尼氟灭酸抑制跨膜蛋白16A参与高肺血流量诱导的肺动脉高压的机制研究

目的:探讨钙激活的氯离子通道(CaCCs)抑制剂尼氟灭酸(NFA)和跨膜蛋白16A(TMEM16A)在高肺血流量诱导的肺动脉高压(PAH)中的作用及机制。方法:将40只SD大鼠随机分为normal组、sham组、model组及model+NFA组,sham组使用血管夹夹闭腹主动脉15 min,model组采用腹主动脉—下腔静脉造瘘术建立左向右分流型PAH模型,model+NFA组在造瘘术后予NFA进行每日灌胃;饲养12周后,检测大鼠平均肺动脉压、肺动脉血管张力,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测各组肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)TMEM16A的表达。结果:model组和model+NFA组大鼠肺动脉环收缩率及TMEM16A m RNA和蛋白表达水平显著高于normal组(P<0.05)。与model组比较,model+NFA组大鼠TMEM16A mRNA和蛋白表达水平降低,肺动脉环收缩率下降(P<0.05)。结论:高肺血流量诱导的PAH与TMEM16A高表达有关,NFA可以降低肺动脉血管张力,抑制TMEM16A的过表达。

跨膜蛋白16A及其抑制剂的研究进展

跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种具有电压依赖性的钙激活氯离子通道,广泛表达于癌细胞中。在多种癌症中,TMEM16A不仅可以调控癌细胞的增殖、侵袭和转移,还与癌症治疗的预后相关。近年来,TMEM16A以及TMEM16A抑制剂在癌症领域的相关研究不断深入。本文总结了近10年来的相关研究,旨在为今后TMEM16A抑制剂在癌症治疗中的临床应用提供新的治疗策略。

钙激活氯通道跨膜蛋白16A在肿瘤诊断与治疗中的桥梁作用

钙激活氯通道(Ca^(2+)activated chloride channels,CaCCs)首次发现于非洲爪蟾卵母细胞中^([1])。跨膜蛋白16A(Transmembrane protein 16A,简称TMEM16A),也被称为ANO1、DOG1、TAOS2及ORAOV2,作为CaCCs的分子身份于2008年被三个科研团队揭示^([2-4])。钙激活氯通道TMEM16A受膜电压、细胞内钙浓度和细胞外渗透性阴离子调控^([5])。生理条件下,TMEM16A在上皮细胞的液体分泌、胃肠道平滑肌收缩及神经元兴奋与膜电位调节等方面发挥重要的生理功能^([6-7])。在疾病状况下,如恶性肿瘤、高血压、囊性纤维化及脑中风,TMEM16A表达发生异常改变^([6-9])。

miR-9靶向调控跨膜蛋白16A基因对胶质瘤T98G细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨mi R-9和跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)基因在胶质瘤T98G细胞中的表达,阐明mi R-9对TMEM16A基因的靶向作用及其对T98G细胞增殖和侵袭的影响。方法运用生物信息学方法对mi R-9和TMEM16A基因的靶向配对关系进行预测,采用荧光素酶报告系统鉴定;脂质体2000转染mi R-9模拟物及干扰RNA后,Real-time PCR检测mi R-9与TMEM16A m RNA在癌细胞中的表达,Western blot检测TMEM16A蛋白在癌细胞中的表达,平板克隆形成实验检测癌细胞的增殖情况以及Transwell小室检测癌细胞体外的侵袭性。结果生物信息学软件Target Scan和mi Randa显示mi R-9与TMEM16A基因靶向配对良好,荧光素酶报告系统鉴定发现mi R-9能够抑制TMEM16A m RNA表达。Real-time PCR和Western blot检测结果均表明过表达mi R-9能够降低TMEM16A m RNA和蛋白的表达。平板克隆形成实验和Transwell实验发现过表达mi R-9能够分别抑制T98G细胞的增殖和侵袭。结论 mi R-9通过负性调控胶质瘤T98G细胞中TMEM16A基因的表达抑制癌细胞的增殖和侵袭。

