肥胖2型糖尿病患者趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C多态性的研究

目的探讨肥胖2型糖尿病(T2DM)患者趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C多态性分布及其与肥胖T2DM的关系。方法选取2009年2—10月在我院内分泌科住院的T2DM患者210例(T2DM组)及同期在我院体检的健康者171例(对照组),应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测两组受检者外周血趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C多态性,并测量受检者的身高、体质量,计算体质指数(BMI)。以BMI≥25 kg/m2为肥胖标准将T2DM组及对照组分为非肥胖T2DM组、肥胖T2DM组、非肥胖对照组、肥胖对照组,比较各亚组CXCL5基因启动子-156位点基因型分布及等位基因频率。结果 T2DM组及对照组受检者趋化因子CXCL5基因启动子-156G/C位点基因型分布及等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05);而4个亚组间-156G/C位点基因型分布及等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。-156G/C位点基因型分布及等位基因频率组间两两比较,如肥胖T2DM组与非肥胖T2DM组、非肥胖对照组比较,肥胖对照组与非肥胖对照组、非肥胖T2DM组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而肥胖T2DM组与肥胖对照组比较,非肥胖T2DM组与非肥胖对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论趋化因子CXCL5基因启动子-156位点G/C多态性与肥胖有关,可能不是糖尿病发病的危险因素。该基因启动子-156位点G-C变异有可能是引起肥胖的重要遗传因素。

炎性趋化因子CXCL5对视网膜节细胞存活的影响

目的:研究炎性趋化因子CXCL5在视网膜培养中对视网膜节细胞(RGC)存活的影响。方法:视网膜体外整体培养7d后,在显微镜下对免疫荧光标记存活RGC进行观察并计数。结果:与对照组((944±40)个/mm^2)比,300((1 221±61)个/mm^2)及1 000((1 405±79)个/mm^2)ng/mL CXCL5干预组可使RGC存活数量分别增加29.3%(P<0.05)及48.8%(P<0.001)。结论:CXCL5具有促进RGC存活的作用。

激活趋化因子CXCL5可诱发非肌层浸润性膀胱癌对灌注化疗耐药

目的:探讨非肌层浸润性膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)对灌注化疗药物耐药的分子机制。方法 :首先用丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)反复刺激膀胱癌RT4细胞株,诱导出膀胱癌耐药细胞株M-RT4;采用CCK-8法和划痕愈合实验分别验证M-RT4细胞的耐药性及迁移能力;同时采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测RT4细胞、M-RT4细胞及复发性NMIBC组织标本中CXC趋化因子配体5(CXC chemokine ligand 5,CXCL5)的表达水平。用重组人CXCL5(recombinant human CXCL5,rhCXCL5)处理RT4细胞后,观察细胞对MMC的敏感性变化。利用siRNA敲减耐药细胞M-RT4中CXCL5的表达后,采用CCK-8法检测细胞耐药性的改变,同时采用蛋白质印迹法检测膀胱癌细胞耐药过程中上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)通路相关分子如E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白7(cytokeratin-7,Cyt-7)、Claudin-1、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail,以及核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)通路相关分子如NF-κB1、Rel A、NF-κB2及Rel B的表达情况。结果 :与RT4细胞相比,诱导获得的M-RT4细胞对MMC的耐药性明显增强(P <0.01),同时还具有更强的增殖和迁移能力(P <0.05,P <0.01)。复发性NMIBC患者的肿瘤组织中CXCL5 mRNA高表达(P <0.000 1),耐药性膀胱癌M-RT4细胞中CXCL5 mRNA和蛋白表达均明显高于RT4细胞(P值均<0.01)。在RT4细胞中,加入rhC XCL5处理后细胞对MMC的敏感性降低(P <0.01);相反在M-RT4细胞中,敲减CXCL5表达后细胞对MMC的敏感性增强(P <0.01)。与RT4细胞相比,M-RT4细胞中E-cadherin、Cyt-7及Claudin-1表达水平明显下调(P值均<0.01),而N-cadherin、Vimentin、NF-κB1、RelA、NF-κB2及RelB蛋白表达水平明显上调(P值均<0.05)。rhCXCL5处理可上调RT4细胞中Snail、NF-κB1、Rel A和Rel B的表达(P值均<0.05);敲减M-RT4细胞中CXCL5表达可以抑制Snail激活(P <0.05),增强Cyt-7表达(P <0.01),同时降低NF-κB1、Rel A和Rel B的表达水平(P值均<0.05)。结论 :NMIBC组织和膀胱癌耐药细胞中CXCL5高表达。敲低CXCL5表达可通过逆转EMT来降低耐药细胞对MMC的耐药性,提示CXCL5是导致NMIBC对灌注化疗药物耐药的重要影响因子。

