vMIP-Ⅱ——一种广谱的趋化因子受体拮抗蛋白

人疱疹病毒8型编码的一种趋化因子类似物(vMIP-Ⅱ)能与大量CC类和CXC类细胞因子受体高度亲和性结合,通过拮抗Ca^(2+)短暂迅速内流引起的信号传导,阻断趋化因子受体的趋化作用。vMIP-Ⅱ对趋化因子受体的广谱拮抗能力为开发广谱的抗人类免疫缺陷病毒药物、在非全身免疫抑制条件下治疗移植免疫排斥反应以及治疗其他炎性疾病引入了新的途径。

白介素-1β及其受体拮抗蛋白在肠缺血-再灌注所致急性肺损伤中的作用研究

目的 :探讨肠缺血再灌注 ( I/R)损伤时肺损伤的机制和白介素 1β及其受体拮抗蛋白 ( IL 1ra)的作用。方法 :用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成 I/R损伤模型 ,利用放射免疫分析法测定损伤前后和各处理组血液、肺组织灌洗液中 IL 1β和 IL 1ra水平。同时采用逆转录聚合酶链反应 ( RT PCR)法测定肺组织中 IL 1β和IL 1ra m RNA的表达含量。经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果 :I/R损伤后 6小时血液中 IL 1β和 IL 1ra有所增加 ,损伤组 IL 1β比对照组明显增加 ,而 IL 1ra不明显 ;但损伤组和对照组IL 1ra伤后 6小时比伤前自身对照组均明显增加。损伤组肺灌洗液中 IL 1β明显增多 ,而 IL 1ra不明显。肺组织中 IL 1β的 m RNA在损伤后表达明显增加 ,而 IL 1ra表达没有明显变化。经非特异性磷脂酶 A2( PLA2 )阻断剂 (氯喹和三氟拉嗪 )、血小板活化因子受体阻断剂 SR2 7417A、环氧化酶抑制剂消炎痛以及抗氧化剂愈创木酸等处理后 ,血清、肺灌洗液和肺组织中上述指标有不同程度的改变。肺内白细胞的聚集和浸润明显减少。结论 :IL 1β和 IL 1ra可能参与肠 I/R介导的急性肺损伤 ,并且和局部 PLA2

白介素1受体拮抗蛋白间接体内转基因对兔骨性关节炎的抑制作用

目的 探讨IL 1受体拮抗蛋白 (IL 1Ra)间接体内转基因对兔骨性关节炎临床表现及关节软骨破坏的抑制作用。方法 30只新西兰大白兔(8月龄 ,雌性 ,体重 2 5～ 3 0kg)随机分成 3组 ,左膝关节部分滑膜切除 ,分离并培养滑膜成纤维细胞。用携带标记基因或IL 1Ra基因的逆转录病毒分别转染从第 2组或第 3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞。采用兔右膝关节前交叉韧带横断术 (ACLT)建立骨关节炎模型。把自体滑膜细胞回输第 1组兔右膝关节腔内 ,把转染标记基因或IL 1Ra基因的自体滑膜细胞回输第 2组或第 3组兔右膝关节腔内。2、4周后 ,用ELISA方法检测右膝关节液中IL 1Ra水平。用膝关节临床评估级别对转IL 1Ra基因组和对照组膝关节局部疼痛刺激反应、步态改变、关节肿胀和活动范围进行评估。根据墨汁软骨表面着色和软骨组织病理改变情况对软骨破坏程度进行分级。结果 转IL 1Ra基因组 (第 3组)兔膝关节液中IL 1Ra水平明显升高 ,在基因转入关节腔后第 2周时为 2 0 6± 1 8ng/ml,第 4周时为 4 82± 0 5 2ng/ml;而 2、4周时 ,对照组(第 1、2组 )关节液中IL 1Ra水平均很低 ;转IL 1Ra基因组膝骨性关节炎的临床表现及膝关节软骨破坏程度 (大体及组织学观察 )均明显轻于对照组。结论 IL

