血清cTnI、MYO、CX3CL1水平高于对照组,LVEDD、LVESD、LVEDV高于对照组,LVEF低于对照组(P<0.05);血清cTnI、MYO、CX3CL1水平与LVEF呈负相关,与LVEDD、LVESD、LVEDV、PCI术后心功能分级呈正相关(P<0.05);术后7 d MACE发生者血清cTnI、MYO、CX3CL1水平高于未发生者(P<0.05);术后7 d血清cTnI、MYO、CX3CL1水平联合预测PCI术后MACE发生的AUC大于单项指标预测(P<0.05)。结论 血清c TnI、MYO、CX3CL1水平与AMI患者PCI术后心功能密切相关,联合检测其水平对PCI术后MACE发生具有一定预测价值。

急性心肌梗死患者PCI术后血清CX3CL1及hs-CRP水平与不良预后的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后血清CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)的水平变化,其对主要不良心血管事件(MACE)的预后评估效果。方法选取2018年4月至2019年7月于郑州大学第一附属医院诊断为AMI并首次行PCI的患者430例为研究对象,收集其临床资料,根据随访1年内是否发生MACE将430例患者分为MACE组(72例)和非MACE组(358例)。采用Cox比例风险模型对血清CX3CL1、hs-CRP以及基线资料和临床生化指标等进行危险因素分析。结果MACE组的年龄、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、CX3CL1、hs-CRP、左室射血分数、病变支数均显著高于非MACE组(P<0.05)。Cox单因素及多因素回归分析结果显示年龄(HR=1.048,95%CI:1.016~1.092,P<0.01)、CX3CL1(HR=1.116,95%CI:1.057~1.179,P<0.01)、hs-CRP(HR=1.320,95%CI:1.145~1.688,P<0.01)是AMI患者PCI术后发生MACE的独立危险因素。ROC曲线分析表明,CX3CL1截断值为2107.8 ng/ml时,敏感性和特异性分别为77.8%和64.0%(AUC=0.713,P<0.01);hs-CRP截断值为4.83 mg/L时,敏感性和特异性分别为81.9%和66.5%(AUC=0.811,P<0.01);二者联合检测AUC为0.842(P<0.01),其诊断效能优于CX3CL1及hs-CRP(P<0.05)。结论血清CX3CL1及hs-CRP联合检测在行PCI后的AMI患者中诊断价值较高,可用于AMI患者行PCI后的预后评估。

CD14、HIF-1α、CX3CL1与儿童急性牙髓炎易感性关系及诊断价值

目的探讨脂多糖信号受体(CD14)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、趋化因子CX3C的配体1(CX3CL1)与儿童急性牙髓炎(AP)易感性的关系。方法选取2018年1月至2020年12月本院收治的82例儿童AP患者(AP组)及40例健康儿童(对照组),比较两组基线资料、CD14、HIF-1α、CX3CL1,并比较不同CD14、HIF-1α、CX3CL1水平患者疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分,分析CD14、HIF-1α、CX3CL1与VAS评分关系以及儿童AP易感性的相关影响因素,评价各指标诊断AP的价值。结果 AP组中CD14、HIF-1α、CX3CL1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CD14、HIF-1α、CX3CL1高水平患者VAS评分高于低水平患者,差异有统计学意义(P<0.05);CD14、HIF-1α、CX3CL1与VAS评分正相关(P<0.05);CD14、HIF-1α、CX3CL1与儿童AP的易感性相关(P<0.05);CD14、HIF-1α、CX3CL1联合诊断AP的曲线下面积(AUC)最大,为0.926。结论血清CD14、HIF-1α、CX3CL1水平升高可能增加儿童AP易感性,并与疼痛程度存在良好线性关系,联合检测上述指标有助于儿童AP诊断。

