保肾通络方含药血清对高糖培养足细胞Nephrin、 Desmin蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞肾病蛋白(Nephrin)、结蛋白(Desmin)表达及细胞凋亡的影响。方法:细胞实验分为正常对照组、模型组和保肾通络方低、中、高剂量组。正常对照组足细胞予DMEM低糖培养基培养,模型组和保肾通络方不同剂量组予含有30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基培养。保肾通络方不同剂量组足细胞在高糖培养基中分别加入保肾通络方含药血清低、中、高剂量进行干预,正常对照组及模型组加入等剂量空白血清。CCK-8法检测足细胞的细胞活性,免疫荧光及RT-PCR检测足细胞Nephrin、Desmin蛋白及mRNA表达水平,免疫荧光检测足细胞凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果:与正常对照组比较,模型组足细胞的细胞活性明显降低,Nephrin蛋白表达明显下调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显上调,足细胞凋亡细胞数目明显增加(均P<0.05)。与模型组比较,保肾通络方低、中、高剂量组足细胞的细胞活性明显升高,Nephrin蛋白表达明显上调,Desmin、Caspase-3蛋白表达明显下调,足细胞凋亡数目明显减少(均P<0.05)。结论:保肾通络方可能通过上调足细胞Nephrin蛋白表达,下调Desmin蛋白表达,抑制足细胞凋亡,进而减轻足细胞损伤。

加减黄风汤对IgA肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的观察加减黄风汤对IgA肾病大鼠尿蛋白、血生化指标以及足细胞nephrin表达的影响。方法建立IgA肾病大鼠模型,将实验大鼠随机分为正常组、模型组、雷公藤对照组、加减黄风汤低剂量组、加减黄风汤高剂量组。第17周末检测各组大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮以及肾组织nephrin蛋白以及mRNA表达水平。结果与正常组比较,其余4组尿蛋白量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);第17周末雷公藤对照组、治疗组在给药后较模型组尿蛋白明显减少差异具有统计学意义(P<0.05);与正常组比较,模型组、对照组、治疗组肾组织内nephrin蛋白以及mRNA均明显减少,差别具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,对照组、治疗组肾组织内nephrin蛋白以及mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论加减黄风汤能减少IgA肾病模型大鼠尿蛋白,其机制可能与通过上调足细胞nephrin表达、减轻足细胞损伤有关。

坎地沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin和CD2AP表达的影响

目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞相关分子Nephrin、Podocin及CD2AP表达的变化,以及坎地沙坦对其的干预作用,为DN的防治提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组:A组为正常对照组,B组为DN组,C组为DN+坎地沙坦组。用药后第4周和第7周检测各组大鼠的血糖(GLU)、体重、24h尿蛋白(proteinuria)和内生肌酐清除率(Ccr),于第7周予RT-PCR法检测大鼠肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA表达。结果 7周后,与A组比较,B组出现尿蛋白排泄增多,Ccr下降(P<0.05),肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA水平均下调(均P<0.05);与B组比较,C组尿蛋白排泄量降低(P<0.05),Ccr升高(P<0.05),Nephrin、Podocin及CD2AP mR-NA水平均增加(均P<0.05)。采用直线相关分析后发现,尿蛋白与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈正相关。结论 DN时存在足细胞分子Nephrin、Podo-cin及CD2AP表达异常,坎地沙坦对肾脏的保护作用机制可能是通过增加Nephrin、Podocin及CD2AP表达而实现。

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin与podocin表达的影响

目的观察左归降糖益肾方对MKR转基因2型糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响,探讨其作用机制。方法 8周龄MKR小鼠40只随机分为4组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN+中药组(C组)、DN+糖适平+贝那普利组(D组)。B、C、D组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术4周后,各给药组给予相应药物,4周后处死小鼠。电化学法观察小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),ELISA法测定尿微量白蛋白(UmAlb),RT-PCR法检测nephrin、podocin mRNA表达,Western Blotting法测定nephrin、podocin蛋白表达,电镜观测足细胞形态结构。结果与A组比较,B组小鼠空腹血糖、SCr、BUN及UmAlb均明显升高(P<0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01)。给药后,与B组比较,用药组小鼠血糖、SCr、BUN及UmAlb明显下降(P<0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01,P<0.05)。电镜结果显示,给药组小鼠肾小球足细胞较B组明显改善。结论左归降糖益肾方通过恢复2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin和podocin的表达而保护肾脏。