白细胞介素-1受体拮抗蛋白诊断早期急性心肌梗死的临床价值

急性心肌梗死（AMI）的早期诊断对决定溶栓治疗起着十分重要的作用。对临床症状表现不典型、心电图呈非特异性改变的AMI患者,常用的心肌损伤标志物如肌红蛋白（Mb）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTnI）等对AMI早期诊断的灵敏度和特异性均不太理想〔1～3〕。

白介素-1受体拮抗蛋白的应用对早期创伤性关节炎软骨细胞代谢的影响

目的探讨应用白介素-1受体拮抗蛋白(IL1RA)对早期创伤性关节炎软骨细胞代谢的影响,主要观察应用后相关细胞炎性因子及蛋白酶基因的表达变化。方法 44只健康成年新西兰大白兔,随机分为对照(假手术)组(CON组,n=4)、安慰剂组(PBS组,n=20)、IL1RA治疗组(IL1RA组,n=20)。其中PBS组及IL1RA组均接受关节内重物击打,造成创伤性关节炎模型。造模后1 h,CON组不接受任何治疗,PBS组及IL1RA组实验兔膝关节则分别给予0.5 m L无菌PBS和0.5 m L IL1RA-PBS关节腔注射。术后3 h及8 h采集关节液,检测IL-1β含量。术后8 h处死动物取软骨组织进行软骨细胞培养后,测定细胞活力及凋亡率,RT-PCR检测软骨组织中ADAMTs-4、ADAMTs-5、MMP-3、IL-1β及TNF-α的m RNA表达。结果术后3 h及8 h,PBS组关节液中IL-1β的含量均明显高于CON组(P<0.01)。然而,经IL1RA介入治疗后,IL-1β在术后各测试点的含量均明显低于PBS组(P<0.05)。与CON组相比,术后8h培养的PBS组软骨细胞活力明显降低(P<0.05),而IL1RA组软骨细胞活力与CON组相比无显著性差异,但明显高于PBS组。另一方面,与CON组及IL1RA组相比,PBS组的细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。而IL1RA组与CON组相比,细胞凋亡率无明显差别(P>0.05)。RT-RCR结果显示,与CON组比较,PBS组所有目的基因m RNA的表达均明显增加(P<0.01)。然而,IL1RA组所有目的基因的表达与CON组相比无统计学差异,但明显低于PBS组(P<0.01)。结论实验结果表明创伤后关节炎早期应用IL1RA介入治疗可有效降低关节液细胞炎性因子的浓度,抑制细胞炎性因子对软骨细胞生长增殖的负性影响,降低细胞凋亡,且对于促进软骨细胞基质降解的细胞炎性因子及蛋白酶的表达显著下调,对PTOA病程发展具有抑制作用。

重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒在软骨细胞的表达

背景:白细胞介素1受体拮抗蛋白能延缓骨性关节炎进程,通过转基因方法可以使白细胞介素1受体拮抗蛋白表达的增加。目的:观察重组人重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白荧光质粒的构建及经脂质体转染软骨细胞的表达情况。方法:双酶切法切取重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的c-DNA片段,通过T4DNA连接酶连接到pEGFP-C1载体上。体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白质粒经脂质体转染软骨细胞,通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果与结论:获得重组人pEGFP-C1-IL-1Ra真核表达载体质粒,酶切及测序结果证明表达质粒的DNA序列完全正确。荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达,荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞基因得到表达。

人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达

目的构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞,研究其相关特性。方法利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定。实验分为3组:未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达。结果酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3×104CFU/mL。原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒。RT-PCR结果显示在C组出现311bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达。ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达。结论构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据。