跨膜蛋白16A对胚胎着床和子宫内膜容受性的影响

目的研究跨膜蛋白16A(TMEM16A)对子宫内膜容受性和胚胎着床的影响。方法体外培养子宫内膜Ishikawa细胞系,分为空白对照组、E_2+P_4组、抑制剂组和E_2+P_4+抑制剂组。分别加药处理后,采用实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫印记试验(Western blot)技术检测各组TMEM16A、白血病抑制因子(LIF)和整合素αvβ3mRNA和蛋白的表达水平。采用体外细胞粘附实验检测E_2+P_4组和E_2+P_4+T16Ainh-A01组Ishikawa细胞与人绒毛膜滋养细胞HTR8-SVneo之间的粘附作用。结果 qRT-PCR和Western blot结果显示,E_2+P_4组的TMEM16A、LIF和整合素αvβ3mRNA和蛋白的表达水平最高,在加入T16Ainh-A01后3个基因的表达水平均显著降低(P<0.01),但均显著高于空白对照组(P<0.01);各组TMEM16A、LIF和整合素αvβ3表达水平均与空白对照组存在显著差异(P<0.01)。细胞粘附实验结果显示,E_2+P_4+抑制剂组中Ishikawa细胞与HTR8-SVneo细胞的粘附作用显著小于E_2+P_4组(P<0.05)。结论抑制TMEM16A的表达降低着床期LIF和整合素αvβ3的表达,可能影响子宫内膜容受性;抑制TMEM16A可降低子宫内膜细胞与滋养层细胞之间的粘附作用,可能导致胚胎着床失败。

跨膜蛋白16A在功能性便秘小鼠结肠中的表达及其参与调控便秘的相关机制研究

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在功能性便秘小鼠结肠中的表达情况及其相关调控机制。方法取20只C57BL/6小鼠,分为构建功能性便秘模型小鼠(实验组)和正常小鼠(对照组),两组各10只。采用生物机能测定仪对两组小鼠结肠肌电改变进行检测,并分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测两组小鼠结肠中TMEM16A、钙离子转运ATP酶B2(ATP2B2)蛋白和基因表达情况。结果肌电生理检测发现,实验组小鼠结肠平滑肌的肌电慢波频率较对照组明显下降(5.36±1.17次/min vs.10.75±2.24次/min),慢波振幅较对照组明显升高(105.76±9.43V vs.66.90±5.64V)(P<0.01)。免疫印迹法检测发现,实验组小鼠TMEM16A蛋白表达水平较对照组明显降低(0.35±0.09 vs.1.03±0.15),ATP2B2蛋白表达水平较对照组明显升高(1.41±0.18 vs.0.99±0.11)(P<0.01)。实时荧光定量聚合酶链式反应检测发现,实验组小鼠TMEM16A基因相对表达量较对照组明显降低(0.46±0.06 vs.1.00±0.13),ATP2B2基因相对表达量较对照组明显升高(1.51±0.17vs.1.01±0.09)(P<0.01)。结论TMEM16A表达下调可能与功能性便秘小鼠结肠收缩功能减弱有关,TMEM16A可能通过调节ATP2B2表达而起到调控功能性便秘小鼠发病机制的作用,提示TMEM16A有望成为治疗功能性便秘的潜在靶点。

miR-144-3p靶向调控跨膜蛋白16A基因抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和侵袭实验