水蛭素对特发性膜性肾病足细胞nephrin的影响

特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是一种以肾小球基底膜(GBM)上皮细胞下弥漫的免疫复合物沉积,伴GBM弥漫性增厚为病理特点的原发性肾小球疾病。随着足细胞相关致病抗原的陆续发现,目前普遍认为IMN是一种自身免疫性足细胞病,因此,探索足细胞保护途径对于IMN具有十分重要的意义。nephrin是由足细胞合成,同时又具有维持足细胞的正常形态和功能的一种跨膜蛋白,其对于稳定足细胞功能意义重大。目前对于足细胞保护的中西医药物临床上各有利弊,故我们需要寻找是否还存在其他中药能够防止IMN nephrin表达下降、保护足细胞功能。水蛭素临床上长期运用与特发性膜性肾病治疗,其作用机制是多途径的。鉴于IMN蛋白尿、肾脏损害的最根本机制是足细胞损伤,而水蛭素对IMN是否具有稳定nephrin表达、保护足细胞功能却没有更深的研究。进一步深入研究水蛭素是否存在调节nephrin表达,保护足细胞功能,将为水蛭素治疗IMN提供重要的理论和实践依据。

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P<0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的:观察nephrin在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小球足细胞中的表达,探讨厄贝沙坦对DN肾脏保护作用的机制。方法:应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组:厄贝沙坦治疗组、模型对照组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察大鼠体重、肾重、相对肾重、24h尿蛋白定量、血糖、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯变化,利用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组化技术观察nephrin表达情况。结果:应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量明显减少、肾功能改善、肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin表达量明显减少。结论:厄贝沙坦对DN肾脏的保护作用可能与其抑制足细胞nephrin表达有关。

普罗布考对阿霉素肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的研究普罗布考对阿霉素大鼠足细胞相关分子nephrin及podocin表达的影响。方法将36只SD大鼠分为正常对照组(12只)、肾病模型组(12只)和普罗布考干预模型组(12只),采用鼠尾静脉注射阿霉素的方法建立阿霉素大鼠肾病模型。4周末检测各组大鼠24 h尿蛋白定量,光镜下观察肾脏病理学改变,Western blot技术检测nephrin及podocin的表达。结果肾病模型组和普罗布考干预组24 h尿蛋白定量均高于正常对照组(P<0.05),但普罗布考干预组24 h尿蛋白定量低于肾病模型组(P<0.05)。肾病模型组和普罗布考干预组肾小球nephrin、podocin的表达均低于正常对照组(P<0.05),且普罗布考干预组高于肾病模型组(P<0.05)。结论普罗布考可能通过减轻足细胞损伤实现对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用。

人参皂苷Rg1对多柔比星肾病大鼠足细胞nephrin的影响

目的足细胞的损伤是蛋白尿发生的主要机制,如何修复受损的足细胞已成为研究热点。文中观察人参皂苷Rg1对足细胞病变模型———多柔比星肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法采用单次尾静脉注射盐酸多柔比星建立多柔比星肾病模型。SD大鼠分为空白对照组、模型组、人参皂苷Rg1高剂量组和低剂量组,分别在注射后第7、14、28天收集尿液标本,并处死大鼠,留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白排泄量、血生化指标,行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结果。采用定量学方法测定足突宽度。免疫组化观察足细胞裂孔膜分子nephrin表达和分布变化。结果人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组均能改善多柔比星肾病大鼠的肾病综合征状况。同时,人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组能明显改善足突融合,增加足细胞裂孔膜分子nephrin表达(P<0.05)。人参皂苷Rg1高剂量组在血生化、肾脏病理和足细胞nephrin的表达上比人参皂苷Rg1低剂量组的改善更加明显(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对多柔比星肾病模型有很好的保护作用,而且人参皂苷Rg1高剂量组比低剂量组治疗作用更明显。

槲皮素对糖尿病大鼠肾脏足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的探讨槲皮素对糖尿病大鼠肾脏足细胞nephrin和podocin表达的影响。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法构建糖尿病大鼠模型,分为正常对照组、糖尿病模型组、槲皮素给药组。12周后测定肾脏指数、血肌酐、尿素水平及24h尿中总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素水平;Western blot方法检测肾皮质nephrin和podocin的蛋白表达。结果槲皮素给药组肾脏指数、血肌酐和尿素水平低于糖尿病模型组;槲皮素给药组尿中总蛋白、白蛋白水平明显低于糖尿病组,尿中肌酐、尿素水平高于糖尿病组。槲皮素给药组肾皮质nephrin和podocin的蛋白表达水平明显高于糖尿病模型组。结论槲皮素对糖尿病大鼠肾脏功能具有保护作用,槲皮素可能是通过增强足细胞nephrin和podocin表达发挥肾脏保护作用。

