消瘀泄浊饮对糖尿病肾病小鼠肾脏足细胞凋亡及HIF1α表达的调控作用

[目的]探讨消瘀泄浊饮对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠肾脏足细胞凋亡的保护作用及对低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF1α)的影响。[方法]选用6只db/m小鼠为阴性对照组,18只db/db小鼠随机分为DKD模型组、低剂量消瘀泄浊饮组、高剂量消瘀泄浊饮组,每组6只。灌胃12周后,检测尿液中尿蛋白、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-microglobulin,β_(2)-MG)、尿白蛋白/肌酐(albumin/creatinine ratio,Acr)、尿β_(2)-微球蛋白/肌酐(β_(2)-microglobulin/creatinine ratio,β_(2)-MG/Ucr)及血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白蛋白(albumin,Alb)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)的水平。分离肾组织,光镜及电镜下观察肾组织病理变化;组织匀浆后用实时聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测HIF1α、nephrin mRNA水平。[结果]与阴性对照组比较,DKD模型组小鼠的尿蛋白、尿β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr水平升高(P<0.01),血清Alb下降(P<0.01);肾小球体积增大,毛细血管袢呈分叶状,系膜细胞及基质增生,间质炎症及纤维化程度加重,足突融合增加,基底膜增厚,足细胞凋亡增加;肾组织HIF1αmRNA表达升高(P<0.01),nephrin mRNA表达下降(P<0.01)。与DKD模型组比较,高、低剂量消瘀泄浊饮组的尿蛋白、尿β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr水平下降(P<0.01),血清Alb水平升高(P<0.01);肾小球、肾间质、足突病变明显改善,足细胞凋亡减少;肾组织HIF1αmRNA表达下降(P<0.01),nephrin mRNA表达升高(P<0.01)。高、低剂量消瘀泄浊饮组间尿蛋白、β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr、Alb水平和肾组织HIF1α、nephrin mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]消瘀泄浊饮能改善DKD小鼠尿蛋白、肾功能及肾脏结构病变、足细胞凋亡等指标,其可能通过调节HIF1α表达发挥作用。

miR-92b-5p对高糖诱导的足细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨miR-92b-5p在高糖诱导的足细胞损伤或凋亡过程中可能发挥的作用,并揭示其对线粒体功能的作用机制。方法①体外培养足细胞,分为对照组(NG组)和高糖组(HG组),通过高通量测序技术筛选差异表达的miRNA。②为了观察miR-92b-5p对足细胞线粒体功能和足细胞凋亡的影响,将正常血糖条件下培养的足细胞分为NC mimics、miR-92b-5p mimics、NC inhibitor、miR-92b-5p inhibitor组。为了观察抑制miR-92b-5p表达能否通过改善线粒体功能减轻高糖诱导的足细胞凋亡,将足细胞分为NG组、HG组、HG+NC inhibitor组、HG+miR-92b-5p inhibitor组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定miR-92b-5p的表达,流式细胞术测定足细胞凋亡率,CCK-8法测定足细胞活力,Western blot测定凋亡相关蛋白和线粒体相关蛋白的表达。结果①通过高通量测序技术,筛选出16个差异表达的miRNA,其中,HG组miR-92b-5p的表达明显升高(P<0.05)。②与NC mimics组相比,miR-92b-5p mimics组miR-92b-5p表达升高(P<0.05),足细胞活力降低(P<0.05),足细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达降低(P<0.05),Bax、Fis1表达增加(P<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-92b-5p inhibitor组miR-92b-5p表达降低(P<0.05),足细胞活力升高(P<0.05),足细胞凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达升高(P<0.05),Bax、Fis1表达降低(P<0.05)。③与NG组相比,HG组miR-92b-5p表达升高(P<0.05),足细胞活力降低(P<0.05),足细胞凋亡率增加(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达降低(P<0.05),Bax、Fis1表达增加(P<0.05)。与HG+NC inhibitor相比,HG+miR-92b-5p inhibitor组miR-92b-5p表达降低(P<0.05),足细胞活力升高(P<0.05),足细胞凋亡率减少(P<0.05),Bcl-2、Mfn1表达升高(P<0.05),Bax、Fis1表达降低(P<0.05)。结论在高糖条件下,miR-92b-5p的表达水平增加,而抑制miR-92b-5p的表达能够通过改善线粒体功能减轻高糖诱导的足细胞凋亡,从而延缓糖尿病肾病的进展。

