TMED2受miR-5583-5p调控在舌鳞状细胞癌细胞中发挥癌基因作用

舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中最常见类型,其发病率和死亡率都较高。大量研究表明,microRNA(miRNA)是一类小非编码RNA,可调节靶基因的转录后处理,导致靶mRNA的降解及翻译抑制。然而,关于跨膜p24转运蛋白2(transmembrane p24 trafficking protein 2,TMED2)受miR-5583-5p调控对TSCC细胞Cal-27迁移、侵袭、增殖及上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力影响尚不明确。本研究利用数据库,分析TMED2高表达头颈部肿瘤(head and neck cancer,HNC)病人愈后不良,在HNSCC组织中的表达升高(P<0.001)。Western印迹结果表明,在6例TSCC组织及TSCC细胞系SCC-9、SCC-25和Cal-27中,TMED2蛋白质表达量较癌旁组织及口腔正常上皮细胞中上调,转染TMED2干扰质粒(SiTMED2)的Cal-27细胞中TMED2蛋白质表达量降低,E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,而N-钙黏着蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达下调。迁移与侵袭结果发现,转染SiTMED2的Cal-27细胞穿过小室基底膜细胞数量均低于对照组(P<0.05)。EdU结果显示,转染SiTMED2的Cal-27细胞增殖能力降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,TMED2存在与miR-5583-5p的结合靶点。荧光定量RT-PCR结果显示,miR-5583-5p在Cal-27细胞中表达量较Hoec细胞中下降,转染过表达miR-5583-5p质粒的Cal-27细胞其表达量升高(P<0.05),过表达miR-5583-5p(miR-5583-5p mimics)后TMED2蛋白表达水平降低(P<0.05)。综上所述,TMED2受miR-5583-5p调控促进舌鳞状细胞癌细胞Cal-27迁移、侵袭、增殖及上皮间充质转化的发生。

TMED5、miR-652-3P在原发性肝癌中的表达及临床价值

目的:分析原发性肝癌(PLC)组织中微小RNA-652-3P(miR-652-3P)和跨膜p24运输蛋白5(TMED5)的表达水平,并探讨其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取2015年12月至2018年12月行手术治疗的PLC患者82例为研究对象,取手术切除的肝癌组织为观察组,同时选取82例患者手术切除的边缘正常组织(距离癌组织>5 cm)为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织样本miR-652-3P和TMED5 mRNA表达水平,采用Pearson法分析miR-652-3P与TMED5的相关性。分析miR-652-3P和TMED5与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier分析miR-652-3P和TMED5表达情况与PLC患者生存情况的关系,采用Cox法分析影响PLC患者预后的因素。结果:与对照组组织相比,观察组组织TMED5 mRNA相对表达水平较高(P<0.05),miR-652-3P表达水平较低(P<0.05);PLC组织中miR-652-3P与TMED5呈负相关(P<0.05);miR-652-3P和TMED5与TNM分期、淋巴结转移、淋巴血管间隙浸润相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小及分化程度无关(P>0.05);Kaplan-Meier法显示miR-652-3P高表达者平均生存时间显著长于miR-652-3P低表达者,TMED5低表达者平均生存时间显著长于TMED5高表达者;多因素分析表明,淋巴结有转移、miR-652-3P低表达和TMED5高表达是影响PLC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:miR-652-3P在PLC组织中表达显著下降,TMED5在PLC组织中表达显著上升,二者水平与淋巴结转移、TNM分期、淋巴血管间隙浸润显著相关,可能是PLC患者预后评估有价值的生物指标。

