复方甘草酸苷对趋化因子受体CCR3、CCR5在过敏性紫癜患儿中的表达

目的测定治疗前后趋化因子受体CCR3、CCR5的变化,探讨复方甘草酸苷治疗过敏性紫癜(HSP)的疗效。方法HSP患儿分为对照组和治疗组2组,比较治疗组和对照组的疗效,并使用流式细胞仪测定治疗前后趋化因子受体CCR3、CCR5水平。结果治疗前后比较,治疗后CCR3降低,CCR5升高,治疗组差异大于对照组。治疗组与对照组比较,治疗时间,前者短于后者;治疗疗效,前者优于后者。结论复方甘草酸苷可以调节Th1/Th2失衡,从而治疗HSP,且疗效确切。

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系。方法用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠(CBA/J×DBA/2,n=14)、正常妊娠模型组小鼠(CBA/J×BALB/c,n=13)和正常非孕组小鼠(CBA/J,n=11)外周血、脾脏以及胸腺中CD4+T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达。结果自然流产模型组外周血CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05,P<0.01);但三个指标与正常非孕组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。自然流产模型组脾脏CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),高于正常非孕组(P<0.05);而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。自然流产模型组胸腺CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.05),高于正常非孕组(P<0.01);而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05);CCR5与其他两组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4+T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用。

糖皮质激素治疗对ITP患者外周血趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3表达的影响

原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)是临床最常见的自身免疫性出血性疾病[1-2]。研究证明,慢性ITP是一种以Th1细胞异常聚集为特征的Th1优势性自身免疫性疾病[3-4]。Th1和Th2细胞分别表达不同的趋化因子受体,并与不同的趋化因子结合,其中Th1细胞优势性表达CXCR3、CCR5,Th2细胞优势性表达CCR3,从而调控Th1和Th2细胞活化与极化[5]。在CD4+T淋巴细胞表面,以上趋化因子受体可作为区分Th1和Th2细胞的标志物[6]。尽管目前ITP发病机制的研究较多,但多数是基于混合淋巴细胞培养的研究,本文旨在研究CCR3、CCR5、CXCR3在ITP患者CD4+T淋巴细胞表面的表达情况及其临床意义。

姜黄素调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制研究

目的:探讨姜黄素通过调控转录因子FOXP3影响HIV-1感染辅助受体CCR5的作用机制。方法:利用生物信息学方法预测并分析转录因子FOXP3与CCR5启动子的结合位点;采用AutoDock 4.2软件对姜黄素与FOXP3进行柔性对接;MTT法检测姜黄素对Jurkat细胞活性的影响;qRT-PCR和Western blot检测不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;构建pcDNA3.1-FOXP3真核表达载体;结合转录因子预测结果,运用Overlap PCR法扩增突变型CCR5基因片段,构建突变型CCR5启动子报告载体pFireRluc-Mt-CCR5;利用双荧光素酶报告基因技术验证转录因子FOXP3与CCR5的启动子结合位点。结果:JASPAR转录因子预测结果显示,CCR5启动子区与转录因子FOXP3存在结合位点;分子对接结果显示,姜黄素能够与FOXP3的酶活区域结合;MTT结果显示,姜黄素作用24 h后对Jurkat细胞活性产生抑制作用,IC50为34.48μmol/L;qRT-PCR和Western bot结果显示,不同浓度姜黄素作用于Jurkat细胞后,CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均降低,且存在剂量依赖性;双荧光素酶报告基因技术证实FOXP3能够与CCR5启动子结合,且转录因子FOXP3可调控CCR5启动子活性;过表达FOXP3后,姜黄素对CCR5的作用结果显示:当姜黄素浓度为60μmol/L时,作用于共转染pcDNA3.1-FOXP3和pFireRluc-Wt-CCR5的HEK293T细胞CCR5启动子荧光素酶活性相对值明显高于pFireRluc-Wt-CCR5+curcumin-60组(P<0.01)。结论:FOXP3能够调控CCR5启动子活性,其作用机制可能是姜黄素通过作用于FOXP3与CCR5启动子结合位点影响CCR5启动子活性。