中药干预足细胞凋亡治疗糖尿病肾病研究进展

糖尿病肾病(DN)的发病机制十分复杂,足细胞丢失在其发生、发展过程中起着重要作用,可导致肾功能受损,而细胞凋亡是足细胞丢失的主要原因,因此干预足细胞凋亡对于延缓DN进程有着重要意义。中药具有多靶点及多途径的特殊优势,近来许多研究发现中药在干预足细胞凋亡方面有良好的疗效,但缺乏系统性的综述。本文对中药干预足细胞的内源性凋亡、外源性凋亡、内质网应激凋亡三条途径,抑制足细胞凋亡治疗DN进行综述,以期为今后DN的治疗提供参考。

沉默FOXM1对糖尿病肾病小鼠炎症反应、足细胞凋亡及干细胞蛋白的影响研究

目的:观察沉默FOXM1对糖尿病肾病(DN)小鼠炎症反应、足细胞凋亡及干细胞蛋白的影响。方法:30只小鼠随机等分为空白对照组、DN模型组和沉默FOXM1组。空白对照组正常喂养。DN模型组和沉默FOXM1组高脂肪饮食构建DN模型后,DN模型组正常喂养,沉默FOXM1组给予Fox M1-shRNA慢病毒静脉注射。比较三组小鼠一般反应情况、光镜肾皮质病理、肾功能指标、炎症指标、足细胞凋亡及干细胞蛋白等观察指标的差异。结果:沉默FOXM1组的体重、进食量、饮水量与空白对照组比较(P>0.05),但均重(或多)于DN模型组(P<0.05)。与DN模型组相比,沉默FOXM1组的肾小管底膜增厚、肾小球体积增大、系膜基质增生、炎性反应均改善。与空白对照组相比,DN模型组和沉默FOXM1组的足细胞凋亡数增加,但沉默FOXM1组的足细胞凋亡数低于DN模型组(P<0.05)。与空白对照组相比,DN模型组和沉默FOXM1组的肾功能指标(Alb、KIM-1)、炎性因子(TNF-α、CRP、IL-2)、干细胞蛋白(Oct4、Sox2)均提升,但沉默FOXM1组的肾功能指标(Alb、KIM-1)、炎性因子(TNF-α、CRP、IL-2)、干细胞蛋白(Oct4、Sox2)低于DA模型组(P<0.05)。结论:沉默FOXM1能减少DN小鼠24 h尿白蛋白排泄,减轻肾脏损伤,降低炎性反应,抑制足细胞凋亡,改善干细胞蛋白表达,可能为DN治疗的一个靶向基因。

miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨miR-199b-5p对阿霉素诱导足细胞凋亡的影响及机制。方法 体外培养小鼠足细胞,用阿霉素构建足细胞凋亡模型。将足细胞随机分成对照组、阿霉素组、阿霉素+miR-199b-5p mimic组、阿霉素+NC mimic组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组、阿霉素+NC inhibitor组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-脂肪细胞质膜相关蛋白(APMAP)组、阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组、阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组和阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组,分别给予miR-199b-5p mimic/inhibitor、过表达/敲低APMAP腺病毒转染,使miR-199b-5p过表达/沉默表达以及APMAP过表达/沉默表达。用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-199b-5p及足细胞标志蛋白(Podocin)、凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3)、APMAP mRNA表达,用Western blotting法检测细胞内Podocin、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、APMAP及NF-κB信号通路相关蛋白(NIK、TRAF3)表达。用生物信息学分析miR-199b-5p的特异性下游靶基因;将细胞随机分为NC mimic+WT-APMAP组、miR-199b-5p+WT-APMAP组、NC mimic+MUT-APMAP组、miR-199b-5p+MUT-APMAP组,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p的直接靶基因。结果 与对照组比较,阿霉素组miR-199b-5p、Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高(P均<0.05),Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低(P均<0.05)。与阿霉素+NC mimic组比较,阿霉素+miR-199b-5p mimic组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量低,Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量高(P均<0.05)。与阿霉素+NC inhibitor组比较,阿霉素+miR-199b-5p inhibitor组Podocin、Bcl-2、APMAP、TRAF3相对表达量高,Bax、Cleaved caspase-3、NIK相对表达量低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,与NC mimic+MUT-APMAP组比较,miR-199b-5p+WT-APMAP组APMAP荧光素酶活性低(P<0.05)。与阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-NC组比较,阿霉素+miR-199b-5p mimic+Ad-APMAP组TRAF3相对表达量高,NIK相对表达量低(P均<0.05)。与阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-NC RNAi组比较,阿霉素+miR-199b-5p inhibitor+Ad-APMAP RNAi组TRAF3相对表达量低,NIK相对表达量高(P均<0.05)。结论 miR-199b-5p通过靶向APMAP激活NF-κB信号通路促进阿霉素诱导足细胞凋亡。

黄芪甲苷联合大黄素通过Smads通路抑制TGF-β1诱导的足细胞凋亡

目的：探讨黄芪甲苷联合大黄素是否通过Smads通路抑制转化生长因子-β1（TGF—β1）诱导小鼠足细胞株凋亡。方法：①体外培养小鼠足细胞株。②应用不同浓度TGF—β1（10^-1～10^4ng／L）诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF—β1不同刺激时间（12、24、48h）诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF—β1诱导小鼠足细胞凋亡，实验分为正常组、TGF—β1组、黄芪甲苷＋TGF—β1组（黄芪甲苷组）、大黄素＋TGF—β1组（大黄素组）、黄芪甲苷＋大黄素＋TGF—β1组（黄芪甲苷＋大黄素组）。⑤采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3mRNA及蛋白质表达。结果：①随着TGF—β1浓度增加（10^-1～10^4ng／L）、刺激时间增加，足细胞凋亡比率增多（P〈0．05），足细胞Smad2、Smad3mRNA表达增加。TGF—β1 10^3ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度，24h为最佳诱导凋亡时间。（2）TGF—β1组与正常组相比Caspase3阳性细胞比率增加（P〈0．01）；Smad2、Smad3蛋白质表达明显增加（P〈0．01）。③黄芪甲苷＋大黄素组与TGF—β1组、黄芪甲苷组、大黄素组比较：足细胞凋亡比率明显减少（P〈0．05）；Caspase3阳性细胞比率减少（P〈0．05）；Smad2、Smad3蛋白质表达减少（P〈0．05）。④黄芪甲苷＋大黄素组较TGF—β1组Smad2、Smad3mRNA表达减少。结论：（1）TGF—β1能通过Smads通路诱导小鼠足细胞凋亡，呈浓度及时间依赖性。②黄芪甲苷联合大黄素能通过Smads通路阻断足细胞凋亡，其机制可能与减少TGF—β1的表达，阻止其激活Smads蛋白，从而阻止Caspase家族诱导的足细胞凋亡有关。

miR-30a在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用

目的探讨miR-30a在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(80μmol/L Hcy),干预细胞48 h后,流式细胞术检测足细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-30a的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测miR-30a启动子区DNA甲基化水平;透射电镜观察感染miR-30a前体(miR-30a mimic)和抑制物(miR-30a inhibitor)后足细胞凋亡及超微结构的变化。结果与Control组相比,Hcy组足细胞凋亡水平增加(P<0.05),而miR-30a表达水平降低(P<0.01);同时,miR-30a启动子区DNA甲基化程度升高(P<0.05);感染miR-30a mimic后,足细胞损伤明显减轻,凋亡形态的细胞数量减少,而感染miR-30a inhibitor后足细胞损伤程度加剧,凋亡形态的细胞数量增加。结论 miR-30a可抑制足细胞凋亡,其机制可能是miR-30a启动子区DNA低甲基化发挥重要作用。