目的阐明骨肉瘤143B细胞中miR-144-3p与跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16,TMEM16A)的表达关系,明确miR-144-3p与143B细胞增殖和侵袭的关系。方法预测miR-144-3p和TMEM16A基因的互补配对关系,转染miR-144-3p模拟物后,Real-time PCR检测各组癌细胞中miR-144-3p和TMEM16A m RNA的相对表达水平,Western blot检测各组癌细胞中TMEM16A蛋白的相对表达,MTT法检测各组癌细胞的增殖,Transwell检测各组癌细胞体外的侵袭情况。结果 Target Scan和miRanda均显示miR-144-3p与TMEM16A基因互补配对较好。Real-time PCR和Western blot检测结果表明miR-144-3p的过表达能够降低TMEM16A m RNA和蛋白的相对表达水平。MTT法和Transwell实验发现miR-144-3p的过表达能够抑制143B细胞的增殖和侵袭。结论 miR-144-3p通过下调骨肉瘤143B细胞中TMEM16A的表达水平进而抑制癌细胞的增殖和侵袭。

下调跨膜蛋白16A对子宫肉瘤FU-MMT-1细胞增殖侵袭的影响及初探其机制

目的 通过研究下调跨膜蛋白16A(TMEM16A)对子宫肉瘤FU-MMT-1细胞增殖侵袭及患者生存率的影响,初步探究其抑制子宫肉瘤的作用机制。方法 将子宫肉瘤FU-MMT-1细胞分为对照组和敲减组。用细胞计数试剂盒-8法检测子宫肉瘤FU-MMT-1细胞增殖情况,用Transwell实验检测细胞侵袭能力。在The Cancer Genome Atlas(TCGA)大数据库中下载子宫肉瘤患者的基因数据,根据TMEM16A和转录因子κB(NF-κB)表达的中位值将患者分为高表达组和低表达组进行生存分析,用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞TMEM16A和p65蛋白的表达情况。结果 子宫肉瘤FU-MMT-1细胞对照组和敲减组的细胞增殖率分别为(100.00±0)%和(62.17±5.40)%;侵袭细胞数分别为(255±23)和(80±6)个。Kaplan-Meier生存分析显示:TMEM16A高表达子宫肉瘤患者预后生存期显著降低;NF-κB高表达子宫肉瘤患者预后生存期显著降低,TMEM16A与NF-κB共同高表达组总生存显著低于共同低表达组,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05);对照组和敲减组FU-MMT-1细胞核中p65蛋白相对表达水平分别为0.88±0.03和0.21±0.10,差异有统计学意义(P<0.05),细胞质中p65蛋白表达水平分别为0.40±0.05和0.80±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 下调TMEM16A影响p65蛋白表达抑制子宫肉瘤FU-MMT-1细胞的增殖和侵袭。

跨膜蛋白16A介导感染后肠易激综合征中白细胞介素-4对Cajal细胞损伤的机制

目的探讨感染后肠易激综合征（PI-IBS）中跨膜蛋白16A（TMEM16A）介导白细胞介素4（IL-4）在Cajal细胞（ICC）损伤中的作用及机制。方法将30只SD雄性大鼠随机分为模型组（n=15）及对照组（n=15）。模型组以2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）溶液灌肠，对照组以等量生理盐水灌肠，4周后取材。分别运用酶联免疫吸附试验（ELISA）法、免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及透射电镜检测各组大鼠IL4、TMEM16A的表达分布与ICC超微结构的相关改变。结果模型组结肠黏膜IL-4浓度[（2821．32±131．27）pg／g]较对照组[（2443．02±104．45）pg／g]明显上升（P〈0．01）。TMEM16A在PI—IBS模型大鼠结肠中的分布密度及表达水平上均低于对照组。PI—IBS组中，ICC出现超微结构损伤，与周围细胞缝隙连接减少。结论IL-4可能通过影响TMEM16A的表达分布造成ICC结构功能损伤，进而导致PI—IBS中胃肠动力的改变。

跨膜蛋白16A在人正常月经周期子宫内膜表达的初步研究

目的:研究跨膜蛋白16A(TMEM16A)在人正常月经周期子宫内膜的表达变化。方法:收集人正常月经周期增殖期及分泌期的子宫内膜,共48例。采用免疫组织化学染色法检测TMEM16A蛋白的定位表达,实时荧光定量PCR测定TMEM16A mRNA表达水平,Western Blot法测定TMEM16A蛋白表达水平。结果:TMEM16A蛋白主要表达于分泌中晚期子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞;与增殖期相比,分泌期子宫内膜中TMEM16A mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:TMEM16A在人正常月经周期不同时期子宫内膜存在差异性表达,其可能受到卵巢雌孕激素的调节,并参与子宫内膜容受性的建立。