趋化因子CCL11-糖胺聚糖-趋化因子受体CCR3的相互作用研究

目的 探究趋化因子CCL11与受体CCR3、糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)相互作用过程及机制,为深入阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供理论参考。方法 利用基因工程技术,构建筛选了CCR3-EGFP单分子表达水平的CHO稳转细胞系,利用全内反射荧光成像(total internal reflection fluorescence,TIRF)与等温滴定量热(isothermal titration calorimetry,ITC)技术研究了不同体外溶液条件下GAGs与CCL11的相互作用,并利用趋化实验及活细胞单分子成像实验考察了GAGs-CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞趋化行为的调控及CCR3-EGFP在细胞膜上聚集状态的影响。结果 随着硫酸软骨素链长度的增加,其与CCL11结合放热增多,表明其相互作用力增强,其促进CCL11聚集作用增强。单分子荧光成像技术结合趋化试验研究发现,不同种类及不同比例的GAGs均会影响CCL11与CCR3的相互作用,GAGs的加入,抑制了CCL11对CCR3-EGFP稳转细胞的趋化效应及促CCR3-EGFP聚集的能力,且随着硫酸软骨素分子质量的增加,抑制作用显著增强。结论 GAGs的存在可以显著调控CCL11的聚集状态,进而影响其与受体CCR3的相互作用,本研究为进一步阐明CCL11-GAGs-CCR3相互作用关系提供了一定的实验基础。

趋化因子受体CCR5亲合短肽的筛选

趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12肽库筛选与CCR5特异结合的多肽;经过四轮筛选后,挑选20个阳性噬菌体克隆进行测序,从中得到11个含有AFDWTFVPSLIL序列的小分子肽.含该序列的噬菌体能与抗人CCR5单抗(2D7)竞争性结合CCR5,且合成肽AFDWTFVPSLIL对趋化因子RANTES与CHO/CCR5的结合具有明显的抑制作用,初步证明该小肽与CCR5具有特异性结合作用.

趋化因子受体CCR5的研究进展

CCR5为趋化因子CC受体家族成员,属7次跨膜G蛋白耦联受体,配体为CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP-1β)、CCL5(RANTES)。CCR5主要表达于单核/巨噬细胞和淋巴细胞,与其配体介导CCR5+免疫细胞的趋化、募集过程。因此,多种免疫性疾病的发生和发展过程均有CCR5参与。CCR5是人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)入侵时的重要辅助受体,而在肿瘤细胞和各类肿瘤相关间质细胞的表面也可见其表达,并介导肿瘤增殖、浸润等多种生物学过程。随着相关研究技术的发展,进一步加深了对CCR5的结构、功能、信号通路及其在相关疾病中的作用的认识。

IV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达

目的 :研究HIV 1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF 1在人胎盘组织的表达 ,探索HIV 1子宫内垂直传播的分子机制。方法 :半定量RT PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5mRNA水平 ;免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达 ;原位杂交及免疫组化分析SDF 1在早孕胎盘的表达 ;ELISA测定滋养细胞SDF 1的动态分泌水平。结果 :各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5mRNA ;CXCR4蛋白定位于滋养细胞 ,而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF 1,且能分泌可溶性SDF 1。结论 :滋养细胞同时表达CXCR4及SDF 1,SDF 1可能通过降调CXCR4而拮抗X4 HIV 1感染胎儿细胞 ;R5 HIV 1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5 + 基质细胞和 或Hofbauer细胞 ,从而发生子宫内垂直传播。

趋化因子RANTES及其受体CCR5与炎性疾病

趋化因子（Chemokines）是一类对不同靶细胞具有趋化效应的蛋白质家族,分子量多为8-12 k D,由机体多种细胞（尤其是活化免疫细胞）分泌,主要依赖与特异性受体的结合而发挥生物学作用,在细胞生长、分化、黏附及定向迁移等方面起重要作用。

趋化因子受体CcR5在结肠癌中的表达及临床意义

目的探究趋化因子受体CcR5在结肠癌中的表达及临床意义。方法收集经结肠癌根治术切除且经病理学检查证实为结肠癌组织标本94例,选取50例距离肿瘤边缘>5 cm,且经病理学检查为正常的癌旁组织作为对照,采用实时定量PCR和免疫组化的方法,分别检测结肠癌组织和正常癌旁组织中CcR5的mRNA表达水平及阳性表达率,分析其与结肠癌临床病理学特征的关系。结果结肠癌组织中CcR5 mRNA水平和阳性表达率明显高于正常癌旁组织的,差异具有统计学意义(P<0.05)。CcR5 mRNA表达水平和阳性表达率与肿瘤大小、淋巴结转移、肝转移、TNM分期均有关,肿瘤大小>5 cm、出现淋巴结转移和肝转移、Ⅲ~Ⅳ期结肠癌患者CcR5的mRNA表达水平和阳性表达率均相应高于肿瘤大小≤5 cm、未发生转移、Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。LMVD与肿瘤大小、淋巴结转移、肝转移、TNM分期和分化程度有关。相关性分析结果显示,CcR5的mRNA表达水平与LMVD呈明显正相关(γ=0.9176,P=0.0099)。结论趋化因子受体CcR5的高表达与结肠癌发生、转移均有关,检测CcR5对于结肠癌的诊断和预测转移情况具有指导意义。