miR⁃143⁃3p通过调控CX3CL1/CX3CR1信号通路对脂多糖诱导肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR⁃143⁃3p通过调控趋化因子(C⁃X3⁃C基元)配体1/趋化因子(C⁃X3⁃C基元)受体1(CX3CL1/CX3CR1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导肺泡上皮细胞损伤的影响。方法收集急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者及健康体检者外周血血清,标记为ALI/ARDS组和Normal组。双荧光素酶实验证实miR⁃143⁃3p与CX3CL1的靶向关系。体外培养人肺泡上皮细胞A549,并将细胞分成Con⁃trol组、LPS组、LPS+NC mimic组(转染NC mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic组(转染miR⁃143⁃3p mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pcDNA组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pcDNA)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pc⁃CX3CL1组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pc⁃CX3CL1)。qRT⁃PCR检测miR⁃143⁃3p和CX3CL1、CX3CR1 mRNA表达水平;Western blot检测CX3CL1、CX3CR1蛋白表达;MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;ELISA分析肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、血管内皮生长因子(VEGF)和降钙素原(PCT)水平。结果与Normal组相比,ALI/ARDS组患者外周血中miR⁃143⁃3p表达(0.52±0.05)降低,CX3CL1、CX3CR1的mRNA(1.79±0.08)、(1.65±0.06)和蛋白(1.03±0.15)、(0.98±0.12)表达升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组A549细胞中miR⁃143⁃3p表达减小,细胞活力降低,凋亡率[(23.56±0.85)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量增加(P<0.05)。miR⁃143⁃3p过表达后,细胞活力升高,凋亡率[(13.74±0.69)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR⁃143⁃3p直接负调控CX3CL1表达。CX3CL1过表达可明显逆转miR⁃143⁃3p过表达对LPS诱导的A549细胞损伤的影响和对CX3CR1 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论miR⁃143⁃3p通过抑制CX3CL1/CX3CR1信号通路,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。

CX3CL1/fractalkine通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞凋亡

目的 研究CX3C趋化因子配体1(CX3CL1/FKN)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞凋亡的机制。方法 用含红色荧光蛋白的过表达或敲低FKN的慢病毒质粒感染以及LPS处理小鼠RAW264.7巨噬细胞;使用流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡,Western blot法检测RAW264.7细胞FKN、 Wnt4、β联蛋白(β-catenin)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、 c-caspase-9、 B细胞淋巴瘤因子2相关X蛋白(BAX)和细胞色素C(CytC)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色检测c-caspase-3和c-caspase-9在RAW264.7细胞的表达和定位。结果 与空白对照组相比,LPS组的细胞凋亡率,FKN、 Wnt4、β-catenin、 c-caspase-3、 c-caspase-9、 BAX和CytC蛋白含量明显升高;与LPS组相比,FKN过表达联合LPS组细胞凋亡率明显下降,FKN、 Wnt4、β-catenin蛋白含量增加,而c-caspase-3、 c-caspase-9、 BAX和CytC蛋白含量降低,c-caspase-3和c-caspase-9在细胞质中的定位减弱;FKN敲低联合LPS组则结果相反。结论 CX3CL1/FKN激活Wnt/β-catenin信号通路减少线粒体凋亡途径关键蛋白的表达减轻LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡。

阿尔茨海默病小胶质细胞CX3CR1产物增加并受去甲肾上腺素的调节

去甲肾上腺素能神经元的丧失及其引起的脑去甲肾上腺素(NA)水平的降低与阿尔茨海默病(AD)的进展有关。这似乎主要是由于NA减少小胶质细胞活化的能力。我们以前观察到NA诱导神经元产生趋化因子Fractalkine/CX3CL1。小胶质细胞CX3CR1(CX3CL1的唯一受体)的激活会减少小胶质细胞的活化,已知这在很大程度上引起AD特征性的神经元损伤。因此,操控小胶质细胞中CX3CR1的产物可能转化为对CX3CL1抗炎作用的增强或抑制。为了确定小胶质细胞CX3CR1产物在AD中是否发生改变,以及NA是否可以控制这种改变,我们在5xFAD小鼠和人类AD脑样本中分析了CX3CR1的表达和合成。此外,我们分别在小胶质细胞培养物和小鼠中分析了NA及NA再摄取抑制剂瑞波西汀的作用。我们的结果表明,CX3CR1在AD大脑皮质中的产量增加,而给予瑞波西汀进一步增加了它的含量,并增强了小胶质对淀粉样β斑的反应性。然而,直接向原代大鼠小胶质细胞或人类HMC3细胞给予NA会抑制CX3CR1的产生,这表明小胶质细胞对NA的反应可能会在不存在产生CX3CL1的神经元或其他非小胶质外在因素的作用下发生改变。