氧化应激在糖尿病肾病足细胞凋亡中的作用

氧化应激在抗肾小球基底膜滤过屏障中肾小球足细胞具有极其重要的作用,高血糖引起的氧化应激可经过多种途径参与足细胞的损伤。足细胞是一种终末分化细胞,损伤后病变不可逆转,因此在治疗足细胞损伤的最近研究中,预防足细胞的损伤尤为重要。对于阐明糖尿病肾病发病机制的研究中,氧化应激对于足细胞的损伤变成新的研究方向,为疾病的防治开辟全新的思路,也为糖尿病肾病患者的病理生理机制研究和早期防治带来新展望。

解毒通络保肾法对高糖刺激下小鼠足细胞PI3K/Akt信号通路活化相关因子ILK、Akt及足细胞凋亡率的影响

目的探讨解毒通络保肾法对高糖刺激下小鼠足细胞损伤的保护作用。方法体外培养小鼠足细胞,随机分为A组(正常糖组)、B组(高糖组)、C组:高糖+低剂量解毒通络保肾血清组、D组:高糖+中剂量解毒通络保肾血清组、E组:高糖+高剂量解毒通络保肾血清组。用酶联免疫吸附试验检测各组整合素连接激酶(ILK)及蛋白激酶B(Akt)的表达。流式细胞仪检测足细胞凋亡率。结果与A组相比,B、C、D、E组ILK表达均显著增加(P<0. 05,P<0. 01),与B组相比,C、D、E组ILK表达均降低,但只有D、E组差异有统计学意义(P<0. 05,P<0. 01);与A组比较,B、C、D、E组Akt表达均显著降低(P<0. 05,P<0. 01),而与B组对比,C、D、E组Akt表达增加,但只有E组差异有统计学意义(P<0. 05)。与A组相比,B、C、D、E组细胞凋亡率均显著增加(P<0. 01),与B组相比,C、D、E组细胞凋亡率显著降低(均P<0. 01),与C组相比,D、E组凋亡率显著降低(均P<0. 01)。结论解毒通络保肾散可以保护高糖刺激下小鼠肾足细胞,降低细胞凋亡率,其保护机制可能是通过阻断ILK介导的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt信号通路。

黄芪甲苷对高糖所致小鼠足细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对高糖（HG）所致小鼠足细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 将条件性永生的小鼠足细胞分为正常葡萄糖（NG）组、HG组、甘露醇高渗对照组（MA）及HG＋不同剂量（10、50、100 μg/ml）AS-Ⅳ干预组,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测足细胞凋亡,同时采用荧光试剂盒和实时定量PCR法分别检测足细胞Caspase 3活性及足细胞凋亡基因Bax/Bcl-2mRNA表达.结果 HG组足细胞凋亡率和Caspase 3活性均较NG组增高（均P〈0.05）;各剂量AS-Ⅳ组的足细胞凋亡率和Caspase 3活性均较HG组下降（均P〈0.05）,且呈剂量依赖关系.HG组足细胞促凋亡基因Bax mRNA表达水平较NG组增高.而抗凋亡基因Bcl-2 mRNA则较NG组下降（均P〈0.05）;各剂量AS-Ⅳ组的足细胞Bax mRNA水平均较HG组下降,而Bcl-2 mRNA水平则均较HG组增高（均P〈0.05）,且均呈剂量依赖性.结论 AS-Ⅳ可能通过调节足细胞Bax/Bcl-2 mRNA表达水平,从而抑制HG所致的足细胞凋亡.

