C-C趋化因子受体2阳性外泌体抑制单核细胞浸润改善缺血再灌注后心肌损伤的实验研究

目的探讨C-C趋化因子受体2阳性(CCR2^(+))外泌体调控小鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的作用机制。方法将12只C57小鼠完全随机分为野生型(WT)假手术组、WT手术(IR模型)组、CCR2-外泌体手术组和CCR2^(+)外泌体手术组,其中后3组均构建了心肌IR损伤模型并给予相应处理。超声检测心脏结构及功能;Masson三色特殊染色法检测心脏组织内胶原沉积;转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡;免疫组织化学染色及实时荧光定量聚合酶链反应法检测单核细胞招募相关C-C趋化因子配体2(CCL2)表达以及单核细胞表面CCR2表达;流式细胞术检测心肌IR后梗死部位淋巴细胞抗原6复合体C(Ly6C)和CD_(43)单核细胞数量。结果心肌IR手术后7 d,CCR2^(+)外泌体手术组小鼠心脏纤维化面积小于IR模型组[(16.8±8.1)%比(45.7±3.8)%];射血分数明显低于WT假手术组,但高于IR模型组;小鼠心肌细胞凋亡数量小于IR模型组;小鼠心脏中CCR2蛋白相对表达量小于IR模型组;小鼠再灌注区域CCR2阳性细胞面积小于IR模型组;小鼠再灌注部位Ly6C+的单核细胞数明显低于IR模型组,CD_(43)^(+)的单核细胞数明显高于IR模型组;小鼠心脏中CCL2 mRNA和蛋白相对表达量小于IR模型组(均P<0.05)。结论CCR2^(+)外泌体表现出明显的抗心肌IR损伤的作用,其机制是CCL2表达减少抑制单核细胞浸润,从而减轻了心肌损伤和抑制心力衰竭。

乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2/C-C基序趋化因子受体2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究

目的 探讨乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2(CCL2)/C-C基序趋化因子受体2(CCR2)信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究。方法 研究起止时间为2021年12月至2022年10月。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测2.5、5.0、10.0、20.0、30.0μmol/L乌头碱处理后的人膀胱癌5637细胞存活率,筛选出合适的乌头碱作用浓度。将5637细胞分为对照组、乌头碱低剂量(10μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+空载组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+CCL2过表达组,分组处理后,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Edu)染色法及Hoechst 33258染色分别检测各组5637细胞存活率、增殖率、凋亡率;采用Transwell实验及划痕实验分别检测各组5637细胞侵袭数、迁移率;采用免疫荧光染色检测各组5637细胞凋亡相关蛋白BCL2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达比值(Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测各组5637细胞CCL2/CCR2信号通路相关蛋白及上皮间质转化标志蛋白[神经钙黏素(N-cadherin)、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、上皮钙黏素(E-cadherin)]表达。结果 与对照组相比,乌头碱低剂量组、乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2(0.69±0.09、0.20±0.03、0.19±0.04比1.21±0.13),CCR2(0.78±0.12、0.26±0.06、0.27±0.07比1.33±0.20)、Ncadherin(0.65±0.06、0.12±0.02、0.11±0.03比1.24±0.12)与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率均降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率相比乌头碱低剂量组进一步降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与Ecadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05)。与乌头碱高剂量组相比,乌头碱高剂量+CCL2过表达组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 乌头碱可通过CCL2/CCR2信号通路而抑制膀胱癌细胞存活、增殖及侵袭和迁移,促使其凋亡。

