电针颈夹脊穴对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸受体及趋化因子受体表达水平的影响

目的:观察电针颈夹脊穴对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸受体N-甲基-D-天冬门氨酸(NMDA)、氨基-3-羧基-5-甲基异唑-4-丙酸(AMPA)及单核细胞趋化蛋白-1受体(CCR2)、趋化因子C-X3-C-基元受体1(CX3CR1)表达的影响。方法:将72只大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、电针组、L-α-氨基乙二酸(LAA)组、LAA+电针组,各12只。除空白组外,其余组大鼠均结扎右侧C_(7)脊神经建立神经病理性疼痛模型(假手术组仅暴露神经,不结扎)并结合鞘内置管处置。空白组正常饲养不予干预;假手术组与模型组同时间点按照电针组进行绑缚处理,每次20 min,连续14 d;电针组于术后第7天开始干预,电针双侧C_(7)夹脊穴,每次20 min,1次/d,连续治疗14 d;LAA组于术后第7天开始干预,鞘内注射LAA,5 nmol/次,1次/d,持续14 d;LAA+电针组于术后第7天开始干预,同时间点按照电针组与LAA组进行电针夹脊穴与5 nmol/次鞘内注射LAA。采用免疫荧光法检测各组大鼠C_(7)脊髓节段脊髓背角CXC3R1受体、CCR2受体的表达量;采用Real-Time PCR技术检测各组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA受体的表达。结果:与空白组相比,假手术组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组大鼠脊髓背角NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达量均升高(P<0.05);同模型组相比,电针组、LAA组与LAA+电针组大鼠NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且LAA+电针组相较于电针组、LAA组的NMDA、AMPA、CCR2、CX3CR1的表达量明显降低(P<0.05)。结论:电针颈夹脊穴可抑制神经病理性疼痛大鼠CCR2、CX3CR1活化,影响CC亚族趋化因子配体2(CCL2)、CX3CL1及其受体CCR2、CX3CR1的结合,并降低谷氨酸受体NMDA、AMPA活化,抑制了胶质细胞的活化及中枢敏化,进而减少促炎性细胞因子和生长因子释放,减少神经病理性疼痛发生。

肥胖型支气管哮喘患儿血清MMP12、CX3CR1水平与病情严重程度的相关性分析

目的探究血清基质金属蛋白酶12(MMP12)、趋化因子(C-X3-C基元)受体1(CX3CR1)与肥胖型(OB)支气管哮喘患儿病情严重程度的相关性。方法选取2020年9月至2023年5月在本院收治的200例支气管哮喘患儿作为研究对象,根据OB诊断标准将其分为OB组(100例)和非OB组(100例),比较两组血清MMP12、CX3CR1水平。比较不同肺功能分度、不同疾病严重程度患儿血清MMP12、CX3CR1水平。Pearson法分析血清MMP12、CX3CR1水平与肺功能分度、疾病严重程度的关系。结果OB组患儿血清MMP12、CX3CR1水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肺功能分度患儿血清MMP12、CX3CR1水平比较差异具有统计学意义(P<0.05),随着肺功能分度的加重,患儿血清MMP12、CX3CR1水平逐渐上升,差异有统计学意义(P<0.05)。不同疾病严重程度患儿血清MMP12、CX3CR1水平比较差异具有统计学意义(P<0.05),随着患儿疾病严重程度的增加,患儿血清MMP12、CX3CR1水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,血清MMP12水平与肺功能分度、疾病严重程度呈正相关(r=0.502、0.517,P<0.05);血清CX3CR1与肺功能分度、疾病严重程度呈正相关(r=0.496、0.511,P<0.05)。结论OB支气管哮喘患儿血清MMP12、CX3CR1水平显著升高,且与患儿病情严重程度和肺功能密切相关。