转化生长因子-β_1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法(1)体外培养小鼠足细胞株;(2)应用不同浓度(10^(-1)~10^+ng/L)TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;(3)10~3ng/L TGF-β_1诱导不同时间(12、24、48h)后观察足细胞凋亡情况;(4)采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3;(5)实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果(1)小鼠足细胞在不同浓度(10^(-1)~10~4ng/L)TGF-β_1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组(均P<0.05);(2)随着TGF-β_1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高(P<0.05);p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达增加;TGF-β_110~3ng/L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;(3)与正常对照组比较,10~3ng/LTGF-β_1诱导后Caspase 3阳性细胞比率显著增加(P<0.01),p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加(P<0.01)。结论 TGF-β_1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β_1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。

黄芪多糖及丹酚酸对高糖诱导小鼠足细胞凋亡的影响

目的观察黄芪多糖与丹酚酸对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。方法采用小鼠足细胞株,通过温度选择的培养方法诱导足细胞分化,分为正常对照组(5mmol/L)、甘露醇高渗对照组、高糖组、高糖+黄芪多糖组、高糖+丹酚酸组,分别于干预3h、6h、12h和24h后收集细胞;采用Annexin V-FITC和PI双染方法,用流式细胞仪观察各组足细胞的凋亡率。结果高糖组各时间点足细胞细胞凋亡率均高于同期正常对照组与高渗对照组(P<0.01);高糖+黄芪多糖组、高糖+丹酚酸组各时间点足细胞凋亡率均较高糖组降低(P<0.05,P<0.01);高糖+黄芪多糖组与高糖+丹酚酸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖可诱导足细胞凋亡,黄芪多糖与丹酚酸对高糖诱导的足细胞凋亡均有抑制作用。

疏利三焦法通过转化生长因子-β途径调节糖尿病肾病足细胞凋亡机制的研究

目的研究疏利三焦法通过转化生长因子-β(TGF-β)途径调节糖尿病肾病足细胞凋亡的机制。方法 48只SD大鼠,随机抽取8只作为对照组,余40只进行糖尿病肾病模型造模,取60 mg/kg的链脲佐菌素(STZ)溶解于0.1 mol/L灭菌枸橼酸钠缓冲液(pH 4.0)进行腹腔注射,对照组大鼠腹腔注射等量灭菌枸橼酸钠缓冲液。将34只造模成功大鼠随机分为模型组8只、缬沙坦组8只、疏利组9只、疏利高组9只。疏利组予三消汤9 mL/(kg·d)灌胃;疏利高组予三消汤18 mL/(kg·d)灌胃;缬沙坦组予缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃;对照组和模型组予0.9%氯化钠注射液18 mL/(kg·d)灌胃,连续给药8周。干预8周后,观察大鼠血糖、肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量及肾脏TGF-β_1、Smad2/3蛋白、Smad7蛋白和足细胞凋亡水平。结果模型组、缬沙坦组、疏利组、疏利高组血糖、肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量水平均高于对照组(P<0.05);缬沙坦组、疏利组、疏利高组肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量,疏利组、疏利高组血糖与模型组比较均降低(P<0.05);疏利组、疏利高组血糖、肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量均低于缬沙坦组(P<0.05);疏利高组血糖、肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量均低于疏利组(P<0.05)。模型组、缬沙坦组、疏利组、疏利高组TGF-β_1、Smad2/3蛋白、足细胞凋亡均高于对照组(P<0.05),Smad7蛋白低于对照组(P<0.05);缬沙坦组、疏利组、疏利高组TGF-β_1、Smad2/3蛋白、足细胞凋亡均低于模型组(P<0.05),Smad7蛋白高于模型组(P<0.05);疏利组、疏利高组TGF-β_1、Smad2/3蛋白、足细胞凋亡均低于缬沙坦组(P<0.05),Smad7蛋白高于缬沙坦组(P<0.05);疏利高组TGF-β_1、Smad2/3蛋白、足细胞凋亡低于疏利组(P<0.05),Smad7蛋白高于疏利组(P<0.05)。结论疏利三焦法可通过抑制TGF-β/Smad信号通路激活,进而抑制足细胞凋亡,缓解糖尿病肾病病情,值得进一步研究探讨。