1型糖尿病患者及其一级亲属趋化因子受体CCR2和CCR5的基因多态性研究

目的 探讨趋化因子受体CCR2、CCR5基因多态性与 1型糖尿病 (T1DM)及其一级亲属之间的关系 ,并与T2DM及非DM对照进行比较。 方法 利用PCR方法检测 48例T1DM及其 5 7名一级亲属CCR5的基因多态性 ,利用BsaBI限制性内切酶的PCR RFLP方法检测T1DM及其一级亲属的CCR2基因多态性。 结果 T1DM组、T1DM一级亲属组、T2DM组分别与非DM对照组比较 ,CCR5Δ32突变的等位基因频率和基因型频率差异无显著意义。T1DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均高于非DM对照组 (P <0 .0 1) ;T2DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均低于T1DM组 (P <0 .0 1)。 结论 CCR5Δ32突变与T1DM无显著相关性。CCR2 6 4I突变与T1DM发病显著相关 ,CCR2基因可能是T1DM一个新的候选基因。

趋化因子MIP-3α及其受体CCR6在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

目的:研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-3α(MIP-3α)及其受体CCR6在溃疡性结肠炎(UC)中的表达情况以及与UC病变程度和范围的关系,探讨其在UC发病机制中的作用。方法:用免疫组织化学法检测35例活动期UC及20例正常对照石蜡包埋组织中MIP-3α及CCR6的表达情况。结果:UC组MIP-3α及CCR6均为阳性表达,对照组为阴性或弱阳性表达。MIP-3α及CCR6在UC组的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。UC病变范围越广、程度越重,MIP-3α及CCR6表达阳性率越高;且MIP-3α和CCR6表达有明显相关性(r=0.765,P<0.01)。结论:MIP-3α与CCR6均参与了UC的发生和发展,两者的相互作用可能在UC局部结肠组织破坏和病理变化中起着重要作用。

复方黄芩甙制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠淋巴细胞表型和趋化因子受体CCR5表达的影响

目的:探讨复方黄芩甙制剂(Co-baicalin)治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的有效性及其作用机制。方法:应用髓鞘脂质蛋白(PLP)139-151免疫SJL/J小鼠诱发慢性复发缓解性EAE模型,研究复方黄芩甙制剂对PLP139-151诱导的小鼠淋巴结细胞及脾细胞CD3、CD4、CD8及趋化因子受体CCR5的表达的影响,并通过神经功能评分观察复方黄芩甙制剂治疗EAE的有效性。结果:复方黄芩甙制剂治疗后,小鼠淋巴结细胞和脾细胞CD3、CD8阳性细胞百分比升高;而CD4、CCR5和CD4/CD8百分比下降,和对照组比较具有统计学意义(P<0.001)。复方黄芩甙制剂治疗组和强的松治疗组之间未见显著性差异(P>0.05)。此外复方黄芩甙制剂能够有效改善EAE小鼠神经功能评分(P<0.01)。结论:复方黄芩甙制剂可有效降低炎性细胞CD4阳性细胞数和CD4/CD8比例,下调CCR5的表达,为复方黄芩甙制剂用于临床多发性硬化的治疗提供了实验依据。

趋化因子受体CXCR4及CCR5真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的:构建人CXCR4及CCR5真核表达重组质粒,转染人卵巢癌细胞SKOV3,建立稳定转染细胞系并观察其表达效果。方法:从人外周血单个核细胞中提取RNA,采用反转录PCR技术扩增CXCR4及CCR5的基因编码序列,将序列克隆至真核表达载体pEGFP,经酶切和测序鉴定后,应用脂质体转染技术将质粒cancer.pEGFP-CXCR4和pEGFP-CCR5分别导入不表达CXCR4及CCR5蛋白的SKOV3细胞,经G418抗性筛选得到阳性细胞克隆并扩大培养成系。分别采用免疫荧光染色和流式细胞术方法(FCM)检测稳定转染细胞株CXCR4和CCR5的表达。结果:构建了真核表达载体pEG-FP-CXCR4和pEGFP-CCR5;得到了抗G418阳性细胞克隆;免疫荧光染色和FCM检测结果显示,转染质粒的SKOV3细胞表达CXCR4和CCR5。结论:成功建立稳定表达趋化因子受体CXCR4和CCR5的卵巢癌细胞株,为CXCR4和CCR5在卵巢癌中的研究工作提供依据及平台。