基于FKN/CX3CR1信号通路的壮骨止痛解郁方抗类风湿关节炎伴抑郁症作用机制研究

目的基于FKN/CX3CR1信号通路研究壮骨止痛解郁方抗类风湿关节炎伴抑郁症(RAD)的作用机制。方法诱导滑膜细胞炎症模型并建立脑微血管内皮细胞、小胶质细胞及海马神经元共培养体系,将细胞分为正常组、模型组、CX3CR1阻断剂组和壮骨止痛解郁方组,分别予相应处理。采用细胞成像分析系统观察滑膜细胞、脑微血管内皮细胞、小胶质细胞及海马神经元形态变化;ELISA检测滑膜细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、类风湿因子(RF)、趋化因子Fractalkine(FKN)含量;电阻仪测量跨内皮细胞电阻(TEER);免疫荧光染色检测脑微血管内皮细胞闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1),小胶质细胞趋化因子C-X3-C-基元受体1(CX3CR1)、腺苷A2A受体(A2AR),海马神经元谷氨酸受体2A(NR2A)、谷氨酸受体2B(NR2B)蛋白表达;尼氏染色观察海马神经元突触可塑性变化。结果与正常组比较,模型组滑膜细胞、脑微血管内皮细胞、小胶质细胞及海马神经元明显损伤;滑膜细胞上清液TNF-α、RF、FKN含量明显增加(P<0.01,P<0.05);脑微血管内皮细胞TEER明显减少(P<0.01),Occludin、ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01);小胶质细胞CX3CR1、A2AR蛋白表达明显升高(P<0.01);海马神经元NR2A、NR2B蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),尼氏小体、树突和树突棘分支数量减少,海马神经元网络明显断裂。与模型组比较,壮骨止痛解郁方组滑膜细胞、脑微血管内皮细胞、小胶质细胞及海马神经元损伤均有所减轻;滑膜细胞上清液TNF-α、RF、FKN含量明显减少(P<0.01,P<0.05);脑微血管内皮细胞TEER明显增加(P<0.01),Occludin、ZO-1蛋白表达明显升高(P<0.01);小胶质细胞CX3CR1、A2AR蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05);海马神经元NR2A、NR2B蛋白表达明显降低(P<0.01),海马神经元尼氏小体、树突和树突棘分支数量减少且神经网络断裂情况明显改善。结论壮骨止痛解郁方对体外模拟的RAD具有保护作用,其机制与保护脑微血管屏障、抑制小胶质细胞激活、减轻FKN/CX3CR1信号通路介导的突触可塑性损伤有关。

CX3CL1与糖尿病视网膜病变的相关性研究进展

糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病最严重的并发症之一,是严重致盲性眼病,至今未有彻底治愈的方法,糖尿病视网膜病变的防治是当今眼科界面临的一大难题。众所周之,炎症因子及血管的新生在DR发病机理中具有极为重要的作用,近年来与其相关的炎症因子分形素趋化因子(C-X3-C motif chemokine ligand1,CX3CL1)随之受到诸多国内外眼科学者的关注。本文通过研究CX3CL1在DR中的作用机制及研究进展,发现CX3CL1在促进炎症表达及加剧新生血管生成方面具有重要作用,现将研究结果做一综述,以飨读者。