白细胞介素-1受体拮抗蛋白在诊断早期急性心肌梗死中的临床价值

目的检测期早期急性心肌梗死(AMI)血清白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)表达情况,探讨其对于诊断AMI的临床价值。方法 84例AMI患者作为观察组,另外选取85例心绞痛患者作为对照1组,选取82例健康人作为对照2组,应用双抗体夹心酶联免疫法检测各组血清IL-1Ra表达水平,应用统计学软件对检测结果进行分析。结果观察组血清IL-1Ra表达水平显著高于对照1、2组,各组间IL-1Ra表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归模型分析显示临床诊断AMI的IL-1Ra最佳界值是210 pg/ml,以其为检测指标时,敏感性达85.71%,特异性达92.68%。结论 AMI患者早期血清中IL-1Ra表达异常升高,其可作为临床早期诊断AMI的重要标志物之一。

特异性白介素1受体拮抗蛋白放射免疫分析的建立及初步应用

用人工重组的白介素 1受体拮抗蛋白 (I 1ra)免疫新西兰兔 ,获取高效价特异的IL 1ra抗体。用氯氨T氧化法制备12 5I标记IL 1ra ,经SephadexG 2 5纯化 ,竞争性抗原抗体反应采用非平衡法 ,标准品和待测样品同抗体反应 37℃ 6小时后加入12 5I 标记抗原继续反应 4℃ 2 4小时。经PR试剂分离结合和分离的标记抗原。该法标准曲线范围 3～ 96ng ml,最低检出量为 ( 9 0± 1 4ng ml,n =89) ,类风湿因子阳性的病人血清含量为 ( 39 0 6± 15 2 3ng ml,n =14)。肠缺血再灌损伤后 6小时大鼠血清中IL 1ra较伤前自身对照明显增加 (P <0 0 0 1,n =82 )。肺灌洗液中损伤前后没有明显差异。该法特异、灵敏、简便 ,可用于人血清和大鼠血清及肺灌注液中IL

白介素1β及其受体拮抗蛋白在肠缺血/再灌注诱导肺损伤中的作用和机理

目的:探讨肠缺血-再灌注(I/R)损伤时肺损伤的机理及白介素1β(IL-β)及其受体拮抗蛋白的作用。方法:采用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成I/R损伤模型。利用放射免疫分析测定损伤前后和各处理组血液、肺组织灌注液中IL-1β和IL-1ra水平。同时采用RT-PCR法测定肺组织中IL-1β和IL-1ra的mRNA的表达含量。经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果:I/R损伤后6小时血液中IL-1β和IL-1ra有所增加,即表现为损伤组IL-1β比对照组明显增加,而IL-1ra不明显;但IL-1ra的损伤组和对照组二者均在损伤后6小时比伤前自身对照组明显增加。肺组织灌洗液中损伤组IL-1β明显增多,而IL-1ra不明显。肺组织中IL-1β的mRNA在损伤后表达明显增加,而IL-1ra表达没有明显变化。经非特异性磷脂酶A_2(PLA_2)阻断剂(氯喹和三氟拉嗪),血小板活化因子受体阻断剂SR27417A,环氧化酶抑制剂消炎痛以及抗氧化剂愈创木酸等处理后,血清、肺灌注液和肺组织中上述指标有不同程度的改变。肺内白细胞的聚集和浸润明显减少。结论:IL-1β和IL-1ra可能参与肠I/R介导急性肺损伤,并且同局部PLA_2活化有一定关系。