雷公藤甲素抑制阿霉素肾病大鼠足细胞凋亡的机制研究

目的:观察雷公藤甲素对阿霉素肾病(ADRN)大鼠足细胞凋亡的影响并初步其可能机制。方法:将45只Wistar大鼠随机分为对照组(N)、模型组(ADR)及治疗组(T)。其中ADR组和T组给予一次性尾静脉注射阿霉素6.5 mg/kg构建ADRN模型大鼠,T组给予雷公藤甲素(200μg·kg^(-1)·d^(-1))干预8周。于2、4、6、8周分别检测24 h尿蛋白定量,观察各组大鼠的生化指标及肾组织学改变,TUNEL法测足细胞凋亡,WT-1免疫组织化学染色检测肾小球足细胞数,RT-PCR检测Synaptopodin、p53、Notch1 mRNA表达变化,western印迹测定Synaptopodin、Notch1、Hes1的蛋白表达。结果:(1)ADR组各时间点24 h尿蛋白定量、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)胱抑素C(Cys C)均高于N组,而足细胞计数显著降低,肾小球系膜区增宽,且系膜细胞增生,T组Scr、Cys C低于ADR组(P<0.05),足细胞数明显增加(P<0.05),同时病理改变较其减轻。(2)8周末时ADR组Synaptopodin mRNA和蛋白表达降低,p53 mRNA表达升高,足细胞体积肿胀增大,凋亡足细胞数目比N组明显增多(P<0.05);与ADR组相比,T组Synaptopodin mRNA和蛋白表达增加,p53 mRNA表达下降,凋亡足细胞数目较ADR组明显减少(P<0.05)。(3)ADR组Notch1 mRNA和蛋白的表达以及Hes1蛋白的表达均高于N组(P<0.05),T组Notch1mRNA和蛋白的表达及Hes 1蛋白的表达低于ADR组(P<0.05)。结论:雷公藤甲素可抑制ADRN的足细胞凋亡,其保护足细胞的作用可能与降低Notch信号通路的表达有关。

小檗碱对高糖诱导足细胞凋亡的干预作用及其相关调控机制研究

目的研究高糖对小鼠肾小球足细胞凋亡的影响及其特点,探讨小檗碱对高糖诱导足细胞凋亡的干预作用及可能机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,观察足细胞在不同浓度高糖和不同培养时间的形态学变化,CCK-8法测定足细胞的活性,Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测足细胞的凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察caspase-3的表达,Western blot法检测caspase-3、6、7、8、9与Bcl-2的表达。结果高糖(15、20、25、30 mmol·L^-1)培养分别在72、48、36、24 h时诱发足细胞凋亡;小檗碱能增加高糖培养的足细胞活力,明显减少高糖诱导的足细胞凋亡,不同程度的下调高糖诱导的caspase-3、6、7、8和9的表达,提高Bcl-2表达。结论研究不同高糖环境在不同时间诱发足细胞凋亡的特点,为进行足细胞凋亡与肾脏损伤的干预治疗提供重要的时间参考;小檗碱缓解高糖诱发的足细胞凋亡,其作用机制可能与caspase-8/caspase-3和Bcl-2/caspase-9/caspase-3凋亡通路相关。