芡实含药血清对高糖干预小鼠肾小球足细胞nephrin与α-SMA的影响

目的:观察不同剂量芡实含药血清对高糖干预肾小球足细胞nephrin及α-SMA表达的影响,探讨芡实含药血清对足细胞的可能保护机制。方法:以体外培养小鼠肾小球足细胞为研究对象,分别以芡实1.5 g·kg-1·d-1、3.0 g·kg-1·d-1及6.0 g·kg-1·d-1剂量给予大鼠灌胃7 d后,经腹主动脉取血离心制作含药血清;将细胞按以下分组进行干预:正常组、高糖组、贝那普利组、芡实低剂量组、芡实中剂量组、芡实高剂量组。足细胞37℃培养48 h,用免疫荧光法观察肾小球标志性蛋白(nephrin)及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达部位及表达量的变化;用荧光定量PCR法检测nephrin及α-SMA mRNA的表达。结果:(1)免疫荧光结果:nephrin荧光强度:高糖组与正常组相比荧光强度明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05),芡实中、高剂量组较高糖组相比,荧光强度增加,差异有统计学意义(P<0.05),但芡实低剂量组较高糖组相比差异无统计学意义(P>0.05);α-SMA荧光强度:高糖组与正常组相比荧光强度显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),芡实中、高剂量组较高糖组相比,荧光强度减弱,差异有统计学意义(P<0.05),但芡实低剂量组较高糖组相比差异无统计学意义(P>0.05);(2)荧光定量PCR结果:nephrin mRNA表达:高糖组与正常组相比mRNA表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),芡实中、高剂量组较高糖组相比,mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),芡实低剂量组较高糖组相比差异无统计学意义(P>0.05);α-SMA mRNA表达:高糖组与正常组相比mRNA表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),芡实中、高剂量组较高糖组相比,mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),芡实低剂量组较高糖组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芡实可能通过调节足细胞nephrin及α-SMA的表达,从而具有一定的足细胞保护作用,其具体机制有待于进一步研究。

水蛭素对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin表达的影响

目的:探究水蛭素对被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin表达的影响。方法:成功建立被动型Heymann肾炎模型,将实验动物分为空白对照组、模型安慰剂组、贝那普利组和水蛭素干预组,每组10只,实验观察周期为4周。于4周后观察大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血小板(PLT)的变化情况,且取出SD大鼠肾脏,采用RT-PCR法测定大鼠肾皮质中Nephrin m RNA的相对表达水平,Western印迹测定Nephrin蛋白的相对表达量,免疫组化法对Nephrin蛋白进行半定量分析。结果:与模型组相比,贝那普利组在Nephrin m RNA和Nephrin蛋白方面差异无统计学意义(P>0.05),但水蛭素干预后可增加Nephrin m RNA和Nephrin蛋白的表达(P<0.05)。相比于贝那普利组,水蛭素组可增加Nephrin m RNA的表达,但在Nephrin蛋白方面差异无统计学意义。免疫组化半定量分析:空白组Nephrin蛋白的表达量最高,贝那普利组、水蛭素组的Nephrin蛋白表达量强于模型组,水蛭素组大鼠肾脏Nephrin蛋白的表达量高于贝那普利组,其差异均有统计学意义(P<0.01)。生化指标显示:与正常组比较,贝那普利组和水蛭素组的24 h尿蛋白、PLT升高,模型组、贝那普利组和水蛭素组Scr显著降低;与模型组比较,贝那普利组的Scr、ALT降低;与贝那普利组比较,水蛭素组Scr偏高。结论:水蛭素可上调被动型Heymann肾炎模型大鼠足细胞Nephrin m RNA和蛋白的表达。