瞬时受体电位香草酸亚型1受体及C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的观察瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)受体基因缺陷和C-C趋化因子受体2(CCR2)阻断剂对盐敏感性高血压所致肾脏损害的影响。方法野生型和TRPV1基因缺陷(TRPV1-/-)小鼠通过切除左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水建立DOCA-盐高血压模型。DOCA-盐高血压组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)和DOCA-盐高血压-RS504393组(野生型和TRPV1-/-小鼠n均=8)分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2阻断剂RS504393,假手术组野生型和TRPV1-/-小鼠(n均=7)仅左肾切除和给予正常饮用水。实验共4周,实验期间和结束时分别检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、尿8-异构前列腺素排泄量和肌酐清除率。取右肾进行病理组织学分析,比较肾小球硬化指数、肾小管间质损伤程度及单核/巨噬细胞浸润程度。结果与相应的假手术组比较,野生型DOCA-盐高血压组和TRPV1-/-DOCA-盐高血压组的血压显著升高,24 h尿白蛋白和尿8-异构前列腺素排泄量显著增加,肌酐清除率显著下降(P均<0.05);肾小球硬化指数和肾小管间质损伤程度显著升高,且单核/巨噬细胞浸润数量显著增加(P均<0.05)。除血压外,TRPV-/-DOCA-盐高血压组上述病理变化均显著高于野生型DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。RS504393处理组的上述异常变化显著弱于相应的DOCA-盐高血压组(P均<0.05)。除假手术组外,DOCA-盐高血压组和DOCA-盐高血压-RS504393组的血压差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论在野生型和TRPV1-/-小鼠中,CCR2阻断剂均可抑制DOCA-盐高血压所致的肾脏损害及肾内单核/巨噬细胞浸润,并且其抑制作用在TRPV1-/-小鼠中明显增强,提示TRPV1受体可能通过抑制CCR2所介导的单核/巨噬细胞浸润来减轻盐敏感性高血压所造成的肾脏损害。

鞘氨醇激酶1通过阻止miRNA-19b-3p介导的C-C趋化因子受体2抑制促进肝纤维化

【据《Hepatology》2018年9月报道】题：鞘氨醇激酶1通过阻止miR-19b-3p介导的CCR2抑制促进肝纤维化（作者Guo J等）多种慢性肝病最终可进展为肝纤维化,如果不予以治疗,可进一步发展为肝硬化甚至肝癌,危及患者生命。因此,肝纤维化的早期防治特别关键。肝星状细胞（HSCs）和Kupffer细胞（KCs）的激活调控慢性肝脏疾病进展为肝纤维化。由于肝纤维化的发病机制复杂,目前临床上仍缺乏特异性、针对性的治疗药物和手段。

C-C趋化因子受体2在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用

目的探讨C-C趋化因子受体2(CCR2)在盐敏感性高血压所致肾脏损害中的作用。方法通过切除小鼠左侧肾脏、皮下包埋醋酸脱氧皮质酮(DOCA)和饮用盐水制备盐敏感性高血压小鼠模型,DOCA-盐高血压小鼠分为模型组和CCR2受体阻断剂组,分别皮下注射溶媒和特异性的CCR2受体阻断剂RS504393,对照组小鼠仅左肾切除和给予正常饮用水。检测动脉收缩压、24 h尿白蛋白排泄量、8-异构前列腺素排泄量、肌酐清除率、肾小球纤维样硬化指数、单核/巨噬细胞浸润程度。结果与对照组相比,模型组血压升高、24 h尿白蛋白和8-异构前列腺素排泄量增加、肌酐清除率下降、肾脏有较明显的肾小球纤维样硬化和肾小管间质损害,并伴有明显的单核/巨噬细胞浸润(P<0.05)。RS504393能显著抑制上述异常变化(P<0.05),使各项肾功能和肾形态学指标基本恢复正常,但RS504393对血压无影响。结论 CCR2受体阻断剂可抑制DOCA-盐高血压所致肾脏损害,CCR2受体介导的单核/巨噬细胞浸润在盐敏感性高血压诱导的肾脏损害中发挥重要作用。