跨膜蛋白16a在心血管系统中的研究进展

钙激活性氯通道（CaCCs）在心血管系统发挥重要作用，参与多种生理功能，并且与多种疾病的病理过程有关。随着研究的深入，近来发现CaCCs的重要分子基础为跨膜蛋白16a（TMEM16A），且该蛋白在心血管系统中发挥重要作用。现综述TMEM16A在心血管系统研究中的主要进展和关键问题，讨论TMEM16A在心血管系统的表达、生理功能以及与某些心血管疾病的临床病理联系等问题，并在此基础上，对TMEM16A在心血管疾病的靶向治疗的研究前景方面进行展望。

跨膜蛋白16A与高肺血流性肺动脉高压中炎症反应的关系

目的探讨跨膜蛋白16A (TMEM16A)与高肺血流性肺动脉高压中炎症反应的关系,为诊治肺动脉高压提供参考依据.方法将30只大鼠随机分为对照组(不做任何处理)、假手术组(除腹主动脉夹闭3 min和不穿刺吻合缝合血管外,其余采用分流组方法处理)和分流组(建立高肺血流性肺动脉高压大鼠模型),给予同样的饲养环境,10周后对3组大鼠的右心室心肌肥厚指数(RVHI)、右心室收缩压(RVSP)、肺血管组织的TMEM16A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Raf、p38MAPK蛋白进行检测.结果分流组RVSP、RVHI均显著高于假手术组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);分流组的TMEM16AmRNA表达及TMEM16A蛋白表达显著高于假手术组与对照组(P<0.05);分流组的TNF-α、Raf、p38 MAPK表达显著高于对照组和假手术组.结论在高肺血流性肺动脉高压大鼠中,TMEM16A介导的钙激活性氯离子通道(CaCC)显著高表达,可能通过MAPK途径影响肺血管炎症.

跨膜蛋白16A对大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的探讨跨膜蛋白16A（TMEMl6A）对原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制。方法原代培养大鼠门静脉平滑肌细胞，慢病毒转染上调其TMEMl6A表达，分别加T16Ainh-A01和U0126后用Westernblot法检测蛋白表达变化，流式细胞术观察细胞周期变化，细胞计数试剂盒（CCK-8）观察细胞增殖。结果成功培养出大鼠门静脉平滑肌细胞并转染了TMEMl6A，转染效率约为80％，流式细胞术结果显示过表达TMEMl6A组s期细胞比例为（34．44±3．72）％，高于对照组的（15．56±2．36）％，差异有统计学意义（t=7．423，P〈0．01）。Westernblot显示各组细胞外信号调节激酶1／2（ERKl／2）表达水平差异无统计学意义（t=2．338，P〉0．05）。各组磷酸化ERKl／2（p-ERKl／2）表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论TMEMl6A可能通过影响丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）-ERKl／2通路活性来调控门静脉平滑肌细胞增殖，其表达在原代培养的大鼠门静脉平滑肌细胞增殖中起重要作用。