四羟基壬烯对前列腺癌雄激素拮抗作用的机制研究

目的:探讨四羟基壬烯(4-HNE)通过雄激素受体(AR)-促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在前列腺癌雄激素拮抗作用中的机制。方法:将前列腺癌LNCaP细胞分为野生型组(对照组)和转染组,转染组又分为空载体转染组(NC-L7组)及GSTA4基因转染组(A0718,GSTA4-OE组)。GSTA4-OE组给予LNCaP细胞培养、GSTA4质粒转染构建LNCaP的4-HNE稳转细胞系,对照组给予LNCaP细胞培养、未做GSTA4质粒转染。通过不同浓度4-HNE(0、40、80、120μmol/L)刺激前列腺癌细胞,活化AR信号通路,采用Western印迹检测AR、MAKP、AKT、PKCα蛋白的表达。选择60例患者前列腺癌组织及60例患者良性前列腺增生组织,采用免疫组化染色技术测定以上组织中4-HNE的阳性表达率,分析4-HNE阳性表达与肿瘤Gleason分级以及前列腺癌进展为CRCP的相关性。结果:GSTA4-OE组细胞内4-HNE的水平受到抑制。Western印迹检测结果显示:与对照组相比,GSTA4-OE组细胞PKCα蛋白表达水平显著降低(P<0.05),AR、AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。40、80、120μmol/L 4-HNE处理前列腺癌细胞后,与对照组相比,处理组AKT的表达量显著降低(P<0.01),MAKP(P<0.01)、PKC(P<0.01)、AR(P<0.01)的表达量显著升高。免疫组化结果显示,60例良性前列腺增生组织中4-HNE阳性率为5.0%,60例前列腺癌组织中4-HNE阳性率为63.3%,差异有统计学意义(P<0.01)。在Gleason分级1~5级中4-HNE阳性率分别为41.2%、50.0%、63.6%、81.8%、100.0%,随着Gleason分级越高,4-HNE阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。随访10~35个月,其中33例患者进展为CRCP,27例患者未进展为CRCP,4-HNE在2组中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在4-HNE作用下AR-MAPK通路相关蛋白表达上升,4-HNE可能通过AR-MAPK通路对前列腺癌进展起到促进作用,有望成为CRPC新的治疗靶点。

应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定

目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法：在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子,利用噬菌体展示7肽文库进行3~4轮淘选,用ELISA法鉴定所选肽与靶分子的结合,并测定其与浓度的关系。结果：与CCR5第一、二胞外环特异性结合的噬菌体展示的短肽序列分别为GHWKVWL和HYIDFRW,ELISA鉴定呈阳性反应,且短肽与靶分子的结合具有浓度依赖性和可饱和性。结论：利用噬菌体展示技术成功获得了2条CCR5特异性结合的短肽,并在体外证明其可与CCR5第一、二胞外环具有结合能力。

CCR5第二胞外环的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响

目的:研究与CC趋化因子受体5(CC chemokine receptor 5,CCR5)第二胞外环特异性结合的拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润和TNF-α表达的影响。方法:筛选最适宜的卵白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏浓度,构建OVA诱导的BALB/c小鼠哮喘模型。模型构建成功后通过尾静脉注射不同浓度拮抗短肽干预模型小鼠,HE染色对肺组织进行病理细胞学分析及炎症分级,real-time PCR与Western blot实验分别检测小鼠肺组织TNF-α的mRNA和蛋白表达水平。结果:筛选出的OVA最佳致敏浓度为500 mg/L(0.1 mL)。尾静脉注射0.2m L不同浓度(1.5 g/L、2.5 g/L和3.5 g/L)拮抗短肽干预哮喘小鼠,能减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达,以2.5 g/L浓度效果最佳,较模型组炎症程度减轻2级,炎症细胞数明显减少,TNF-α的mRNA表达量较模型组下降近90%,蛋白表达水平下降约70%。同时该短肽(2.5 g/L)也起到了一定的预防作用,炎症程度改善1级,TNF-α的mRNA及蛋白水平较模型组下降约50%左右。结论:CCR5第二胞外环的拮抗短肽能有效减轻哮喘小鼠肺组织炎症程度,抑制TNF-α的表达。