趋化因子RANTES及其受体CCR5在大鼠心肌梗死后的时程变化

目的:探讨大鼠心肌梗死模型后不同时间受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)及其受体CCR5的时程变化.方法:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支造成左室大面积心肌梗死,分别于术后1,2,4,8 wk测心功能,判断造模是否成功后开胸取心脏.运用实时荧光定量PCR和Western Blot蛋白印迹技术观察心肌梗死后不同时间点RANTES及其受体CCR5在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果:心功能检测提示造模成功.和假手术组相比,心肌梗死组大鼠的RANTES,CCR5 mRNA水平变化:术后1 wk开始升高,4 wk时处于高峰(P<0.05),8 wk逐渐下调至正常水平;蛋白水平的变化与mR-NA的变化相似.结论:RANTES作为趋化因子,在心肌梗死早期对心肌的炎性反应进行调控.若能阻断RANTES对T细胞的趋化作用,可能减少心肌梗死后心肌炎性反应.

嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin及其受体CCR3与呼吸道变应性炎症

变应性鼻炎（allergic rhinotis-AR）是耳鼻咽喉-头颈外科的常见病之一,虽非重症疾病,却改变了患者的社会生活,严重影响了其生活质量,加重了经济负担,其发病率高,且流行性不断增长,同时也是影响另一种主要呼吸道变应性疾病支气管管哮喘（BA）的重要因素,已成为21世纪严重的全球性健康问题.AR发病机制的研究日益得到重视,随着对呼吸道变应性炎症认识的加深,明确了其主要的病理改变是慢性炎症反应,嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）及肥大细胞等炎性细胞浸润,特别是EOS的浸润程度与病情呈正相关.呼吸道内EOS聚集机制相当复杂,主要包括骨髓中EOS从祖细胞分化成熟,继而向外周循环释放迁移,通过滚动、粘附、渗出及与内皮细胞相互作用,选择性在气道局部组织中大量聚集并被激活,发挥生物学效应.在此过程中有许多细胞因子参与了对EOS的调控,其中趋化因子选择性趋化嗜酸性粒细胞是主要的环节,也是近几年的研究热点.本文对嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin及其受体CCR3（CC chemokine receptor 3）的基本概况及其在呼吸道变应性炎症研究中的意义综述如下.

小鼠β趋化因子受体CCR_5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用ＭａｒａｔｈｏｎＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ方法检测分析该基因，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，编码３５５个氨基酸，与人巨噬细胞炎性趋化蛋白５受体（ｈｕＭＩＰ－５Ｒ）同源性为８１％，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示该基因为单拷贝，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ结果显示小鼠巨噬细胞、脾脏等有表达。结论：克隆得到小鼠ＣＣＲ５基因，可作为研究ＨＩＶ－１感染机制及ＡＩＤＳ治疗有价值的实验模型。

趋化因子受体CCR5与艾滋病治疗

艾滋病（AIDS）是由人免疫缺陷病毒（human immunodeficency virus，HIV）感染而引起的传染性疾病，近20年来艾滋病在全球呈迅速蔓延趋势。到目前为止，还没有非常有效的治疗艾滋病的药物，因而寻找预防和治疗艾滋病药物的研究显得日益迫切。人趋化因子受体5（CCR5）作为HIV感染的辅助受体收到广泛的关注，本文对基于CCR5拮抗剂的艾滋病治疗作一综述。

强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞趋化因子受体CCR5的表达

免疫细胞的定向迁移是机体免疫应答发生和完成的必须条件，趋化因子是控制细胞定向迁移的细胞因子。趋化因子受体通常表达于免疫细胞、内皮细胞等细胞膜上。趋化因子受体拮抗剂的研究发现，单个趋化因子的阻断就能明显的抑制炎症反应，提示阻断趋化因子受体的策略可能较目前使用的免疫抑制剂更具选择性和安全性。本实验研究强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞表面趋化因子受体CCR5的表达。