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Nephrin和Desmin表达的影响

目的模拟体外高糖病理微环境,探讨黄芪多糖对实验鼠肾脏肾小球足细胞Nephrin及Desmin表达的影响.方法试验(1):将培养的实验鼠肾脏肾小球足细胞分为5个组,分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖干预组(0.0 g/L,0.1 g/L,0.2 g/L,0.4 g/L及0.8 g/L);干预时间为72 h,筛选出黄芪多糖干预的最佳浓度点0.Z g/L.试验(2):将培养的实验鼠肾脏肾小球的足细胞分7个组,分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖的干预(干预浓度是0.Z g/L),干预的时间分别是0 h,3 h,6 h,12 h,24 h,48 h及72 h;筛选出干预的最佳时间点Y h.试验(3):根据上述试验(1)、(2)结果,将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组(黄芪多糖的干预浓度是0.Z g/L,干预的时间是Y h),采用流式细胞术与实时聚合酶链反应(real-Time Polymerase Chain Reaction,real-Time PCR)分别检测七组足细胞Nephrin、Desmin蛋白与m RNA的表达.结果随着黄芪多糖干预梯度浓度的递增,实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin蛋白表达逐渐上调,Desmin蛋白表达逐渐下调,呈浓度依赖性(P<0.05);随着黄芪多糖干预时间的延长,实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin的表达逐渐上调,但肾小球的足细胞Desmin的表达逐渐下调,呈时间依赖性.相比正常对照组和甘露醇高渗对照组,高糖组小鼠肾小球足细胞Nephrin蛋白和m RNA表达均下降,Desmin蛋白和m RNA表达均增加(P<<0.05);而相较高糖组,黄芪多糖干预组Nephrin蛋白和m RNA表达明显上升,Desmin蛋白和m RNA表达明显降低(P<0.05).结论在高糖刺激下,黄芪多糖干预可上调肾小球足细胞Nephrin表达,降低肾小球足细胞Desmin表达,是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点.

肾素抑制剂阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾损伤及足细胞nephrin表达的影响

目的观察肾素抑制剂阿利吉仑对阿霉素肾病小鼠肾损伤的保护作用及对足细胞nephrin表达的影响。方法通过尾静脉注射阿霉素建立小鼠阿霉素肾病模型后给予阿利吉仑,另设正常对照组及阿霉素肾病对照组;比较不同组别尿蛋白及肾功能的差异;肾组织石蜡切片行PAS、HE和Masson染色,观察各组肾小球硬化程度和肾小管损害程度。RT-PCR及Western blot检测各组nephrin的表达。结果阿霉素肾病小鼠表现为蛋白尿、低蛋白血症并伴有进行性肾功能下降,病理表现为肾小球硬化及小管间质损害;阿利吉仑可使蛋白尿状况显著改善,血清白蛋白上升,肾功能恶化得以延缓(P<0.05),肾小球硬化和小管间质损害程度明显改善(P<0.05)。阿霉素肾病小鼠nephrin mRNA及蛋白表达水平均显著低于正常对照组,给予阿利吉仑干预后nephrin mRNA及蛋白表达水平有显著上升(P<0.05)。结论阿利吉仑对小鼠阿霉素肾病有良好的保护作用,该作用至少部分与其上调肾小球足细胞nephrin的表达有关。

补肾活血方对阿霉素肾病小鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的观察补肾活血方治疗对阿霉素(ADR)诱导的阿霉素肾病小鼠肾小球足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,并探讨其作用机制。方法用ADR诱导产生局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)肾病模型,1周后用补肾活血方治疗(治疗组),持续6周。并设空白对照组、模型组。收集各组血、尿及肾组织,检测其体质量、右肾质量、血清白蛋白(ALB)、尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)。光镜观察肾组织形态改变;免疫荧光测定小鼠肾小球足细胞nephrin的表达;RT-PCR检测各组肾组织nephrin mRNA的表达。结果模型组UACR显著高于对照组与治疗组,体质量和ALB显著低于对照组和治疗组(均P<0.01);对照组肾小球足细胞nephrin免疫荧光呈连续性表达,治疗组呈轻微缺失,模型组呈少量点状或片状表达,较对照组和治疗组表达强度明显减少。模型组nephrin mRNA表达水平均显著低于对照组和治疗组(P<0.01)。结论补肾活血方能减少阿霉素肾病小鼠的蛋白尿,可能与改善肾小球足细胞nephrin的表达减少有关。

雷公藤内酯醇干预高糖影响小鼠肾脏足细胞Nephrin蛋白表达的研究

目的:通过观察雷公藤内酯醇(triptolide,TP)及对照药物缬沙坦(valsartan,Val)干预高糖环境培养的足细胞肾小球足细胞裂孔隔膜(GPSD)核心蛋白nephrin的表达,来深入探讨雷公藤治疗糖尿病肾病(DN)蛋白尿的分子生物学机制。方法:(1)将培养成熟的足细胞分为对照组1、对照组2、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组(干预组均设低、中、高3个剂量),培养24h后以RT-PCR法检测各组足细胞nephrin mRNA的表达。(2)将培养成熟的足细胞设为对照组、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组,培养24h后行间接免疫荧光法检测nephrin蛋白的表达。结果:(1)与模型组相比,不同剂量TP和Val组均能提高nephrin mRNA表达(P<0.05),并且中剂量TP组和高剂量Val组效果最好(P<0.05)。(2)与对照组相比,间接免疫荧光法可见模型组nephrin表达下降。经TP和Val干预24h后,TP和Val组足细胞nephrin蛋白的表达均有一定程度提高。结论:雷公藤内酯醇和缬沙坦均能上调高糖诱导的足细胞nephrin的表达下降,这可能是雷公藤及缬沙坦在临床上有效治疗DN蛋白尿的机制之一。

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的:探讨柴芩肾安方对IgA肾病(IgAN)大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法:通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量(Upr),观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高(P<0.01),肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调(P<0.01)。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。

MiR-30c-2-3p对足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素干预作用研究

目的:探讨miR-30c-2-3p对小鼠足细胞Nephrin、Podocin保护作用及雷公藤甲素(TP)干预作用。方法:采用嘌呤霉素(PAN)致小鼠足细胞损伤的体外模型,将足细胞分成5组:空白组、转染阴性质粒组(阴性质粒组)、转染阴性质粒+PAN组(阴性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN组(阳性质粒+PAN组)、转染miR-30c-2-3p+PAN+TP组(阳性质粒+PAN+TP组)。瞬时转染miR-30c-2-3p mimics,质粒终浓度均为50 nmol/L,转染6 h后进行药物干预,PAN干预浓度均为45 mg/L,TP干预浓度均为1 ng/ml,药物干预时间均为48 h。CCK-8法检测足细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-30c-2-3p表达;Western Blot检测足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达。结果:(1)阴性质粒+PAN组足细胞活力明显低于空白组及阴性质粒组(P<0.01),阳性质粒+PAN组较阴性质粒+PAN组足细胞活力提高(P<0.05),使用TP干预后其活力进一步提高(P<0.05)。(2)与空白组、阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组miR-30c-2-3p表达减少,差异有统计学意义(P<0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组、阳性质粒+PAN+TP组miR-30c-2-3p表达均增加(P<0.05);但与阳性质粒+PAN组相比,雷公藤甲素干预组未见统计学意义(P>0.05)。(3)与空白组及阴性质粒组比较,阴性质粒+PAN组Nephrin、Podocin两者表达均减少,差异有统计学意义(P<0.01);与阴性质粒+PAN组相比,阳性质粒+PAN组Nephrin、Podocin蛋白表达增加(P<0.05);在使用了TP干预后两者表达进一步增加(P<0.05)。结论:PAN能降低足细胞活力,降低miR-30c-2-3p表达,而增加其表达可以上调足细胞活力以及Nephrin、Podocin的表达。TP可以减轻PAN诱导的足细胞损伤以及Nephrin、Podocin的表达下降,但其作用机制似乎与miR-30c-2-3p无关。

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的观察温阳活血利水法治疗微小病变肾病综合征的疗效，并观察对足细胞nephrin表达的影响，以探讨其作用机制。方法用阿霉素（ADR）诱导一种类似人类微小病变肾病模型，一周后用温阳活血方（治疗组）治疗，持续4周。并设空白对照组（正常组）、病理对照组（造模组）。观察实验大鼠的一般情况；检测大鼠24小时尿蛋白定量；检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的水平；采用RT-PCR和免疫荧光染色测定大鼠肾小球Nephrin的mRNA和蛋白表达水平；光学显微镜观察肾组织形态学变化；电镜下观察足细胞足突的变化。结果模型组24小时尿蛋白定量明显升高（P〈0．01），血清总蛋白、白蛋白明显降低（P〈0．01），血清脂质水平升高（P〈0．01），NephrinmRNA与蛋白表达明显减少，足突融合明显。两个治疗组均能降低24小时尿蛋白定量，升高血清总蛋白、白蛋白水平（P〈0．01）。温阳活血利水方能降低血清脂质水平（P〈0．01）。两个治疗组均能改善肾组织中NephrinmRNA与蛋白的表达的减少，改善其肾组织的病理改变。结论温阳活血利水方减少蛋白尿，可能与改善阿霉素肾病大鼠肾小球Nephrin的表达减少有关。