“三法三穴”推拿手法对坐骨神经损伤大鼠痛觉功能和脊髓背角CX3CL1/CX3CR1表达的调节

目的通过观察脊髓背角趋化因子(C-X3-C基元)配体1(CX3CL1)/趋化因子(C-X3-C基元)受体1(CX3CR1)蛋白和mRNA表达变化,探讨"三法三穴"推拿手法对坐骨神经损伤大鼠痛觉功能改善的作用机制。方法74只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为正常组(n=12)、假手术组(n=24)、模型组(n=25)和三法三穴组(n=13)。模型组和三法三穴组制作坐骨神经损伤模型。假手术组仅暴露坐骨神经。三法三穴组造模后第7天起用按摩推拿手法模拟仪按摩殷门、承山、阳陵泉三穴。分别于造模后7 d、干预20 d进行光热耐痛阈测定;造模后7 d、干预10 d、干预20 d进行累积疼痛评分测定;并于造模后7 d和干预20 d取材,对脊髓背角CX3CL1/CX3CR1表达进行Western blotting和RT-PCR检测,干预20 d对脊髓背角小胶质细胞进行免疫荧光观察。结果造模后7 d,与正常组比较,模型组和假手术组光热耐痛阈升高(P<0.05);与假手术组比较,模型组和三法三穴组累积疼痛评分升高(P<0.05);干预10 d后,三法三穴组累积疼痛评分低于模型组(P<0.05);干预20 d后,三法三穴组光热耐痛阈和累积疼痛评分均低于模型组(P<0.05)。造模后7 d和干预20 d后,各组CX3CL1/CX3CR1蛋白和mRNA的表达变化均无显著性差异(P>0.05)。干预20 d后模型组小胶质细胞呈部分活化或完全活化状态,三法三穴组呈未活化或部分活化状态。结论"三法三穴"推拿手法对坐骨神经损伤大鼠痛觉功能有改善,可能是通过CX3CL1/CX3CR1以外的途径调节小胶质细胞实现的。

miR⁃143⁃3p通过调控CX3CL1/CX3CR1信号通路对脂多糖诱导肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR⁃143⁃3p通过调控趋化因子(C⁃X3⁃C基元)配体1/趋化因子(C⁃X3⁃C基元)受体1(CX3CL1/CX3CR1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导肺泡上皮细胞损伤的影响。方法收集急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者及健康体检者外周血血清,标记为ALI/ARDS组和Normal组。双荧光素酶实验证实miR⁃143⁃3p与CX3CL1的靶向关系。体外培养人肺泡上皮细胞A549,并将细胞分成Con⁃trol组、LPS组、LPS+NC mimic组(转染NC mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic组(转染miR⁃143⁃3p mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pcDNA组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pcDNA)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pc⁃CX3CL1组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pc⁃CX3CL1)。qRT⁃PCR检测miR⁃143⁃3p和CX3CL1、CX3CR1 mRNA表达水平;Western blot检测CX3CL1、CX3CR1蛋白表达;MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;ELISA分析肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、血管内皮生长因子(VEGF)和降钙素原(PCT)水平。结果与Normal组相比,ALI/ARDS组患者外周血中miR⁃143⁃3p表达(0.52±0.05)降低,CX3CL1、CX3CR1的mRNA(1.79±0.08)、(1.65±0.06)和蛋白(1.03±0.15)、(0.98±0.12)表达升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组A549细胞中miR⁃143⁃3p表达减小,细胞活力降低,凋亡率[(23.56±0.85)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量增加(P<0.05)。miR⁃143⁃3p过表达后,细胞活力升高,凋亡率[(13.74±0.69)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR⁃143⁃3p直接负调控CX3CL1表达。CX3CL1过表达可明显逆转miR⁃143⁃3p过表达对LPS诱导的A549细胞损伤的影响和对CX3CR1 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论miR⁃143⁃3p通过抑制CX3CL1/CX3CR1信号通路,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。

血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平在急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后近期预后预测中的价值

目的 探讨血清可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)、C-X3-C趋化因子配体1(CX3CL1)、N-末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)水平在急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后近期预后预测中的价值。方法 选取116例行PCI治疗的AMI患者作为研究对象,其中术后3个月内发生不良心血管事件的患者为预后不良组(34例),未发生不良心血管事件的患者为预后良好组(82例)。比较两组一般临床资料,以及术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平。应用二元logistic回归分析AMI患者PCI术后预后不良的影响因素,分析不同血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP差值水平AMI患者预后不良的相对危险度。结果 两组左室射血分数(LVEF)、支架数目、支架直径差异均有统计学意义(均P<0.05);预后不良组术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平均高于预后良好组,术后1d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平差值均低于预后良好组(均P<0.05);LVEF、支架数目、支架直径,以及术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平及其差值均是AMI患者PCI术后预后不良的危险因素(均P<0.05);血清ΔsTLT-1、ΔCX3CL1、ΔNT-proBNP高水平患者预后不良的危险度是低水平者的0.462、0.336、0.417倍。结论 血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平为AMI患者PCI术后预后不良的独立危险因素,其水平变化情况可帮助临床预测预后。