IQGAP1在2型糖尿病肾病患者足细胞凋亡中的作用探究

目的探讨IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在2型糖尿病肾病患者足细胞凋亡中的作用及机制探究。方法采用免疫组织化学法完成两组肾脏组织中IQGAP1、p-ERK1/2、ERK1/2表达水平;采用SPSSPearson相关性分析软件分析IQGAP1与p-ERK1/2、ERK1/2表达及分布关系。结果实验组糖尿病肾病组织中IQGAP1阳性率低于对照组(P<0.05);实验组糖尿病肾病组织中p-ERK1/2、ERK1/2阳性率均高于对照组(P<0.05);免疫组化结果表明:实验组糖尿病肾病组织中足细胞裂隙变窄,足突缩小及伴有节段性融合,可见足细胞凋亡小体形成,IQGAP1分布在肾小球足细胞、系膜细胞、血管内皮细胞中;对照组肾脏组织中未见肾脏病变改变,IQGAP1表达水平较高;SPSSPearson相关性分析结果表明:实验组肾脏组织中IQGAP1与p-ERK1/2、ERK1/2蛋白阳性率呈正相关性(P<0.05)。结论IQGAP1在2型糖尿病肾病患者中呈低表达,且表达水平与p-ERK1/2、ERK1/2存在相关性,可能由于p-ERK1/2、ERK1/2能引起足细胞凋亡,从而引起大量蛋白尿,导致糖尿病肾病的发生。

抵当陷胸汤调控PI3K/Akt信号通路对糖尿病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:观察抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调控作用与对足细胞凋亡的影响,探讨抵当陷胸汤改善糖尿病肾病的机制。方法:采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液55 mg·kg^(-1)的方法建立糖尿病模型,将模型复制成功的30只随机分为模型组、抵当陷胸汤组(8.10 g·kg^(-1))、小陷胸汤组(4.05 g·kg^(-1))、抵当汤组(4.05 g·kg^(-1))、阿拉氯胺(ALT-711)组(3 mg·kg^(-1)),每组6只,另设6只空白组大鼠。连续给药8周后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态变化;马松(Masson)染色观察胶原沉积程度;高碘酸-席夫(PAS)染色观察基底膜病变;免疫组化法检测大鼠肾组织磷酸化(p)-PI3K、p-Akt蛋白表达;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠足细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织PI3K、Akt mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾小球代偿性膨胀,系膜细胞增殖,系膜间质大量胶原沉积,基底膜增厚,PI3K、Akt mRNA表达减少,PI3K、Akt蛋白磷酸化显著受到抑制(P<0.01),足细胞凋亡率显著升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,抵当陷胸汤组肾脏组织病理明显改善,PI3K、Akt mRNA表达显著升高(P<0.01),PI3K、Akt蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著升高(P<0.01),Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著降低(P<0.01),足细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:抵当陷胸汤可能通过促进PI3K/Akt信号通路活化,抑制足细胞凋亡,减缓糖尿病肾病的发展进程。