TMED10对骨关节炎中TGF-β/Smads信号通路的影响

目的:探究跨膜P24转运蛋白10(TMED10)对骨关节炎中转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的影响。方法:将大鼠软骨细胞分为Control组、IL-1β组、NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组。Control组和IL-1β组细胞不进行转染处理,NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组细胞分别转染NC-sh、TMED10-sh、NC-OE和TMED10-OE。转染后,除Control组之外,其他组软骨细胞均用白介素-1β(IL-1β)(10 ng/mL)处理24 h模拟OA软骨细胞的病理微环境。通过MTT法检测细胞增殖,通过TUNEL法检测细胞凋亡。采用前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法建立OA大鼠模型,将OA大鼠分为OA组、OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组(n=12),Sham组(n=12)大鼠进行假手术操作。Sham组和OA组大鼠关节腔内注射40μL生理盐水,OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组大鼠关节腔内分别注射40μL的NC-sh和TMED10-sh(滴度为1×10^(9)TU/m L),每周注射1次,共4周。采用番红O/固绿染色法评价膝关节软骨形态,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10的m RNA水平,采用Western blot检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Collagen II和MMP-13的蛋白表达水平。结果:与Control组比较,IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 m RNA和TMED10、MMP-13蛋白水平均升高(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低(P<0.05)。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,TMED10-sh+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 m RNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均降低(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均升高(P<0.05)。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,TMED10-OE+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 m RNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均升高(P<0.05),相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低(P<0.05)。与Sham组比较,OA组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 m RNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均升高(P<0.05),TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均降低(P<0.05)。与OA组和OA+NC-sh组比较,OA+TMED10-sh组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 m RNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均降低(P<0.05),TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均升高(P<0.05)。结论:本研究表明TMED10可能通过抑制TGF-β/Smads信号通路导致软骨细胞丢失和软骨退变,TMED10/TGF-β/Smads信号通路可能是治疗OA的新靶标。

昆虫TMED基因进化及家蚕TMED基因表达模式分析

跨膜p24(transmembrane emp24 domain,TMED)基因与哺乳动物的免疫反应、信号传导、生长发育和疾病发展等密切相关。然而,昆虫中仅有果蝇TMED的报道。本研究从基因组鉴定了家蚕、赤拟谷盗、烟草天蛾和意大利蜂的TMED家族基因,并发现1个α类、1个β类、1个δ类和多个γ类的TMED家族基因成员构成模式产生于膜翅目分化前昆虫的共同祖先,而果蝇类TMED家族成员构成在进化中形成了独特模式。昆虫TMED家族γ类基因进化速度较快,分化成了TMED6-like、TMED5-like和TMED3-like这3个独立的亚类。TMED5-like基因在膜翅目昆虫发生了丢失,在鳞翅目昆虫祖先中发生了复制,在果蝇类发生了重复。昆虫TMED蛋白除具有典型的TMED结构特征外,还有明显的信号肽。家蚕7个TMED基因分布在6条染色体上,1个基因为单外显子,6个基因为多外显子。从幼虫组织克隆了家蚕7个TMED基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)全序列并登录到GenBank数据库。BmTMED1、BmTMED2和BmTMED6在家蚕各个时期和组织中均表达,所有基因都在家蚕4龄、5龄和丝腺组织中表达。本研究发现了昆虫的TMED家族成员构成模式、γ类分化特点以及它们的进化历史等,为进一步研究家蚕以及其他昆虫TMED基因提供了基础。

微RNA-455-3p靶向TMED3基因调控宫颈癌细胞凋亡和放射敏感性分子机制研究

目的探讨微RNA(miR)-455-3p对宫颈癌C33a细胞凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法不同剂量射线照射C33a细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-455-3p和跨膜p24运输蛋白3(TMED3)mRNA表达,免疫印迹检测TMED3和Cleaved caspase-3蛋白水平。分别构建miR-455-3p过表达和TMED3沉默的C33a细胞,qRT-PCR检测miR-455-3p和TMED3 mRNA表达,免疫印迹检测TMED3和Cleaved caspase-3蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验验证miR-455-3p和TMED3之间靶向调控关系。结果辐射可降低C33a细胞中miR-455-3p水平(P<0.05),提高TMED3 mRNA和蛋白水平(P<0.05)。miR-455-3p过表达或沉默TMED3可促进C33a细胞凋亡(P<0.05),增强C33a细胞放射敏感性(P<0.05)。miR-455-3p负调控TMED3表达,过表达TMED3降低了miR-455-3p过表达对C33a细胞凋亡的促进作用和放射敏感性的增强作用。结论miR-455-3p可能通过下调TMED3表达促进C33a细胞凋亡,并增强其放射敏感性。