CXCL2在肿瘤中的表达及意义

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,近年来恶性肿瘤的发病率与死亡率随年龄的增长呈上升的趋势,可是肿瘤的早期发现及治疗方法仍然很有限。近些年多项研究发现,细胞趋化因子不仅参与白细胞趋化,促进损伤组织修复方面发挥作用,在肿瘤的发生、发展、转移过程中也发挥着重要作用。CXCL2是CXC家族的一员,作为原癌基因编码的蛋白,可促进血管形成,在肿瘤的发生、发展、转移中起到重要作用。近年研究显示CXCL2参与消化道、黑色素瘤、乳腺癌的发生、发展、转移,随其机制上不明确,仍有可能成为各类肿瘤诊断依据、肿瘤复发的检测因子,也可能成为肿瘤治疗的潜在靶点,现就针对CXCL2与肿瘤的关系作简单阐述。

褪黑素通过JNK/c-Jun信号通路抑制胆汁酸诱导Cxcl2表达的机制研究

目的 研究褪黑素抑制胆汁酸诱导趋化因子Cxcl2表达的分子调控机制。方法 喂养小鼠含有1%胆酸(cholic acid, CA)的饲料2周,构建胆汁淤积小鼠模型,给予褪黑素腹腔注射(100 mg/kg, 1次/d)。收集肝组织后HE染色,根据Scheuer系统进行病理组织学评分。采用Real-time qPCR及Western blot方法检测褪黑素对小鼠肝脏内Cxcl2、Cxcr2、Mpo、c-Jun表达的影响。使用免疫组化方法检测小鼠肝脏内c-Jun的表达。分离并培养小鼠原代肝细胞,使用结合型胆汁酸TCA联合褪黑素处理小鼠原代肝细胞,在体外水平进一步探索褪黑素抑制胆汁酸诱导的Cxcl2表达的机制。使用JNK激动剂Anisomycin和褪黑素共同处理小鼠原代肝细胞,检测趋化因子Cxcl2表达。结果 褪黑素给药明显减轻胆汁淤积诱导的炎症性肝损伤(P<0.05)。褪黑素明显抑制胆汁淤积小鼠肝脏内趋化因子Cxcl2及其受体Cxcr2表达,并抑制肝脏内中性粒细胞标志物Mpo和转录因子c-Jun的表达(P<0.05)。褪黑素显著减少TCA诱导的小鼠原代肝细胞内趋化因子Cxcl2的表达(P<0.05)。JNK激动剂Anisomycin逆转褪黑素对Cxcl2的抑制作用(P<0.05)。结论 褪黑素通过抑制JNK/c-Jun信号通路来降低胆汁酸诱导的趋化因子Cxcl2表达。

pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用

目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。

转录激活因子3在化脓性链球菌M1蛋白诱导的急性肺损伤小鼠中的作用

目的探讨转录激活因子3(ATF3)在化脓性链球菌M1蛋白血清型诱导的急性肺损伤小鼠中的作用。方法 20只雌性C57/B6小鼠随机分为对照组(A组)和急性肺损伤组(B组),每组10只。20只雌性ATF3敲基因小鼠(ATF3^(-/-))随机分为对照组(C组)和急性肺损伤组(D组)。应用化脓性链球菌M1蛋白建立小鼠急性肺损伤模型,观察4组小鼠肺组织病理改变,计算肺组织湿重与干重比值,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数量,实时PCR方法检测小鼠肺泡巨噬细胞CXC趋化因子(CXCL1和CXCL2)mR NA的表达,ELISA法测定小鼠肺组织中CXCL1和CXCL2的浓度。结果与A组小鼠比较,B组小鼠肺组织病理改变加重、肺组织湿重与干重比值、BALF中中性粒细胞数量、肺泡巨噬细胞中CXCL1和CXCL2 mR NA表达量、肺组织CXCL1、CXCL2浓度均增加(P<0.05);与B组小鼠比较,D组小鼠肺组织病理改变加重、肺组织湿重与干重比值、BALF中中性粒细胞数量、肺泡巨噬细胞中CXCL1和CXCL2 m RNA表达量、肺组织CXCL1、CXCL2浓度均明显增加(P<0.05)。结论 ATF3对化脓性链球菌M1蛋白诱导的急性肺损伤小鼠有保护作用,可能与ATF3减少CXC趋化因子的产生、减轻中性粒细胞肺内聚集有关。

鞘内注射TRESK基因重组腺病毒对神经病理性痛大鼠脊髓趋化因子介导炎性反应的影响

目的：评价鞘内注射TRESK基因重组腺病毒对神经病理性痛大鼠脊髓趋化因子介导炎性反应的影响。方法健康雄性SD大鼠36只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为6组（ n＝6）：对照组（ C组）、假手术组（ S 组）、神经病理性痛组（ NP 组）、TRESK 过表达腺病毒组（ TRESK组）、阴性腺病毒组（ Virus组）和生理盐水组（ NS组）。采用坐骨神经分支选择性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型。 TRESK组、NS组和Virus组于造模成功后即刻分别鞘内注射pAd∕CMV∕V5-DEST-TRESK 25μl（109IU∕ml）、阴性腺病毒25μl和生理盐水25μl。于造模前1 d（T0）和造模后1、3、7和14 d（ T1～4）时测定机械缩足反应阈（ MWT）和热缩足潜伏期（ TWL）。于T3时测定痛阈后处死大鼠取脊髓，采用PCR法检测单核细胞趋化因子-1（ MCP-1）、巨噬细胞炎性蛋白-2（ MIP-2）、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA的表达。结果各组不同时点TWL比较差异无统计学意义（ P＞0．05）。与C组和S组比较，NP组和TRESK组T1～4时、Virus组和NS组T1～3时MWT降低，NP 组、TRESK组、Virus组和NS组脊髓MCP-1、MIP-2、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达上调（P＜0．05）；与NP 组比较，TRESK组T1-4时MWT升高，脊髓MCP-1、MIP-2、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达下调（P＜0．05）。结论鞘内注射TRESK基因重组腺病毒减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制脊髓趋化因子介导的炎性反应有关。