“调理脾胃”针法治疗糖尿病胃轻瘫及对跨膜蛋白16A的影响

目的:观察"调理脾胃"针法治疗糖尿病胃轻瘫(DGP)的疗效,并探讨其可能的机制。方法:将128例DGP患者随机分为观察组(64例,脱落4例)和对照组(64例,脱落4例)。在西药控制血糖的基础上,观察组采用"调理脾胃"针法,穴取中脘、足三里、阴陵泉、血海、三阴交、地机等,每日1次;对照组口服枸橼酸莫沙必利分散片5 mg,每日3次。两组均每周治疗6 d,共治疗4周。比较两组患者治疗前后胃轻瘫症状评分、血清跨膜蛋白16A(ANO1)含量,并评定临床疗效及安全性。结果:治疗后,两组患者胃轻瘫症状评分各分项(嗳气、腹胀、食欲不振、恶心呕吐、上腹痛、大便异常)评分及总分均降低(P<0.05),观察组嗳气、腹胀、食欲不振、恶心呕吐评分及总分低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者血清ANO1的含量均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。观察组总有效率为86.7%(52/60),高于对照组的70.0%(42/60,P<0.05)。观察组出现5例皮下血肿,经冷敷处理得以改善,无需其他特殊处理。结论:"调理脾胃"针法与枸橼酸莫沙必利分散片相比,改善糖尿病胃轻瘫患者症状的效果更佳,其机制可能与减轻Cajal间质细胞(ICC)损伤有关。

跨膜蛋白16A通过激活表皮生长因子受体信号通路促进乳腺癌细胞增殖的研究

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)在乳腺癌细胞中参与信号通路的富集分析及其对乳腺癌患者预后的影响,探究其对雌激素受体(ER)和孕酮受体(PR)阳性乳腺癌促进增殖作用的机制。方法从公共数据库癌症基因组图谱在线数据库中下载乳腺癌的转录组及临床数据,根据TMEM16A表达的中位值将患者分为高表达组和低表达组,用基因集富集分析进行基因富集和通路分析。用Kaplan-Meier法进行生存分析。用Western Blot方法检测过表达及敲减TMEM16A后ER和PR阳性乳腺癌T47D细胞的TMEM16A蛋白及下游信号通路磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)和EGFR蛋白的表达情况。用CCK-8细胞增殖实验检测乳腺癌T47D细胞转染过表达TMEM16A质粒及用EGFR通路抑制剂后的细胞增殖能力。结果高表达TMEM16A组乳腺癌患者的基因高度富集于EGFR通路、葡萄糖激酶调节蛋白通路和间质表皮转化因子(MET)等通路。Kaplan-Meier生存分析显示:TMEM16A高表达乳腺癌患者预后生存期显著降低,TMEM16A与EGFR共同高表达组的总生存显著低于共同低表达组。Western Blot结果显示:过表达TMEM16A能够增加p-EGFR蛋白表达,反之敲减TMEM16A后p-EGFR蛋白表达水平降低。CCK-8结果显示:转染空质粒与过表达(TMEM16A OE)的相对增殖力分别为(100.00±0)%和(121.40±5.99)%,并且这种促增殖作用可以被吉非替尼所逆转,TMEM16A OE+吉非替尼为(78.26±4.74)%。结论 TMEM16A可能通过EGFR信号通路促进ER、PR阳性乳腺癌T47D细胞的增殖。

跨膜蛋白16A在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达及意义

目的探讨跨膜蛋白16A（TMEM16A）在顽固性功能性便秘患者结肠中的表达及意义。方法收集2014年2—6月间在南京军区总医院普通外科行外科手术切除的30例顽固性功能性便秘患者的结肠手术标本作为实验组（取材部位：乙状结肠全层标本）；选取30例经病理证实的非梗阻性结肠癌患者的手术标本作为对照组（取材部位：取距肿瘤至少5cm以上的正常结肠组织）。分别采用免疫荧光染色、RT—PCR以及Western blot法检测TMEM16A和c．kit在结肠中的表达。结果实验组和对照组结肠标本中，均见TMEM16A蛋白及c-kit的表达，在结肠中的表达部位分布基本一致。实验组结肠组织中TMEM16A和c—kit的免疫荧光表达、蛋白含量及mRNA的表达均明显低于对照组（TMEM16A：吸光度值为1．84±0．25比3．65±0．32，灰度比为0．66±0．07比1．04±0．17，mRNA相对表达量为0．41±0．05比1．00．c-kit：吸光度值为3．38±0．24比5．06±0．31，灰度比为0．64±0．06比0．98±0．09，mRNA相对表达量为0．18±0．08比1．00；均P〈0．05）。结论TMEM16A在顽固性功能性便秘患者结肠组织中表达降低。可能通过调控c—kit的表达来调节结肠平滑肌的运动，并可能成为顽固性功能性便秘治疗的新靶点。