阿尔茨海默病小胶质细胞CX3CR1产物增加并受去甲肾上腺素的调节

去甲肾上腺素能神经元的丧失及其引起的脑去甲肾上腺素(NA)水平的降低与阿尔茨海默病(AD)的进展有关。这似乎主要是由于NA减少小胶质细胞活化的能力。我们以前观察到NA诱导神经元产生趋化因子Fractalkine/CX3CL1。小胶质细胞CX3CR1(CX3CL1的唯一受体)的激活会减少小胶质细胞的活化,已知这在很大程度上引起AD特征性的神经元损伤。因此,操控小胶质细胞中CX3CR1的产物可能转化为对CX3CL1抗炎作用的增强或抑制。为了确定小胶质细胞CX3CR1产物在AD中是否发生改变,以及NA是否可以控制这种改变,我们在5xFAD小鼠和人类AD脑样本中分析了CX3CR1的表达和合成。此外,我们分别在小胶质细胞培养物和小鼠中分析了NA及NA再摄取抑制剂瑞波西汀的作用。我们的结果表明,CX3CR1在AD大脑皮质中的产量增加,而给予瑞波西汀进一步增加了它的含量,并增强了小胶质对淀粉样β斑的反应性。然而,直接向原代大鼠小胶质细胞或人类HMC3细胞给予NA会抑制CX3CR1的产生,这表明小胶质细胞对NA的反应可能会在不存在产生CX3CL1的神经元或其他非小胶质外在因素的作用下发生改变。

右美托咪定通过调节CX3CL1-CX3CR1信号通路对老年大鼠肝部分切除术后认知功能障碍的改善作用研究

目的观察右美托咪定通过调节CX3CL1-CX3CR1信号通路对老年大鼠肝部分切除术术后认知功能障碍(POCD)的改善作用。方法 60只SPF级老年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、右美托咪定组和CX3CL1抗体+右美托咪定组。阳性对照组大鼠于术前3 d给予布洛芬混悬液35 mg/kg,ig给药,8 h/次,连续3 d;除假手术组外,各组大鼠均实施肝部分切除术,右美托咪定组和CX3CL1抗体+右美托咪定组术前30min均以40μg/kg右美托咪定ip给药,假手术组、模型组及阳性对照组予以ip等剂量生理盐水。肝脏切除后,CX3CL1抗体+右美托咪定组侧脑室立体定位注射CX3CL1中和抗体1pmol,单次给药。新异臂探索实验评价各组大鼠认知功能;Nissl染色观察各组大鼠海马组织神经元细胞损伤;ELISA法检测各组大鼠海马组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;qRT-PCR及Western blotting检测海马区CX3CL1、CX3CR1 mRNA及蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠新异臂移动距离与停留时间占比下降,神经元细胞存活数量减少,海马神经元细胞损伤,海马组织炎症因子水平升高,海马区CX3CL1、CX3CR1 mRNA及蛋白相对表达量降低(P<0.05),经右美托咪定干预后POCD大鼠新异臂移动距离与停留时间占比显著增加,神经元细胞存活数量提高,海马神经元细胞损伤减轻,海马组织炎症因子水平下降(P<0.05),海马区CX3CL1、CX3CR1 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论右美托咪定可改善老年大鼠肝部分切除术后POCD,其机制可能与激活CX3CL1-CX3CR1信号通路有关。