血必净注射液联合参附注射液治疗脓毒症效果探讨

目的探讨血必净注射液联合参附注射液对脓毒症患者临床疗效、血流动力学指标、血清巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)、降钙素原(PCT)的影响。方法选取2012年1月—2014年1月绍兴市人民医院急诊重症监护室(EICU)收治的脓毒症患者68例,采用随机数字表法将患者分为对照组和观察组,各34例。两组患者均参照2008年国际脓毒性休克治疗指南进行治疗,观察组在此基础上给予血必净注射液联合参附注射液治疗。记录两组患者治疗前后序贯器官功能障碍评分(SOFA)及急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、肺损伤评分(Murray评分)、血流动力学〔红细胞沉降率(ESR)、纤维蛋白原(Fib)、低切变率下全血黏度(nbl)、高切变率下全血黏度(nbh)〕、MIP-2、PCT水平。结果治疗前,两组SOFA及APACHEⅡ、Murray评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组SOFA及APACHEⅡ、Murray评分均低于对照组(P<0.05)。治疗前两组ESR、Fib、nbl和nbh比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组ESR、Fib、nbl和nbh均低于对照组(P<0.05)。治疗前两组MIP-2和PCT比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组MIP-2和PCT均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为5.9%(2/34),观察组不良反应发生率为8.8%(3/34),两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(χ2=0.216,P=0.642)。结论血必净注射液联合参附注射液治疗脓毒症能有效改善患者血流动力学指标,降低炎性因子水平,促进患者预后。

CXCL1和CXCL2在ARDS小鼠肺组织表达的变化规律及评价

目的 观察急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠模型肺组织内中性粒细胞趋化因子CXCL1和CXCL2的表达量及随时间的变化规律，探究其在小鼠肺组织损伤过程中的作用。方法 42 只雄性C57BL/6小鼠随机分为生理盐水对照组（saline），LPS气管滴注15分钟组（LPS-15min），30分钟组（LPS-30min），6小时组（LPS-6h），24小时组（LPS-24h），3天组（LPS-3day）和1周组（LPS-1week），每组6只，建立ARDS小鼠模型；H-E染色观察小鼠肺组织形态结构改变，并计算肺损伤评分；RT-qPCR法检测小鼠肺组织内CXCL1和CXCL2的mRNA表达水平；ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中CXCL1和CXCL2浓度的变化，并计算中性粒细胞数目。结果 与正常对照组小鼠相比，LPS诱导产生的ARDS小鼠模型组肺泡及间质组织正常结构破坏，炎症浸润明显，肺损伤评分升高，3天时达最高值（P〈0.05）；ARDS小鼠肺组织中CXCL1和CXCL2 mRNA表达水平显著升高（P〈0.05），分别在LPS滴注后30分钟和6小时达峰值；同时ARDS小鼠BALF中CXCL1和CXCL2浓度也明显升高，变化趋势与肺组织一致（P〈0.05）；且BALF内中性粒细胞数目显著增加，在LPS滴注6小时后达峰值（P〈0.05）。结论 LPS 诱导产生的ARDS小鼠模型中中性粒细胞数目及CXCL1、CXCL2等趋化因子的表达量均随着时间表现出类似的“驼峰样”升高，提示中性粒细胞趋化因子在ARDS炎症性损伤的形成及发展中扮演着重要角色。

α－促黑素对大鼠肾肺缺血／再灌注损伤的保护作用和机制研究

目的：探讨大鼠肾缺血／再灌注（I／R）损伤中趋化因子2（CXCL2）、转化生长因子－α（ TGF－α）的表达及α－促黑素（α－MSH）的治疗作用。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I／R组和α－MSH治疗组，每组各10只大鼠。通过阻断双侧肾动脉建立大鼠肾I／R模型，并在α－MSH干预后24 h处死各组大鼠，留取血液及肾、肺组织。经HE染色后在光镜下观察肾、肺组织病理变化，采用RT－PCR和ELISA方法检测大鼠肾、肺组织中CXCL2、TGF－αmRNA和蛋白表达水平。结果①I／R组血清BUN和Cr水平均高于假手术组和α－MSH治疗组（ P＜0．05），假手术组和α－MSH治疗组血清BUN和Cr水平比较差异均无统计学意义（ P＞0.05）。②肾、肺组织中α－MSH治疗组CXCL2 mRNA低于I／R组（P＜0．05），而TGF－αmRNA高于I／R组（P＜0．05）。③I／R组和α－MSH治疗组CXCL2、TGF－α蛋白表达值均高于假手术组（P＜0．05）；α－MSH治疗组CXCL2蛋白表达值低于I／R组（P＜0．05），而α－MSH治疗组TGF－α蛋白表达值高于I／R组（ P＜0．05）。结论α－MSH可能通过增加TGF－α表达水平和减少CXCL2表达水平，减轻肾I／R所导致的肾、肺组织的损伤。