趋化因子CXCL5对宫颈癌HeLa细胞恶性表型的影响及机制

目的研究趋化因子CXCL5对宫颈癌HeLa细胞恶性表型的影响及其机制。方法通过基因转染构建过表达趋化因子CXCL5的宫颈癌HeLa细胞株,研究过表达CXCL5对宫颈癌HeLa细胞恶性行为和肿瘤相关基因表达的影响。结果 CCK-8、集落形成和划痕实验结果显示,过表达CXCL5可明显促进HeLa细胞的增殖和迁移能力;Western Blot实验结果表明,与空载体转染细胞株相比较,CXCL5过表达HeLa细胞株的ERK和p-ERK蛋白表达水平显著提高。结论趋化因子CXCL5通过ERK信号通路经自分泌途径促进宫颈癌细胞的增殖与迁移。

CXC趋化因子配体5对前列腺癌细胞生长的作用

目的研究CXC趋化因子配体(CXCL)5受体(CXCR2)蛋白在前列腺癌细胞株PC-3、DU145和LNCaP细胞中的表达情况及CXCL5对LNCaP细胞生长的影响。方法应用Western印迹技术检测CXCR2在3种前列腺癌细胞株PC-3、DU145和LNCaP细胞中的表达情况,筛选出表达量最高的细胞株,然后用MTT法检测5、10、20 ng/ml浓度CXCL5对CXCR2蛋白表达量最高的前列腺癌细胞生长的影响。结果在PC-3、DU145和LNCaP细胞中均有CXCR2蛋白的表达,LNCaP细胞中最高(1.65±0.089),DU145细胞次之(1.44±0.107),PC-3细胞中最低(0.36±0.056)(P<0.05);5、10、20 ng/ml CXCL5浓度组作用LNCaP细胞6 d后,吸光度值分别为0.55±0.06,0.61±0.08和0.73±0.10,与对照组(0.52±0.14)比较,20 ng/ml CXCL5浓度组增长率明显增高(P<0.05)。结论 CXCL5可通过作用于其自身受体CXCR2进而促进LNCaP细胞生长。

术前血清趋化因子配体5对直肠癌患者术后复发的影响

目的探讨术前血清趋化因子配体(CXCL)5对直肠癌患者术后复发的影响。方法外科手术治疗的直肠癌患者80例血清CXCL5水平检测采用酶联免疫吸附法(ELISA),阴性为CXCL5≤700 pg/ml,阳性为CXCL5>700 pg/ml。结果直肠癌80例患者中CXCL5阳性25例(31.25%),CXCL5水平与肿瘤大小、性别、年龄无关(P>0.05),与病理类型、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论血清CXCL5可作为直肠癌患者术后复发的独立预测指标及对病情严重程度的评估指标,具有较好的临床应用价值。