CCR5第一、二胞外环特异性结合的拮抗短肽对TNBS诱导SD大鼠结肠炎的治疗作用

目的:研究C-C趋化因子受体5(CCR5)膜外第一、二胞外环(ECL1和ECL2)特异性结合的拮抗短肽对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎模型大鼠的治疗作用与机制。方法:采用100 mg/kg TNBS诱导结肠炎SD大鼠模型;用不同剂量的2条拮抗短肽(ECL1:25、35和45 mg/kg;ECL2:15、25和35 mg/kg)分别作用于模型大鼠,观察其对大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠大体损伤指数(CMDI)和组织病理学改变的影响,采用real-time PCR和Western blot法分别检测结肠组织TNF-α和COX-2的mRNA与蛋白表达水平。结果:与模型组相比,有效剂量的ECL2拮抗短肽HY治疗组大鼠疾病活动程度、肠道溃疡及病理组织学损伤均有明显减轻,各评分指数差异具有统计学意义(P<0.05);TNF-α和COX-2的蛋白和mRNA表达水平均明显下降(P<0.05)。ECL1拮抗短肽GH作用的大鼠结肠炎症状评分及TNF-α和COX-2炎症因子表达无明显改变。结论:ECL2拮抗短肽可能通过下调结肠黏膜TNF-α和COX-2的表达来缓解TNBS诱导的SD大鼠结肠炎,而ECL1拮抗短肽的作用不明显。

CCR5第2胞外环特异性拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织自噬相关基因的表达和自噬泡形成的影响

目的研究CC趋化因子受体5(CCR5)第2胞外环特异性拮抗短肽对哮喘小鼠肺组织自噬相关基因Beclin1、ATG5、LC3的表达和自噬泡形成的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为5组,每组各8只,空白对照组小鼠予生理盐水腹腔注射致敏、生理盐水滴鼻激发,致敏组小鼠予鸡卵白蛋白(OVA)致敏、生理盐水激发,哮喘模型组小鼠予OVA致敏、OVA激发,地塞米松磷酸钠(Dex)组小鼠予OVA致敏、激发后予Dex尾静脉注射,拮抗短肽组予OVA致敏、激发后予拮抗短肽尾静脉注射。分别采用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法和透射电镜评估哮喘小鼠肺组织中自噬水平的变化。结果哮喘模型组的Beclin1、ATG5和LC3mRNA表达水平及LC3蛋白表达水平均低于空白对照组(P均<0.05),拮抗短肽组的Beclin1、ATG5、LC3mRNA和蛋白表达水平均高于哮喘模型组(P均<0.05)。透射电镜显示,哮喘模型组小鼠肺组织中自噬泡数量较空白对照组稍减少,自噬泡主要位于具有免疫功能的2型肺泡上皮细胞。拮抗短肽组、Dex组中自噬泡数量较模型组增多,但多为未成熟的自噬泡,且自噬泡同样主要位于2型肺泡上皮细胞中。结论哮喘小鼠存在自噬功能障碍,CCR5第2胞外环的特异性拮抗短肽能升高哮喘小鼠肺组织中自噬相关蛋白Beclin1、ATG5和LC3的表达水平。

CCL27及其受体在抗病毒免疫中的作用

趋化因子是一类结构相关、对白细胞具有趋化活性、相对分子质量为(8～10)×103的小分子蛋白质,在炎症和免疫反应中可诱导白细胞和淋巴细胞迁移.CCL27是一种CC型趋化因子,其配体为CCR10.CCL27与接触性软疣病毒编码产生的蛋白质MC148有较高的同源性,但却与人疱疹病毒8型编码产生病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ竞争结合受体CCR10.

白细胞介素-1受体拮抗蛋白间接体内转基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用

目的通过白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-IRa)间接体内转基因治疗试验性兔骨关节炎,探讨IL-IRa对兔膝关节软骨细胞凋亡的抑制作用.方法①30只新西兰大白兔随机分成3组,左膝关节部分滑膜切除,分离并培养滑膜成纤维细胞.②用携带标记基因或IL-IRa基因的逆转录病毒分别转染从第2组或第3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞.③兔右膝关节前交叉韧带横断术(ACLT)建立骨关节炎模型.④把自体滑膜细胞回输第1组兔右膝关节腔内,再把转染标记基因或IL-IRa基因的自体滑膜细胞回输第2组或第3组兔右膝关节腔内.⑤2、4周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-IRa水平.⑥TUNEL末端荧光标记法测关节软骨细胞凋亡发生率.结果第3组兔膝关节液中IL-IRa水平,在基因转入关节腔后第2周时为(20.6±1.8)ng/ml,第4周时为(4.82±0.52)ng/ml;而2、4周时,第1、2组中IL-IRa水平均极低.第3组软骨细胞凋亡被抑制,仅有18%发生细胞凋亡,而在第2组关节软骨细胞近40%发生细胞凋亡,正常对照组中只有2%～5%的软骨细胞发生凋亡.结论本试验证明关节腔内注入体外转染IL-1Ra基因的自体滑膜细胞,即IL-1Ra间接体内转基因治疗,能使关节腔局部IL-1Ra水平明显升高,使关节软骨细胞凋亡受到抑制.