跨膜蛋白16A分子结构及调控机制研究现状

跨膜蛋白16A(TMEM16A)是一种钙激活氯通道,参与人体多种生理及病理过程,如腺体分泌、高血压和癌症等。TMEM16A电流具有复杂的电压以及钙离子依赖性,但其调控机制并不十分清楚。本文基于最新发现的TMEM16A晶体结构,阐述具有10个跨膜域的TMEM16A二聚体结构,详细介绍TMEM16A通道的钙离子结合位点以及孔道结构以及各种分子亚型,进而总结钙离子/钙调蛋白、跨膜电压、磷酸化、细胞内分子(如膜脂质、质子氢)等对TMEM16A的调控机制。本文通过对TMEM16A分子结构及调控机制研究进展的探讨,有利于深入理解TMEM16A参与的生理过程和病理机制。

乳腺癌组织miR-381和跨膜蛋白16A表达与临床病理特征及预后的关系

目的观察乳腺癌组织miR-381、跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)表达变化,探讨其与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。方法84例乳腺癌患者均行保乳手术,术后给予放、化疗,人表皮生长因子受体-2阳性者给予靶向治疗,雌激素受体和/或孕激素受体阳性者给予内分泌治疗,并进行随访。取手术切除乳腺癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-381、TMEM16A mRNA相对表达量;比较不同临床病理特征乳腺癌患者癌组织miR-381、TMEM16A mRNA相对表达量;Pearson相关法分析乳腺癌组织miR-381与TMEM16A表达的相关性。根据癌组织miR-381、TMEM16A mRNA相对表达量均数,将乳腺癌患者分为miR-381高表达组(miR-381相对表达量≥1.15)45例和miR-381低表达组(miR-381相对表达量<1.15)39例、TMEM16A高表达组(TMEM16A mRNA相对表达量≥3.62)46例和TMEM16A低表达组(TMEM16A mRNA相对表达量<3.62)38例,比较miR-381高表达组与低表达组、TMEM16A高表达组与低表达组3年总生存率;多因素Cox回归分析乳腺癌患者术后3年全因死亡的影响因素。结果乳腺癌组织miR-381相对表达量(1.15±0.31)低于癌旁组织(3.21±1.03)(t=17.553,P<0.001),TMEM16A mRNA相对表达量(3.62±1.04)高于癌旁组织(1.71±0.42)(t=15.607,P<0.001)。肿瘤直径≥3 cm(1.02±0.10)、临床分期Ⅱ期(0.93±0.08)、病理分级低分化(0.98±0.09)、有淋巴结转移(1.06±0.20)者乳腺癌组织miR-381相对表达量分别低于肿瘤直径<3 cm(1.31±0.12)、临床分期Ⅰ期(1.34±0.11)、病理分级中高分化(1.30±0.11)、无淋巴结转移者(1.19±0.17)(P<0.05),TMEM16A mRNA相对表达量(4.01±0.47、4.31±0.30、4.22±0.21、4.06±0.72)分别高于肿瘤直径<3 cm(3.12±0.43)、临床分期Ⅰ期(3.02±0.41)、病理分级中高分化(3.23±0.69)、无淋巴结转移者(3.43±0.40)(P<0.05);不同年龄、改良Scarff-Bloom Richardson分级及雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2、Ki-67表达者癌组织miR-381、TMEM16A mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌组织miR-381与TMEM16A表达呈负相关(r=-0.710,P<0.001)。miR-381低表达组术后3年总生存率(68.89%)低于miR-381高表达组(89.74%)(χ^(2)=5.446,P=0.020),TMEM16A mRNA高表达组术后3年生存率(67.39%)低于TMEM16A mRNA低表达组(92.11%)(χ^(2)=7.407,P=0.007)。有淋巴结转移(HR=1.528,95%CI:1.099~2.124,P<0.001)、癌组织miR-381相对表达量<1.15(HR=0.800,95%CI:0.663~0.966,P=0.010)、TMEM16A mRNA相对表达量≥3.62(HR=1.377,95%CI:1.034~1.833,P=0.013)是乳腺癌患者术后3年全因死亡的危险因素。结论乳腺癌组织miR-381表达下调、TMEM16A表达上调,二者表达呈负相关;miR-381低表达、TMEM16A高表达及有淋巴结转移的乳腺癌患者预后不良。