人工合成多肽cSN50.1对肝癌细胞HepG2恶性行为的影响及其机制

目的 探讨c SN50.1对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭和集落形成能力的影响及机制。方法 将HepG2细胞分为6组:c SN50.1 0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、70μmol/L、90μmol/L组,采用CCK-8实验研究不同浓度c SN50.1对HepG2细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50);将HepG2细胞分为4组:c SN50.1 0μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L,采用细胞划痕、Transwell和细胞克隆实验研究不同浓度cSN50.1对HepG2细胞迁移、侵袭和集落形成能力的影响;将HepG2细胞分为3组:Control组、SP600125组(AP-1信号通路抑制剂)和cSN50.1组,研究AP-1信号通路在cSN50.1对肝癌细胞作用中的影响,采用RT-PCR和Western Blot检测CXCL5和TNF-α的表达以及细胞质和细胞核中c-Jun蛋白的表达;将HepG2细胞分为3组:Control组、PDTC组(NF-κB信号通路抑制剂)和cSN50.1组,研究NF-κB信号通路在cSN50.1对肝癌细胞作用中的影响,采用RT-PCR和Western Blot检测CXCL5和TNF-α的表达以及细胞质和细胞核中NF-κB蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 与0μmol/L相比,10μmol/L组的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力无明显变化(P值均>0.05);30μmol/L组的增殖能力无明显变化(P>0.05),迁移、侵袭和集落形成能力均明显降低(P值均<0.05);50μmol/L组的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力均明显降低(P值均<0.01);70μmol/L和90μmol/L组的细胞增殖能力均明显降低(P值均<0.01),但细胞存活率低于50%。与Control组相比,SP600125组、PDTC组和c SN50.1组中CXCL5和TNF-α的基因和蛋白表达均明显降低(P值均<0.05)。与Control组相比,SP600125组、PDTC组和c SN50.1组中细胞核蛋白c-Jun和NF-κB表达均明显降低(P值均<0.05),SP600125组和PDTC组中细胞质蛋白c-Jun和NF-κB表达均明显降低(P值均<0.05),c SN50.1组中细胞质蛋白c-Jun和NF-κB表达明显增高(P<0.05)。结论 c SN50.1可以抑制肝癌细胞的恶性行为,可抑制肝癌细胞中c-Jun和NF-κB的入核转运来降低CXCL5和TNF-α的表达。

炎性细胞因子、DBH基因多态性、烟酒习惯与帕金森病相关性

目的探索血清白细胞介素(IL)-6、IL-1β和趋化因子(CXCL)53个炎性指标、多巴胺β-羟化酶(DBH)基因5 TaqⅠ位点多态性、烟酒嗜好单独或者联合作用与帕金森病(PD)的相关性。方法以新疆地区94例PD患者(病例组)、110例健康对照者(对照组)为研究对象,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定炎性指标的表达水平,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测其DBH-5-TaqⅠ位点多态性基因分型,并收集其吸烟史、饮酒史暴露情况。比较PD组和对照组间的炎性指标表达、DBH-5-TaqⅠ多态性分布、烟酒习惯是否存在差异。分析PD组和对照组间的炎性指标表达是否与DBH-5-TaqⅠ多态性或烟酒习惯存在联合作用。结果在总体样本中,病例组和对照组IL-6、IL-1β、CXCL5分布均无统计学差异(均P>0.05)。当按性别、年龄进行分层分析时:男性病例组IL-6表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄>65岁病例组CXCL5表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。病例组和对照组间DBH-5-TaqⅠ基因型分布、烟酒习惯分布均无统计学差异(均P>0.05)。联合作用分析显示:无吸烟史病例组IL-6表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。携带T/C基因型病例组CXCL5表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-6在男性、无吸烟史的PD患者中低表达。CXCL5在年龄>65岁、携带DBH-5-TaqⅠT/C基因型的PD患者中低表达。性别可能对炎症细胞因子IL-6的释放可能存在影响,其在男性病组的释放低于正常男性人群。年龄可能对炎症细胞因子CXCL5的释放可能存在影响,其在年龄>65岁PD组的释放低于年龄>65岁的正常人群。不吸烟能减少炎症细胞因子IL-6的释放,二者之间的联合可能是PD的保护因素。DBH T/C基因型能减少炎症细胞因子CXCL5的释放,二者之间的联合可能是PD的保护因素。并未发现DBH多态性与烟酒习惯之间存在联合作用影响PD的发生。并未发现IL-1β的表达对PD的发生产生影响。