白细胞介素1受体拮抗因子通过抑制肝细胞生长因子的分泌影响结肠癌的新生血管形成

目的 探讨白细胞介素-1受体拮抗剂（interleukin-1 receptor antagonist,IL-1 ra）和肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）在结肠癌转移过程中的作用机制,并探讨癌细胞-基质细胞在微环境中的相互作用关系.方法 用RT-PCR及Western blot检测IL-1α、HGF和其受体c-Met在结肠癌细胞株和基质细胞中的表达,ELISA实验检测IL-1α、HGF及IL-1 ra之间的生物学关系.构建癌细胞-基质细胞共同培养系统,用细胞增殖、侵袭及新生血管实验检测HGF对结肠癌转移能力的影响,同时检测IL-1ra的作用.结果 IL-1α表达水平与结肠癌细胞株的肝转移能力密切相关.IL-1α能够提高成纤维细胞HGF的分泌水平（P＜0.01）,而IL-1ra能抑制IL-1α的提高作用（P＜0.01）.HGF通过促进血管内皮细胞的增生、迁移而增强肿瘤的新生血管形成（P＜0.01）,IL-1 ra能够抑制肿瘤的新生血管形成（P＜0.01）.结论 自分泌的IL-1α和旁分泌的HGF相互作用共同调控结肠癌的转移;而IL-1 ra通过阻断IL-1α和HGF信号途径抑制结肠癌的转移.

转染白细胞介素1受体拮抗剂与转化生长因子β1软骨细胞和致炎软骨块共培养后炎性因子的变化

目的 观察重组人白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1Ra）和转化生长因子β1（TGF-β1）双基因在体外对兔骨关节炎（OA）的治疗效果.方法 取新西兰大白兔关节软骨经酶消化分离原代培养软骨细胞,并采用特异性细胞外基质Ⅱ型胶原免疫细胞染色进行鉴定.软骨细胞分为转染IL-1Ra组（A组）、转染TGF-β1组（B组）、转染IL-1Ra＋TGF-β1双基因组（C组）、未转染组（D组）、空白组（E组）.A、B、C 3组均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂质体为转染媒介.各组加入软骨块与软骨细胞共培养,除E组外,其余各组均加入20 ng IL-1β,转染共培养后分别在12、24 h、2、4、6 d通过荧光显微镜观察软骨细胞转基因的表达.于共培养第2,4、6天后应用放射免疫分析（RIA）分别检测各组IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量.结果 成功分离培养软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞染色显示细胞胞质染成棕黄色.胞核基本不着色.荧光显微镜下A、B、C组均有绿色荧光蛋白的表达,转染后24 h,3组细胞的转染率最高分别为（16.16＋2.71）%、（16.54±2.91）%、（17.20±2.39）%,第2天后随时间的延长转染率逐渐降低.同时间点IL-1β水平D组＞B组＞A组＞C组＞E组;而第2、6天TNF-α水平D组＞A组＞B组＞C组＞E组,第4天E组＞A组＞B组＞C组＞D组,其中A组虽然略高于B组,但差异没有统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义.A、B、C组的IL-1β和TNF-α在第6天的水平明显低于第2、4天,D、E组IL-1β水平不随时间的延长而改变,TNF-α水平D组在第4天时最低,E组则最高.结论 转染IL-1Ra和TGF-β1基因均有降低炎性因子水平的作用.联合应用转染IL-1Ra和TGF-β1基因可能控制炎性反应,为体外OA的基因治疗提供实验基础.