敲减跨膜蛋白16A激活信号传导及转录激活蛋白3表达抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的研究

目的 通过研究敲减跨膜蛋白16A(TMEM16A)对卵巢癌增殖迁移及生存率的影响,并初步探讨其抑制卵巢癌的作用机制。方法 从The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中下载卵巢癌的基因转录数据及临床信息,根据TMEM16A和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的中位值将患者分为高表达组和低表达组,应用Kaplan-Meier法进行生存分析。将卵巢癌SKOV3细胞分为阴性对照组[转染空载质粒(scrambled shRNA)]和敲减组[转染靶向TMEM16A特异性shRNA(TMEM16A shRNA)]。用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖情况,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,用蛋白质印迹法检测细胞TMEM16A和STAT3蛋白的表达情况。结果 Kaplan-Meier生存分析显示TMEM16A高表达卵巢癌患者预后生存期显著降低,STAT3高表达卵巢癌患者预后生存期显著降低,TMEM16A与STAT3共同高表达组总生存显著低于共同低表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。卵巢癌SKOV3细胞阴性对照组和敲减组的细胞增殖率分别为(100.00±0)%和(54.12±4.01)%,迁移率分别为(84.89±0.04)%和(47.18±0.02)%,TMEM16A蛋白表达水平分别为0.79±0.12和0.11±0.08,磷酸化STAT3蛋白表达水平分别为0.69±0.09和0.18±0.06。阴性对照组的上述指标与敲减组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),说明敲减TMEM16A后磷酸化STAT3蛋白表达水平降低。结论 敲减TMEM16A激活STAT3信号通路可以抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移。

跨膜蛋白16A通过激活AKT1信号通路对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭影响

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响,初步探索其潜在的分子机制。方法从公共在线数据库癌症基因组图谱(TCGA)中下载卵巢癌的转录组及临床数据,根据TMEM16A和AKT1基因表达的中位值将患者分为高表达组与低表达组,应用Kaplan-Meier法进行生存分析。Western blot方法检测过表达TMEM16A后卵巢癌SKOV3细胞中蛋白激酶AKT1及磷酸化AKT1水平。应用CCK-8细胞增殖实验检测SKOV3卵巢癌细胞转染过表达TMEM16A质粒及应用AKT1抑制剂后细胞的增殖能力。应用Transwell侵袭实验检测过表达TMEM16A及加入AKT1抑制剂后卵巢癌细胞的侵袭情况。结果Kaplan-Meier生存分析显示,TMEM16A高表达的卵巢癌患者预后生存期显著缩短,TMEM16A与AKT1联合高表达组生存期显著短于联合低表达组。Western blot结果显示,过表达TMEM16A促进磷酸化AKT1蛋白表达。CCK-8结果显示,过表达TMEM16A后细胞增殖能力增强,加入AKT1抑制剂后可以阻断其增强的细胞增殖能力。Transwell结果表明,TMEM16A高表达明显促进卵巢癌细胞侵袭,而AKT1抑制剂可影响其侵袭能力。结论过表达TMEM16A可以激活卵巢癌SKOV3细胞中AKT1蛋白,TMEM16A可能通过激活AKT1促进卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭。