ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α对MCF-7细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)在ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α诱导MCF-7细胞凋亡过程中的作用。方法带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNF-α表达载体转染MCF-7细胞,经ω-3脂肪酸处理后,MTT比色法检测细胞增殖能力,DNA梯形带分析ω-3脂肪酸对细胞凋亡的影响,RT-PCR和W estern b lot方法检测细胞caspase-1、8和9基因的表达变化,应用caspase特异性底物检测肿瘤细胞caspase-8活性变化,观察caspase特异性抑制剂Ac-IETD-CHO对ω-3脂肪酸联合细胞外源性跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的拮抗作用。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7转染细胞经ω-3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,检测到明显的DNA梯形带,caspase-1、8、9基因表达增加,caspase-8活性增高,caspase抑制剂可以部分拮抗ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的发生。结论ω-3脂肪酸联合跨膜型TNF-α可以更有效地诱导MCF-7细胞凋亡,而上调caspase的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。

Caspases在ω-3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的 探讨ω3脂肪酸联合跨膜型TNFα诱导HL 6 0细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶(Caspases)之间的关系。方法 已证实转染带有脂肪酸受体反应元件的跨膜型TNFα表达载体(pPPRE tmTNFα)后,HL 6 0细胞可在ω3脂肪酸诱导下高效表达跨膜型TNFα。运用MTT比色法、DNA梯形带检测、RT PCR和免疫印迹技术分析ω3脂肪酸对转染细胞增殖能力和凋亡的影响,以及细胞Caspase 1、3、8和9基因的表达变化,检测Caspase 8活性以及Caspases特异性抑制剂对肿瘤细胞凋亡效应的拮抗作用。结果 HL 6 0细胞经ω3脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,可检测到DNA梯形带形成,Caspase 1、3、8和9基因表达增加,Caspase 8活性增高,上述变化在转染细胞中更为显著,Caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸联合跨膜型TNFα对HL 6 0诱导凋亡和抑制增殖的作用。结论 ω3脂肪酸可以联合跨膜型TNFα更有效的诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖,而上调Caspases的表达和 或活性可能在此过程中发挥重要作用。

ω-3PUFA及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞生长的影响

目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将ω-3PUFA可调控的跨膜型TNFα真核表达载体转导入HL-60和MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学方法检测ω-3PUFA对转染细胞外源基因表达的调控,生长曲线、流式细胞和DNA梯形带分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。结果:在6.0×10-5mol/Lω-3PUFA诱导下转染细胞外源性跨膜型TNFα表达增加。HL-60和MCF-7细胞经6.0×10-5mol/Lω-3PUFA处理后增殖能力减弱,但只有HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期及形成DNA梯形带。经ω-3PUFA处理后,以上变化在HL-60和MCF-7转染细胞中均更为显著。结论:ω-3PUFA诱导的外源性跨膜型TNFα基因产物可以增强ω-3多不饱和脂肪酸的抗肿瘤能力,而诱导细胞凋亡可能是其中重要机制之一。

两型TNF-α对单核细胞系U937细胞功能的影响

目的 :比较两型TNF α对单核细胞系U937细胞功能的影响 ,以探讨跨膜型TNF α在炎症中的作用。方法 :通过吞噬、RT PCR、Westernblot及FACS等方法 ,比较两型TNF α对U937细胞生物学功能 (包括吞噬、细胞因子mRNA、胞质IκB α及ICAM 1表达等 )的影响。结果 :分泌型TNF α可明显促进U937细胞吞噬功能 ,使TNF α、IL 1β及IL 8mRNA积累增加 ,促进胞质IκB α降解及提高黏附分子ICAM 1的表达 ;而跨膜型TNF α对上述U937细胞的生物学功能则无明显影响。当二者联用时 ,跨膜型TNF α与分泌型TNF α亦无协同作用。结论 :分泌型TNF α对U937细胞具有明显地激活作用 ;而跨膜型TNF α则无影响 ,提示两型TNF α在炎症过程中的作用不同。

稳定转染TNFα及其突变体的骨肉瘤细胞生物学功能的研究

目的建立转染2种TNFα基因(野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体)的MG63细胞株,研究所转染细胞的TNFα的生物学效应。方法采用逆转录病毒载体,将2种TNFα基因导入人骨肉瘤细胞MG63中,采用流式细胞术、ELISA和生物学活性检测等方法从蛋白表达及其生物学活性2个方面对转染细胞进行检测鉴定。结果野生型TNFα和跨膜型TNFα突变体分别在MG63细胞中得到有效表达,并具有生物学活性。结论获得2种稳定表达TNFα的人骨肉瘤细胞株,为进一步研究TNFα的各种生物学行为和探索骨肿瘤的基因治疗奠定基础。