米诺环素调控CX3CL1/CX3CR1信号通路对小鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响

目的探讨米诺环素(Min)调控CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)/趋化因子CX3C受体1(CX3CR1)信号通路对小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛的影响。方法将84只小鼠随机分为对照组、SAH组、Min低剂量组、Min高剂量组、尼莫地平组、CX3CL1中和抗体(CX3CL1抑制剂)组、Min高剂量+CX3CL1中和抗体组(每组n=12)。除对照组外,其他组小鼠均按照血管内穿线法构建SAH小鼠模型。所有小鼠均在建模前30 min和建模后1 d、2 d、3 d进行给药处理(×4次)。用改良Garcia评分法评估神经功能;ELISA法检测脑脊液中IL-1β、TNF-α水平;苏木精-伊红染色检测小鼠基底动脉病理变化;TUNEL染色检测小鼠基底动脉中内皮细胞凋亡;Western blot检测基底动脉中裂解的cleved-caspase-3、CX3CL1、CX3CR1蛋白表达。结果与对照组比较,SAH组小鼠神经功能评分及CX3CL1、CX3CR1蛋白水平降低,IL-1β、TNF-α水平、内皮细胞凋亡率及cleved-caspase-3蛋白水平升高,基底动脉管腔横截面积缩小、管壁厚度增加(均P<0.05)。与SAH组比较,Min低剂量组、Min高剂量组和尼莫地平组小鼠神经功能评分及CX3CL1、CX3CR1蛋白水平升高,IL-1β、TNF-α、cleved-caspase-3蛋白水平及内皮细胞凋亡率降低,基底动脉管腔横截面积变大、管壁厚度变小;CX3CL1中和抗体组对应指标变化趋势与上述相反(均P<0.05)。与Min高剂量组比较,Min高剂量+CX3CL1中和抗体组小鼠神经功能评分及CX3CL1、CX3CR1蛋白水平降低,IL-1β、TNF-α、cleved-caspase-3蛋白表达水平及内皮细胞凋亡率升高,基底动脉管腔横截面积缩小、管壁厚度增加(均P<0.05)。结论Min可能通过激活CX3CL1/CX3CR1信号通路改善小鼠SAH后脑血管痉挛。

速效牙痛宁酊辅助根管治疗对慢性牙髓炎患者口腔健康相关生活质量和血清Toll样受体4、CX3C趋化因子配体1的影响

目的:观察速效牙痛宁酊辅助根管治疗对慢性牙髓炎患者口腔健康相关生活质量和血清CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、Toll样受体4(TLR4)的影响。方法:选取衡水市中医院2019年9月~2021年6月期间收治的87例慢性牙髓炎患者(患牙87颗),根据随机数字表法分为观察组44例(患牙44颗,给予速效牙痛宁酊辅助根管治疗)、对照组43例(患牙43颗,给予根管治疗)。对比两组临床疗效,观察两组疼痛症状和口腔健康相关生活质量改善情况,比较两组血清TLR4、CX3CL1水平变化,并记录两组不良反应发生情况。结果:观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗2周后、4周后,两组视觉模拟量表(VAS)评分降低,且观察组较对照组低(P<0.05)。治疗4周后,两组口腔健康影响程度量表(OHIP-14)各领域(社交障碍、心理障碍、功能限制、生理障碍、残障、生理疼痛、心理不适)评分及总分降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗4周后,两组血清CX3CL1、TLR4水平下降,观察组较对照组低(P<0.05)。与对照组比较,观察组并发症总发生率较低(P<0.05)。结论:速效牙痛宁酊辅助根管治疗慢性牙髓炎患者,可有效减轻疼痛症状,提高口腔健康相关生活质量,作用机制可能与调节血清TLR4、CX3CL1水平有关。

血清CX3CL1、Semaphorin3A水平与创伤性骨折愈合的相关性研究

目的探究血清CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、信号素3A(Semaphorin3A)水平与创伤性骨折愈合的相关性。方法选取2020年1月—2022年1月华北医疗健康集团峰峰总医院收治的126例创伤性骨折患者作为研究对象,同时根据其术后1年的影像学复查结果(骨折影像学愈合评分<7)将126例患者分为愈合组(79例)和延迟愈合组(47例),另选取同时间段健康体检者62例为对照组。进行愈合组和延迟愈合组患者的一般资料比较;并比较对照组、愈合组和延迟愈合组血清CX3CL1、Semaphorin3A的表达水平以及骨生化相关指标差异;采用Pearson法对创伤性骨折延迟愈合患者血清CX3CL1、Semaphorin3A水平与骨生化相关指标的相关性进行分析;进一步采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CX3CL1、Semaphorin3A水平对创伤性骨折愈合的预测价值。结果愈合组与延迟愈合组患者的性别、年龄、病程、有无吸烟史、饮酒史、高血压、高脂血症、糖尿病和受伤原因无显著性差异(P>0.05);延迟愈合组患者的血清Semaphorin3A水平、骨生化相关指标钙磷乘积和25(OH)D3显著低于愈合组和对照组(P<0.05),血清CX3CL1水平显著高于愈合组和对照组(P<0.05);延迟愈合组患者的血清CX3CL1水平与骨生化相关指标钙磷乘积和25(OH)D3均呈负相关(r=-0.682、-0.568,P=0.000、0.003);Semaphorin3A水平与骨生化相关指标钙磷乘积和25(OH)D3均呈正相关(r=0.611、0.536,P=0.000、0.005);ROC曲线显示血清CX3CL1、Semaphorin3A单独预测和联合预测创伤性骨折患者发生延迟愈合的曲线下面积(AUC)分别为0.861、0.861、0.928,二者联合预测价值高于单独预测(Z_(二者联合-CX3CL1)=2.519,P=0.012、Z_(二者联合-Semaphorin3A)=2.389,P=0.017)。结论血清CX3CL1、Semaphorin3A水平与创伤性骨折患者愈合状况有关,并与骨生化相关指标具有相关性,且联合预测效果较好,密切监测血清CX3CL1、Semaphorin3A水平对于预测创伤性骨折患者发生延迟愈合具有一定的参考价值。

基于CX3CL1-CX3CR1轴探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠的神经保护作用及机制

基于CX3C趋化因子配体1(CX3C chemokine ligand 1,CX3CL1)-CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)轴,探讨左归降糖解郁方改善糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus complicated with depression,DD)模型大鼠神经炎症及增强神经保护作用的相关机制。通过4周高脂饲料饲养联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射及5周慢性温和不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)联合孤笼饲养建立DD大鼠模型,实验分为对照组、模型组、阳性药组、抑制剂组、中药组。旷场实验和强迫游泳实验评估大鼠抑郁情况,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,免疫荧光检测海马离子钙结合衔接分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)、突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD95)、突触蛋白-1(synapsin-1,SYN1),苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、尼氏(Nissl)染色和原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)荧光染色检测海马神经元损伤情况,免疫印迹法(Western blot)检测CX3CL1-CX3CR1轴相关蛋白CX3CL1、CX3CR1、腺苷A2A受体(A2A adenosine receptor,A2AR)、谷氨酸受体2A(glutamate receptor 2A,NR2A)、谷氨酸受体2B(glutamate receptor 2B,NR2B)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达情况。与模型组比较,左归降糖解郁方可以改善DD大鼠抑郁行为,增强神经保护作用;显著升高PSD95、SYN1、BDNF表达(P<0.01),降低Iba1、IL-1β和TNF-α表达(P<0.01)以及CX3CL1、CX3CR1、A2AR、NR2A和NR2B表达(P<0.01)。结果表明,左归降糖解郁方可能通过抑制CX3CL1-CX3CR1轴和海马小胶质细胞(microglia,MG)激活,进一步改善神经炎症与N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDA)亚基异常活化,从而提高海马中突触相关蛋白PSD95、SYN1和BDNF的表达来发挥神经保护作用。

BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P<0.01)及皮质区的蛋白水平(P<0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P<0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P<0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P<0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P<0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P<0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P<0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P<0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P<0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P<0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P<0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。

颅内动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血清CTRP3和CCL2与脑血管痉挛的关系

目的探讨颅内动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)患者血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)、CC趋化因子配体2(CCL2)水平与脑血管痉挛(CVS)的关系。方法选取2018年10月至2022年1月收治的120例aSAH患者,按aSAH患者术后3周内是否并发CVS分为无CVS组(87例)和CVS组(33例),另纳入同期120例健康体检者为对照组。采用ELISA法检测血清CTRP3和CCL2水平;用Logistic回归分析aSAH患者并发CVS的影响因素;采用ROC曲线评估血清CTRP3、CCL2判断aSAH并发CVS的价值。结果无CVS组和CVS组患者血清CCL2水平均高于对照组(均P<0.05),而CTRP3水平低于对照组(P<0.05)。CVS组的高血压病、高血脂、位于大脑前动脉的动脉瘤、Fisher分级≥Ⅲ级、Hunt-Hess分级≥Ⅲ级占比和血清CCL2水平均高于无CVS组(均P<0.05),而CTRP3水平低于无CVS组(P<0.05)。CVS程度越严重,CTRP3水平越低,CCL2水平越高(均P<0.05);高血压病、高血脂、Fisher分级≥Ⅲ级、Hunt-Hess分级≥Ⅲ级、大脑前动脉动脉瘤、CCL2是aSAH患者并发CVS的危险因素(均P<0.05),而CTRP3是aSAH患者并发CVS的保护因素(P<0.05);血清CTRP3、CCL2评估aSAH并发CVS的曲线下面积(AUC)分别为0.863(截断值:194.57 ng·mL^(-1))、0.871(截断值:206.65pg·mL^(-1)),敏感度均为87.9%,特异度分别为79.3%和80.5%;且CTRP3联合CCL2判断aSAH并发CVS的AUC为0.937,敏感度为84.8%,特异度为94.3%。结论aSAH患者血清CTRP3水平较低,CCL2水平较高,CTRP3、CCL2均可作为评估aSAH并发CVS的辅助指标,且两者联合评估可更好的判断a SAH并发CVS,是临床预防aSAH并发CVS的新方向。