胶质瘤患者血清和脑脊液中CXCL5的表达水平与胶质瘤特征的关系研究

目的:通过检测胶质瘤患者血清、脑脊液中的外周趋化因子C-X-C基序配体5(CXCL5)水平,探讨CXCL5异常表达对胶质瘤患者的临床意义。方法:选取医院收治的77例胶质瘤患者纳入观察组,同期选取20例非肿瘤患者纳入对照组。分别取两组患者的血清样本、胶质瘤患者术后脑脊液样本,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别对样本进行CXCL5表达水平检测,比较两组的CXCL5表达水平差异;将两组患者血清和脑脊液中的CXCL5表达水平与肿瘤级别和患者预后进行相关性分析。结果:观察组患者术前血清CXCL5表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(t=16.71,P<0.0001)。观察组患者术后与术前相比,血清中CXCL5表达水平显著降低,差异有统计学意义(t=13.67,P<0.0001)。观察组患者术前血清CXCXL5的表达水平、术后血清CXCXL5的表达水平和术后脑脊液CXCXL5的表达水平均两两互为正相关(r=0.16,r=0.20,r=0.27;P<0.05)。结论:观察组患者术前血清、术后血清和术后患者脑脊液中的CXCXL5的表达水平差异均会对患者预后产生显著影响。观察组胶质瘤患者手术前后检测血清CXCL5的表达水平,术后监测脑脊液CXCL5的表达水平均有助于对肿瘤级别和患者预后进行评估。

CXCL5基因敲除小鼠的繁殖、基因型鉴定及与野生型小鼠的比较

目的繁殖和鉴定CXC趋化因子配体5（CXCchemokineligand5，CxcL5）基因敲除小鼠，以获得CXCL5-／-纯合子小鼠并与野生型小鼠进行比较。方法将CXCL5＋/-杂合子小鼠繁殖后，剪取子代小鼠耳组织，提取基因组DNA，用PCR法鉴定子代小鼠的基因型。采用独立样本t检验比较同周龄同性别CXCL5基因敲除纯合子小鼠与野生型小鼠的体重和结直肠长度，并通过苏木素-伊红染色观察两种基因型小鼠的结肠形态结构。结果经繁殖，共获得60只CXCL5-/-纯合子小鼠和55只野生型小鼠。4、6、8、10周龄雌性CXCL5-/-小鼠的体重分别为（10．08±0．78）、（14．55±0．92）、（18．01±0．68）和（19．75±1．23）g，明显轻于同龄雌性野生型小鼠[（11．43±0．85）、（18．42±0．76）、（20．42±1．63）和（21．27±1．66）g]（t值分别为-2．622、-7．253、-3．042、-1．644，P值均〈0．05）；6、8周龄雄性CXCL5-／-小鼠的体重分别为（17．46±0．74）和（20．62±1．62）g，也明显轻于同龄雄性野生型小鼠[（20．47±1．66）和（23．33±1．67）g]（t值分别为-3．688、-2．885，P值均〈0．05）。6周龄雌性CXCL5-／-小鼠的结直肠长度为（6．86±0．17）cm，与同龄雌性野生型小鼠（7．66±0．11）cm的长度相比，明显较短（t=-8．835，P〈0．05），但结肠的形态结构无明显改变。结论成功获得了CXCL5基因敲除纯合子小鼠，为深入研究CXCL5的生物学功能奠定了基础。

CXCL5/CXCR2生物轴在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌的增殖、进展、转移是一个多因素参与的过程.其中,CXC类趋化因子配体5（CXCL5）能够识别并结合CXC类趋化因子受体2（CXCR2）,通过细胞自分泌或旁分泌等途径激活或调节信号通路的表达.CXCL5/CXCR2生物轴能够在胰腺癌细胞的增殖、黏附、侵袭、转移和预后中发挥作用,并且与胰腺癌血管及淋巴管生成等相关.直接或间接调控CXCL5/CXCR2在胰腺癌中的表达,有望成为靶向治疗胰腺癌的有效手段.

突发性耳聋患者HMGB1和ENA-78含量在治疗前后变化的意义

目的探讨突发性耳聋患者血清高迁移率蛋白-1(HMGB1)和中性粒细胞激活肽-78(ENA-78)的含量变化,及其在突发性耳聋发生过程中的作用和意义。方法采用酶联免疫(ELISA)法检测血清HMGB1和ENA-78含量;检测102例突发性耳聋患者、35例其他疾病对照组和30例健康对照组的血清HMGB1和ENA-78含量,并比较治疗前后血清HMGB1和ENA-78的测定结果。结果突发性耳聋患者治疗前血清HMGB1和ENA-78含量较两对照组显著升高(P<0.01);治疗后患者HMGB1和ENA-78含量明显降低。同时重度组突发性耳聋患者血清HMGB1和ENA-78浓度明显高于中、轻度组,中度组患者明显高于轻度组,且差异有统计学意义(P<0.01)。突发性耳聋患者血清HMGB1和ENA-78含量之间呈正相关(r=0.68,P<0.01)。结论血清HMGB1和ENA-78水平的变化与突发性耳聋病情严重程度密切相关。