基于PERK/ATF4/CHOP途径探讨当归补血汤含药血清抑制糖尿病肾病内质网应激改善足细胞凋亡的机制

目的:观察当归补血汤对高糖刺激小鼠永生化足细胞MPC5内质网应激通路蛋白激酶样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的影响,通过体外研究阐明当归补血汤调控糖尿病肾病(DKD)足细胞凋亡的具体机制及靶点。方法:制备好含药血清、筛选好最适干预浓度后,将小鼠永生化足细胞MPC5分为5组:正常组(NG)、高糖组(HG)、空白血清组(KB)、当归补血汤含药血清组(DBT)、ERS抑制剂组(4-PBA)。NG组中足细胞用含5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖的完全培养基培养;HG组中足细胞用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖的完全培养基培养;KB组即HG组+10%空白血清;DBT组即HG组+10%当归补血汤含药血清;4-PBA组即HG组+4-PBA(2.5 mmol·L^(-1))。各组予对应药物进行干预刺激,作用48 h,然后将细胞收集。原位末端标记法(TUNEL)测细胞DNA损伤,免疫荧光检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化(p)-PERK、ATF4、CHOP、足细胞膜蛋白(Podocin)、突触足蛋白(Synaptopodin)表达,同时提取足细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GRP78、PERK、p-PERK、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、ATF4、CHOP、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:与正常组比较,高糖组GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP荧光强度显著增加,Podocin、Synaptopodin荧光强度减弱,足细胞TUNEL荧光阳性细胞核明显增多,GRP78、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著上升,Bcl-2表达显著下降(P<0.01)。与高糖组比较,当归补血汤含药血清组及ERS抑制剂组GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP的荧光强度明显减弱,Podocin、Synaptopodin荧光表达增强,TUNEL阳性染色细胞核的数量明显减少,细胞核损伤减轻,GRP78、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著下调,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01)。高糖组和空白血清组以上结果比较差异无统计学意义。结论:当归补血汤含药血清可通过拮抗PERK/ATF4/CHOP信号通路的活化实现对足细胞凋亡的抑制,保护足细胞。

基于mTOR/p70S6K/4EBP1通路探讨白花丹素对糖尿病肾病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:探究白花丹素对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)通路的影响。方法:SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、雷帕霉素2 mg/kg组、白花丹素50、100 mg/kg组、白花丹素100 mg/kg+自噬抑制剂2 mg/kg组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素腹腔注射的方法建立DN大鼠模型,造模成功后,各组给予相应药物处理,1次/d,连续给药8 w。每日观察大鼠的一般状态,并比较给药前后大鼠的体质量变化;检测大鼠24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)含量,并检测空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量;过碘酸雪夫染色观察肾组织病理学变化;免疫组织化学法检测足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、肾母细胞瘤基因1(WT-1)的表达;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;蛋白印迹法检测肾脏组织凋亡、自噬和mTOR/p70S6K/4EBP1通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的一般状态较差,出现肾小球基底膜增厚、系膜基质增多等肾脏病理损伤以及肾小球足细胞足突倒伏、足突相互融合、部分足突消失,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)蛋白和mTOR(p-mTOR)/mTOR、p70S6K(p-P70S6K)/P70S6K、4EBP1(p-4EBP1)/4EBP1蛋白比值明显升高(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、自噬相关基因12(Atg12)蛋白和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,白花丹素50、100 mg/kg组大鼠的一般状态、肾脏病理和肾小球足细胞损伤明显改善,24 h U-mAlb、FBG、Scr、BUN含量、肾组织Caspase-3、BAX蛋白、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/p70S6K、p-4EBP1/4EBP1蛋白比值明显降低(P<0.05),肾组织Nephrin、WT-1、BCL-2、Atg12蛋白、LC3-II/LC3-Ⅰ蛋白比值明显升高(P<0.05);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤能减弱白花丹素100 mg/kg对DN大鼠的改善作用(P<0.05)。结论:白花丹素可能通过抑制mTOR/P70S6K/4EBP1信号通路,激活自噬,抑制足细胞凋亡,进而减轻DN大鼠肾脏损伤。

巨噬细胞在糖尿病肾病足细胞凋亡中的作用

巨噬细胞是浸润糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的主要免疫细胞,其介导的炎症反应在DN的发生发展中起到不可或缺的作用。足细胞损伤在DN的病理机制中起关键作用,其中,足细胞凋亡是DN发生发展的中心事件。近年来不断有研究指出,巨噬细胞M1表型释放促炎细胞因子介导足细胞凋亡,而M2表型对足细胞起到保护作用,一定程度上有助于修复足细胞损伤,避免足细胞凋亡。本综述从DN中足细胞凋亡、DN与巨噬细胞、巨噬细胞调节足细胞凋亡的角度探讨DN的治疗新思路,发现抑制M1表型活化、促进M2表型转化可减少足细胞凋亡,靶向巨噬细胞疗法可能是抑制DN进展的新疗法。