坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)研究进展

1980年Farmer III[1]等首次于儿童咽喉部分离出坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii),并将其归于肠杆菌科肠杆菌属中一个新的菌种,DNA中G+C含量为57 mol%和56.7 mol%。它是引发新生儿感染的条件致病菌,临床分离菌株不论是从肠道内或肠道外的标本检出,对它致病性的评估一直未明确,尤其是该菌在分类学上存在多重异质性。2007年Iversen[2-3]等应用全长16 s rRNA基因测序、核糖体分型、荧光扩增片段长度多态性(f-AFLP)和DNA-

PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。

罗氏沼虾病原阴沟肠杆菌药物敏感性测定与分析

采用纸片扩散法(K-B法)测试了2017年春季分离自江苏省高邮市罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗场的5株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)对35种抗菌类药物的敏感性,并采用试管稀释法测定了6种抗菌药物对分离菌株WJ1的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果显示:恩诺沙星对阴沟肠杆菌的杀菌效果最好,最小杀菌浓度为4 mg/L;其次是诺氟沙星,最小杀菌浓度为7 mg/L;盐酸土霉素和氟苯尼考的最小杀菌浓度分别为8 mg/L和10 mg/L;红霉素和头孢曲松对阴沟肠杆菌杀菌效果最差。

耐重金属肠杆菌GL-2鉴定及对小麦促生作用的研究

为分离出具有重金属抗性的植物根际促生菌,用添加了Cd的LB培养基和嗜铁素培养基筛选合适的菌株,用平板稀释法测定GL-2菌株的最低抑制浓度。在不同处理下的MS培养基中研究了GL-2菌株下Pb和Cd对小麦生长的影响。利用盆栽试验研究了GL-2对小麦生长的促进作用。结果表明,分子生物学和生理生化鉴定GL-2菌株为路氏肠杆菌(Enterobacter ludwigii);GL-2对重金属具有很强的耐受性,其中对Pb的最低抑制浓度高达650 mg/L;添加GL-2菌株的MS培养基可有效减轻重金属对小麦生长的影响;GL-2菌株显著增加了小麦根鲜重、分蘖数和根干重。

多管发酵法和酶底物法检测总大肠菌群的结果差异性

多管发酵法和酶底物法检测总大肠菌群的结果差异大小与样品的细菌种类组成有关,而多管发酵法和酶底物法检测原理的不同导致检测的目标菌有一定的差异,也是两者结果差异的根本原因。酶底物法对肠杆菌属中的桑树肠杆菌Enterobacter mori(R18-2)、路氏肠杆菌Enterobacter ludwigii(EN-119)有特异性,而多管发酵法未表现出特异性。酶底物法对阴沟肠杆菌(CICC 21539)表现出一定的迟滞效应。酶底物法可作为生产企业检测控制手段,但用作产品合格检验或仲裁检测时应慎重,统一总大肠菌群的定义是当前亟需解决的问题。

响应面法优化β-甘露聚糖酶发酵培养基的研究

研究采用响应面法对路氏肠杆菌(Enterobacter ludwigii MY271)液体发酵产β-甘露聚糖酶的培养基进行优化。在前期单因素试验对培养条件及培养基优化的基础上,利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响产酶的3个显著性因素:魔芋粉、Na2HPO4和Mg SO4。在此基础上,运用最陡爬坡试验找到中心复合试验的中心点,然后研究不显著因素的最低添加量来降低生产成本,最后利用中心复合设计确定显著性因素之间的交互作用及最佳组成。结果表明,魔芋粉14 g/l、蛋白胨18 g/l、Na2HPO4 0.7 g/l、KH2PO4 0.5 g/l、Zn SO4 0.15 g/l、Mg SO4 0.01 g/l,β-甘露聚糖酶酶活可达到62.76 U/ml,与模型预测值相近,且与单因素优化后的酶活(30.02 U/ml)相比,提高了109.06%。通过响应面法优化培养基组分,酶活得到了显著提高,为该酶制剂的大规模生产奠定了基础。

一株拮抗菌C-5的分离及鉴定

针对目前海参养殖中水产微生态制剂品种单一、施用效果不稳定等现状,作者从地瓜参(Acaudina molpadioidea)肠道分离土著肠杆菌(Enterobacter),筛选到1株具有较好拮抗作用的海洋细菌C-5,该菌对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)等7种细菌有拮抗作用;通过形态观察、生理生化和16S rDNA基因序列分析鉴定为霍肠杆菌(Enterobacter hormaechei);通过卤虫(Artemia)和药敏实验检测该菌具有安全性,其对卤虫的72 h半致死浓度(LC50)为108cfu/m L,只对20种常规抗生素中的5种产生耐药性;对C-5的发酵条件进行优化,该菌优化后的发酵条件为:温度30℃,pH 7.0,盐度2%。结果表明,C-5有望作为一种益生菌应用于海水养殖病害控制。

鲫鳃出血病2种病原菌的分离及鉴定

从患有鳃出血病的鲫鳃组织分离出2种革兰氏阴性杆菌,并进行形态特征及16S r RNA基因序列分析。结果显示,这2种病原菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)和阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)。体外溶血试验结果显示,2种菌对鱼的红细胞都有较强的溶血作用,且维氏气单胞菌的溶血速率明显高于阴沟肠杆菌。人工感染试验显示,这2种菌都具有较强的毒力,两者混合感染比单独感染致病率更高;但单独感染时阴沟肠杆菌比维氏气单胞菌引起的鳃出血症状更明显。5种常用水产药的耐药性结果表明两种菌都有一定的耐药性,但是维氏气单胞菌的耐药性更强。

病鸽肝脏中阪崎肠杆菌的分离培养与鉴定

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazaii）是肠杆菌属的一种条件致病菌。近年来,对食品加工厂原料、生产环境及家庭中阪崎肠杆菌污染状况的研究发现,阪崎肠杆菌在自然界中分布广泛。1980年,Farmer等人在进行肠杆菌基因杂交研究时发现,阴沟肠杆菌与阪崎肠杆菌的基因杂交后,其色素与生化反应均有较大差别,因此将其从阴沟肠杆菌的菌属中分离出来,命名为阪崎肠杆菌。

土壤源孔雀石绿脱色菌的筛选及脱色条件分析

从土壤来源的细菌中,筛选可使孔雀石绿(MG)脱色的菌株,结果得到1株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)(S1-2)对MG有较强的脱色能力。通过MG被脱色前后溶液吸光度的变化衡量脱色率,用单一变量法分析影响菌株S1-2发挥MG脱色作用的不同条件。结果表明,菌株S1-2在36 h内可使1100 mg/L的MG完全脱色,处理后的MG对解淀粉芽孢杆菌、壁芽孢杆菌抑制率降低了43.98%~48.21%。用300 mg/L的MG进行脱色条件分析发现,按0.5%~7.0%接菌,脱色率达91.67%~93.91%;不同pH培养环境中,该菌在pH 6、7时对MG脱色率为90.02%~94.54%;在20~40℃条件下培养,该菌对MG脱色率达84.61%~94.56%;在6~18 g/L的NaCl浓度下,该菌对MG的脱色率达91.85%~93.77%。