新生儿缺氧缺血性脑病血清高迁移率蛋白-1和中性粒细胞激活肽-78含量变化的临床研究

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清高迁移率蛋白-1(HMGB1)和中性粒细胞激活肽-78(ENA-78)水平的动态变化。方法分别采用ELISA法和免疫比浊法测定116例HIE患儿及40例正常新生儿血HMGB1与ENA-78水平。结果出生后2h内HIE各组(重、中、轻)HMGB1与ENA-78水平显著高于对照组(t=18.45,16.72,13.17;18.47,17.53,13.62,P均<0.01),并且随着病情程度的加重而逐渐升高。HMGB1与ENA-78水平出生后第1天时最高,轻度组第3天基本恢复正常,中度组第3天有明显下降,第10天基本恢复正常。重度组第3天无明显下降,第10天有明显降低,但仍高于对照组(t=11.27,11.36,P均<0.01)。HIE患儿血清HMGB1水平与ENA-78水平呈显著正相关(r=0.64,P<0.01)。结论新生儿HIE血HMGB1与ENA-78水平变化与HIE严重程度有关。

ENA-78、IP-10和VEGF基因多态性与特发性肺纤维化的相关性

目的探讨上皮中性粒细胞活化肽78（ENA-78）、干扰素诱导蛋白10（IP-10）和血管内皮生长因子（VEGF）的基因多态性与特发性肺纤维化（IPF）的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性技术，检测60例住院IPF患者（IPF组）和60例年龄、性别、吸烟情况匹配的外伤、骨折住院患者（对照组）的ENA-78（-156G／C）、IP-10（-1596C／T）和VEGF（＋405G／C）的基因多态性，以比值比（OR）和95％可信区间（C1）表示相对风险度。结果IPF组ENA-78GC＋CC基因型频率（20．0％）和C等位基因频率（12．7％）均明显高于对照组[分别为6．7％（P=0．032）和3．3％（P=0．008）]，携带C等位基因的个体患IPF的相对风险度明显增加（OR=4．23，95％CI为1．35～13．20）；IP-10CT＋CT基因型频率（10．O％）和T等位基因频率（5．8％）均明显低于对照组[分别为26．7％（P=0．018）和14．2％（P=0．031）]，携带T等位基因的个体患IPF的相对风险度降低（OR=0．38，95％CI为0．15～0．95）。2组VEGF（＋405G／C）基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义。结论ENA-78（-156C）等位基因是IPF的危险因素，IP-10（-1596T）等位基因是IPF的保护性因素，VEGF（＋405G／C）基因多态性与IPF的发生可能无相关性。

子宫内膜异位症患者腹腔液中EPO及ENA-78的表达及意义

目的研究促红细胞生成素（EPO）及中性粒细胞激活肽-78（ENA-78）在子宫内膜异位症（内异症）中的表达及意义。方法选择30例内异症患者（I—II期9例，III～IV期21例）和30例非内异症患者，采用双抗体夹心酶联免疫分析方法（ELISA法）测定其腹腔液中EPO及ENA-78的表达量，并分析内异症患者腹腔液中EPO与腹腔液中ENA-78的表达的相关性。结果内异症患者腹腔液中EPO及ENA-78的表达量[（9．272±2．284）IU／L，（2．068±0．794）ng／m1]均高于对照组[（5．759±0．502）IU／L，（0．886±0．145）ng／ml，P〈0．05]；I～Ⅱ期内异症患者腹腔液中EPO的表达量[（9．549±1．996）IU／L]与Ⅲ～Ⅳ期患者[（9．181±1．897）IU／L]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；III-Ⅳ期内异症患者腹腔液中ENA-78表达量[（2．517±0．518）ng／ml]高于I-Ⅱ期患者[（1．137±0．169）ng／ml，P〈0．05]；内异症患者腹腔液中EPO与ENA-78的表达无明显相关（P〉0．05）。结论内异症患者腹腔液中EPO及ENA-78的过度表达，可能在内异症发病机制中起重要作用。