C-C基序趋化因子样受体2、胰岛素样生长因子2在前列腺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的探讨C-C基序趋化因子样受体2(CCRL2)、胰岛素样生长因子2(IGF2)在前列腺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取101例前列腺癌患者,取其前列腺癌组织及距肿瘤组织3 cm处的癌旁组织,采用免疫组化法检测CCRL2、IGF2的表达情况,并分析不同临床特征前列腺癌患者CCRL2、IGF2的表达情况,前列腺癌患者预后复发的影响因素采用Logistic回归分析。结果前列腺癌组织中CCRL2、IGF2的阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。分化程度为低分化、临床分期为C~D期、远处转移前列腺癌患者前列腺癌组织中CCRL2、IGF2阳性表达率均高于分化程度为中高分化、临床分期为A~B期、无远处转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归模型分析结果显示,分化程度为低分化、临床分期为C~D期、远处转移、CCRL2阳性表达和IGF2阳性表达均为前列腺癌患者预后复发的独立危险因素(P﹤0.01)。结论CCRL2、IGF2在前列腺癌组织中阳性表达率较高,且分化程度为低分化、临床分期为C~D期、远处转移、CCRL2阳性表达和IGF2阳性表达均为前列腺癌患者预后复发的独立危险因素。

CCR10通过NRF2抑制结直肠癌细胞铁死亡的机制研究

目的探究C-C趋化因子受体10(C-C chemokine receptor 10,CCR10)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中对细胞增殖和铁死亡的影响,并探究其影响铁死亡的机制。方法在GEPIA数据库(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)共表达分析CCR10与铁死亡关键基因的相关性。构建慢病毒介导的CCR10过表达(CCR10-OE)、敲除(CCR10-KO)及其阴性对照(NC)稳转HCT116细胞,采用细胞活力(CCK8)、克隆形成和裸鼠成瘤实验检测CCR10过表达或敲除后的细胞增殖。利用CCK8法、流式细胞术检测细胞铁死亡和脂质过氧化,评估CCR10过表达及敲除后细胞对铁死亡诱导剂erastin和rsl3的耐受。利用WB检测CCR10过表达和敲除后铁死亡关键蛋白质的表达。在CCR10敲除细胞株瞬时转染核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,NRF2)质粒,鉴定铁死亡表型以及其下游分子溶质载体家族7成员11(solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione Peroxidase 4,GPX4)、铁重链蛋白1(ferritin Heavy Chain 1,FTH1)表达水平。结果CCR10表达与铁死亡抑制基因BCL-2(r=0.54,P<0.001)、FTH1(r=0.18,P<0.001)和NRF2(r=0.31,P<0.001)呈正相关,与铁死亡驱动基因TP53(r=-0.46,P<0.001)、TFRC(r=-0.45,P<0.001)和KEAP1(r=-0.29,P<0.001)呈负相关。CCR10过表达促进CRC细胞增殖(P<0.01),而CCR10缺失抑制CRC细胞增殖(P<0.01)和小鼠皮下肿瘤生长(P<0.001)。CCR10过表达或缺失分别抑制或促进其对铁死亡的敏感性(P<0.01),并影响转录因子NRF2表达。结论CCR10基因可以通过上调转录因子NRF2表达而抑制erastin和rsl3诱导的CRC细胞铁死亡。

槐定碱通过调节MCP-1/CCR2信号轴抑制膀胱癌恶性进展的实验研究

目的:探究槐定碱对膀胱癌恶性进展的影响以及该过程中对MCP-1/CCR2信号轴的调控机制。方法:通过CCK-8检测槐定碱对膀胱癌细胞5637的半数抑制浓度,随后将细胞分为对照组、槐定碱低浓度组、槐定碱高浓度组、槐定碱高+pcDNA组、槐定碱高+pcDNA-MCP-1组。CCK-8检测各组细胞的增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况和细胞周期;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MCP-1、CCR2蛋白的表达;qRT-PCR检测各组细胞中MCP-1、CCR2 mRNA的水平;建立移植瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况并检测肿瘤组织中MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白水平。结果:与对照组相比,槐定碱低、高浓度组细胞的存活率、克隆形成数量、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数量、Vimentin和N-cadherin表达、MCP-1和CCR2 mRNA及蛋白的水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、G2/M期细胞比例、E-cadherin表达升高(P<0.05);与槐定碱高浓度组相比,槐定碱高+pcDNA-MCP-1组细胞的存活率、克隆形成数量、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数量、Vimentin和N-cadherin表达、MCP-1和CCR2 mRNA及蛋白的水平均升高(P<0.05),细胞凋亡率、G2/M期细胞比例、E-cadherin表达降低(P<0.05);裸鼠体内移植瘤实验结果显示,与对照组相比,槐定碱组小鼠肿瘤组织的重量和体积减小,MCP-1和CCR2 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);与槐定碱组相比,槐定碱+pcDNA-MCP-1组小鼠肿瘤组织的重量和体积增加,抑瘤率减小,MCP-1和CCR2 mRNA及蛋白水平升高(P<0.05)。结论:槐定碱可能通过抑制MCP-1/CCR2信号轴来抑制膀胱癌的恶性进展。

血清CCL5、P2X7R水平与大血管闭塞性急性缺血性脑卒中并发恶性脑水肿的关系

目的探讨血清C-C基序趋化因子配体5(CCL5)、嘌呤能2X7受体(P2X7R)水平与大血管闭塞性急性缺血性脑卒中(AIS-LVO)并发恶性脑水肿(MBE)的关系。方法选择AIS-LVO患者162例(观察组),接受静脉溶栓联合机械取栓治疗后72 h并发MBE 43例、未并发MBE 119例,同期另选体检健康的志愿者60例作为对照组。采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用ELISA法检测血清CCL5、P2X7R。采用多因素Logistic回归模型分析AIS-LVO并发MBE的危险因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCL5、P2X7R水平对AIS-LVO并发MBE的预测价值。结果观察组血清CCL5、P2X7R水平均高于对照组(P均<0.05)。单因素分析发现,AIS-LVO患者并发MBE者NIHSS评分、ASPECTS评分及血清CCL5、P2X7R水平均高于其未并发MBE者(P均<0.05);多因素Logistic回归分析发现,NIHSS评分增加及血清CCL5、P2X7R水平升高为AIS-LVO并发MBE的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析发现,血清CCL5、P2X7R水平单独和联合预测AIS-LVO并发MBE的曲线下面积(AUC)分别为0.780、0.790、0.880,血清CCL5、P2X7R水平联合预测AIS-LVO并发MBE的AUC大于二者单独(P均<0.05)。结论血清CCL5、P2X7R水平升高是AIS-LVO并发MBE的独立危险因素;血清CCL5、P2X7R水平对AIS-LVO并发MBE均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

川陈皮素调节CCL2-CCR2信号轴对牙周炎大鼠炎性损伤的影响

目的:通过构建牙周炎大鼠模型探讨川陈皮素对牙周炎大鼠炎性损伤的影响及作用机制。方法:采用丝线结扎联合10%蔗糖饮水建立牙周炎大鼠模型;将牙周炎大鼠分为模型组、川陈皮素低剂量组、川陈皮素中剂量组、川陈皮素高剂量组,每组10只,另取10只大鼠为对照组;川陈皮素低、中、高剂量组分别灌胃25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg川陈皮素,对照组、模型组灌胃等量生理盐水。HE染色检测各组大鼠牙周组织病理形态变化;qPCR检测各组大鼠牙周组织C-C趋化因子配体2(CCL2)、C-C趋化因子受体2(CCR2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 mRNA水平;免疫组织化学染色检测各组大鼠牙周组织CCL2表达;Western blot检测各组大鼠牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达。结果:牙周炎大鼠模型建立4周后,与对照组相比,造模大鼠出现牙槽骨吸收、牙根松动有出血现象,表明牙周炎大鼠模型构建成功;与对照组相比,模型组大鼠牙周组织出现牙槽骨吸收、有大量炎性细胞浸润、CCL2阳性细胞数目增多,牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05);与模型组相比,川陈皮素低、中、高剂量组大鼠牙周组织炎性细胞浸润逐渐减轻,成纤维细胞数量逐渐增加,CCL2阳性细胞数目减少,牙周组织CCL2、CCR2、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:川陈皮素可能通过抑制CCL2-CCR2信号轴减轻牙周炎大鼠炎性损伤。

MCP-1／CCR2轴促进脐带间充质干细胞向肺癌组织归巢

目的:探讨单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoatractant protein-1,MCP-1)/趋化因子(C-C模体)受体2[chemokine(C-C motif)receptor 2,CCR2)轴在人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs)向肺癌归巢中的作用。方法:采用组织块培养法从健康新生儿脐带组织中分离HUMSCs并鉴定,构建BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型。体外应用Transwell趋化实验、体内应用IVIS Xenogen动物活体成像系统检测HUMSCs是否向肺癌归巢,ELISA法检测肺癌细胞A549培养上清中MCP-1分泌水平,转染shRNA敲低肺癌细胞内MCP-1的表达和用抑制剂RS504393抑制HUMSCs细胞表面的MCP-1受体CCR2后,体内外检测HUMSCs向肺癌归巢能力的改变。结果:成功分离得到HUMSCs并完成鉴定,成功建立BALB/c裸鼠皮下肺癌移植瘤模型。HUMSCs在体内外均能向肺癌归巢(P<0.01),肺癌细胞高表达MCP-1。成功构建稳定低表达MCP-1的肺癌A549细胞系,与对照组相比,shRNA1和shRNA2敲低组趋化HUMSCs的数目明显减少[(80.0±33.0)、(94.0±16.0)vs(167.0±41.0)个,均P<0.05],抑制HUMSCs细胞表面MCP-1受体CCR2后,体内外均显著抑制HUMSCs向肺癌的趋化能力(P<0.05)。结论:MCP-1/CCR2轴促进HUMSCs向肺癌归巢。

CCR2与盐性敏感性高血压小鼠肾脏损害的相关性研究

目的:探究C-C趋化因子受体2(C-C chemokine receptor 2,CCR2)在盐性敏感性高血压小鼠肾脏损害中的作用。方法:先切除小鼠的左侧肾脏,并将醋酸脱氧皮质酮包埋于皮下和饮用盐水以制备盐敏感性高血压小鼠模型,用随机数表法将盐敏感性高血压小鼠分为CCR2受体阻断剂组和模型组,并分别在其皮下注射特异性的CCR2受体阻断剂RS504393和溶媒。对照组小鼠仅给予正常饮用水和左肾切除,记录和比较小鼠的单核/巨噬细胞浸润程度、肾小球纤维样硬化指数、肌酐清除率、8-异构前列腺素排泄量、24h尿白蛋白排泄量、动脉收缩压等。结果:相比于对照组,模型组小鼠的肌酐清除率下降、血压升高。8-异构前列腺素和24h尿白蛋白排泄量增加,肾脏有明显的肾小管间质损害和肾小球纤维样硬化,单核/巨噬细胞浸润明显(P<0.05),而RS504393能够明显抑制上述病理变化(P<0.05),但不影响血压。结论:在盐敏感性高血压诱导的肾脏损害中,单核/巨噬细胞在CCR2受体介导下发挥了总要作用,而CR2阻断剂可抑制醋酸脱氧皮质酮-盐敏感性高血压所诱导的肝脏损害。

早期脊髓电刺激对大鼠脊髓损伤后疼痛的镇痛机制研究

目的:探究早期脊髓电刺激对大鼠脊髓损伤后神经病理性疼痛的疗效和脊髓背角内瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)和C-C趋化因子配体2(C-C chemok-ine ligand 2,CCL2)表达的影响。方法:雌性SD大鼠64只按随机数字表法分为4组:空白对照组、假手术组、脊髓损伤组、脊髓损伤+电刺激组,每组16只。观察术前、术后7、14天机械刺激缩足反射阈值(mechanicalwithdrawalthreshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermalwithdrawallatency,TWL)的变化,采用qPCR法和Western Blot法分别检测TRPV1和CCL2 mRNA及其蛋白表达,ELISA法检测炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α含量。结果:与空白对照组和假手术组比较,术后7、14天脊髓损伤组大鼠50%MWT和TWL降低、TRPV1和CCL2转录和表达升高(P<0.05)、IL-6、IL-1β和TNF-α表达升高(P<0.001);与脊髓损伤组相比,脊髓损伤+电刺激组大鼠50%MWT和TWL均上升、TRPV1和CCL2转录和表达下降(P<0.05)、IL-6、IL-1β和TNF-α表达下降(P<0.05)。结论:脊髓电刺激可能通过抑制TRPV1和CCL2表达、减轻炎症反应,缓解脊髓损伤后神经病理性疼痛。

炎症因子基因与缺血性脑卒中患者预后的相关性分析

目的探讨炎症因子MCP-1、CCR2、E-selectin基因多态性与缺血性脑卒中患者预后之间的相关性。方法采用病例对照研究方法,选取2014年10月-2016年10月于本院连续住院的缺血性脑卒中患者200例作为观察组,均经计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)明确诊断,同期选择本院健康体检者200例作为对照组,接受问卷调查、体格检查、采集血标本。抽取患者外周静脉血并提取DNA,采用Sequenom Massyarray技术检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)(rs1024611、rs3760396)、C-C趋化因子受体2 (CCR2)(rs1799864、rs1799865)、E-selectin (rs2076059、rs10800469、rs3917412、rs5368)的基因型。由经过统一培训的医护人员在缺血性脑卒中发病90 d后进行随访,记录改良Rankin评分(mRS)。采用Logistic回归分析评价各基因型与脑卒中预后之间的关系。结果在缺血性脑卒中患者中,E-selectin的rs2076059基因型和等位基因频率与对照组相比差异具有统计学意义(P <0. 05)。缺血性脑卒中患者E-selectin的rs2076059基因型多态性显著增加,MCP-1、CCR2基因的单核苷酸多态性(SNP)之间没有显著关联。经回归分析发现E-selectin基因rs2076059位点也是缺血性脑卒中发病的独立危险因素。根据mRS评分,E-selectin基因rs2076059位点G/A基因型携带者较G/G基因型患者发生预后不良的相对风险度为2.17(P=0.007,OR=2.17,95%CI:1.48～5.79)。结论E-selectin基因rs2076059位点是缺血性脑卒中发病的独立危险因素; rs2076059位点与缺血性脑卒中的预后有关;相较于G/G基因型,G/A基因型为风险基因型,更易导致缺血性脑卒中预后不良。

鞘内注射CCR2受体拮抗剂对腰椎间盘突出症大鼠疼痛及脊髓炎症因子的影响

目的探讨鞘内注射C-C趋化因子受体2型(CCR2受体)拮抗剂RS504393对腰椎间盘突出症(LDH)模型大鼠痛觉过敏及脊髓中炎症因子的影响。方法将30只雄性SPF级SD大鼠随机均分为五组:S组(假手术组)、NP组(自身髓核植入10d后鞘内注射生理盐水30μl)、V组(自身髓核植入10d后鞘内注射等容量溶剂)、RS1组和RS2组(自身髓核植入10d后鞘内分别注射等容量RS504393 10μg和25μg)。测定各组术前1d及术后不同时间点左后爪机械性缩爪阈值(MWT)。术后第10天鞘内注药并测定MWT后,ELISA法检测脊髓中IL-6和IL-1β水平。结果与S组相比,NP组MWT在术后1d即下降(P<0.01),并持续至少28d(P<0.01)。RS2组在给药后3、4、5h时MWT较V组升高(P<0.05或P<0.01)。RS2组脊髓中IL-6和IL-1β水平较NP组降低(P<0.01)。结论鞘内注射RS504393能抑制大鼠LDH痛觉过敏及其脊髓内炎症因子的水平;CCR2受体可能通过调节IL-6和IL-1β的水平,从而参与LDH疼痛的发生。

高良姜素调节CCL2-CCR2信号轴对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的 探究高良姜素对高糖诱导的血管内皮细胞(HUVEC)损伤的影响以及对CCL2-CCR2信号轴的调节机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为对照组、高糖组、高良姜素低、高浓度组、高良姜素高+pcDNA-NC、高良姜素高+pcDNA-CCL2组。利用CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞中ROS水平;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子配体2(CCL2)及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平;Western Blot检测细胞中兔抗人单克隆抗体(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;qRT-PCR检测细胞中CCL2、CCR2 m RNA水平。结果 与对照组比较,高糖组细胞存活率、SOD和GSH-PX活性、Bcl-2表达均降低,细胞凋亡率、ROS产生、MDA、IL-6、TNF-α和CCL2水平、Bax表达、CCL2和CCR2 m RNA水平均升高(P<0.05);与高糖组比较,高良姜素低、高浓度组细胞存活率、SOD和GSH-PX的活性、Bcl-2表达均升高(P<0.05),细胞凋亡率、ROS产生、MDA、IL-6、TNF-和CCL2水平、Bax表达、CCL2和CCR2 m RNA水平均降低(P<0.05)。随后利用CCL2过表达质粒进行回补实验,结果发现CCL2过表达逆转了高良姜素对高糖诱导HUVEC损伤的作用(P<0.05)。结论 高良姜素可以减轻高糖诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能与CCL2-CCR2信号途径被抑制有关。

补肾活血汤石油醚提取物对骨髓间充质干细胞表达Wnt5a/CCR2的影响

目的:探讨补肾活血汤石油醚提取物对骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达CCR2及其Wnt5a的影响。方法:索氏提取法提取补肾活血汤石油醚提取物;全骨髓贴壁筛选法培养BMSCs,取BMSCs第三代用于实验。石油醚部位按10,50,100μg/mL浓度梯度刺激BMSCs,利用免疫蛋白印迹法(Western blot)及其细胞免疫荧光检测CCR2蛋白表达情况,采用Western blot和qPCR检测Wnt5a蛋白和mRNA的表达。结果:Western blot和细胞免疫荧光结果显示石油醚提取物按照浓度梯度促进CCR2蛋白表达,以100μg/mL浓度最佳(P<0.01)。石油醚提取物同样促进Wnt5a蛋白及mRNA表达,其中Western blot结果亦以100μg/mL浓度最佳(P<0.01)。结论:补肾活血汤石油醚提取物亦能刺激MCP-1/CCR2信号轴,上调Wnt5a蛋白表达,初步发现迁移活性可能与Wnt5a通路相关。

H9N2亚型禽流感病毒感染TC-1细胞诱导的免疫反应

为了更好地了解宿主对禽流感病毒(AIV)感染后的免疫反应,本试验以TC-1细胞为模型,感染H9N2亚型AIV。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测了3种模式识别受体(TLR-3、RIG-I和MDA-5)和5种炎性细胞因子(IL-6、RANTES、IP-10、TNF-α和IFN-β)。结果显示:3种模式识别受体中MDA-5上调最为明显,5种炎性因子中RANTES和IP-10上调最为明显;而IL-6、TNF-α和IFN-β上调相对较平缓。本研究结果表明:在病毒感染过程中MDA-5反应较TLR-3和RIG-I更为强烈,而在炎性反应过程中RANTES和IP-10反应更加剧烈,IL-6、TNF-α和IFN-β反应则相对较温和一些。本研究在一定程度上反映了机体对流感病毒的免疫反应机制,为在生产中疫苗的使用具有一定的指导意义。