金樱子多糖、车前子多糖和冬葵果多糖体内外抗炎效果比较

旨在对比金樱子多糖、冬葵果多糖、车前子多糖的体内外抗炎活性。体外试验用脂多糖(LPS)诱导小鼠RAW264.7细胞构建炎症模型,分别加入金樱子多糖、车前子多糖、冬葵果多糖,以MTT法检测其对RAW264.7细胞活力的影响,Griess法检测LPS诱导的细胞上清液中NO含量,ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,RT-PCR法检测炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达量;体内试验用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建小鼠溃疡性结肠炎模型,同时多糖组和阳性药组的小鼠分别灌服多糖(200 mg/kg)和5-氨基水杨酸(200 mg/kg),空白组和DSS组灌服生理盐水,采用ELISA检测结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度,以结肠长度、组织病理学评分比较结肠组织病理变化。体外试验结果发现:在同一浓度下,与模型组(LPS)相比,对炎性介质(NO、TNF-α、IL-6、IL-1β)含量和促炎细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的mRNA表达量抑制作用以金樱子多糖组最高,车前子多糖组次之,而冬葵果多糖组抑制作用不明显;体内试验结果发现:与DSS组相比,金樱子多糖组的疾病活动指数(DAI)显著降低(P<0.05),结肠长度极显著增加(P<0.01),组织病理学评分和结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1β水平极显著降低(P<0.001),结肠组织中IL-10水平极显著升高(P<0.001),其次是车前子多糖组的结肠长度显著增加(P<0.05),组织病理学评分和结肠组织中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),结肠组织中IL-6水平极显著降低以及IL-10水平极显著升高(P<0.01),而冬葵果多糖组的指标变化不明显。试验结果表明,与车前子多糖和冬葵果多糖相比,金樱子多糖在体内外的抗炎效果最佳,可以作为多糖类抗炎剂的候选药。

车前子多糖对骨髓来源树突状细胞表型和吞噬功能的影响

目的:探讨车前子多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:从小鼠骨髓中分离单核细胞,加入细胞因子rmGM-CSF、rmIL-4诱导分化成未成熟树突状细胞,收集细胞加入促成熟刺激剂LPS(阳性对照组)或车前子多糖。倒置显微镜观察树突状细胞的形态,流式细胞术检测成熟树突状细胞的表面标志CD11c和MHCII的表达及吞噬FITC-dextran的变化。结果:经4种不同的车前子多糖作用40h后,显著促进CD11c+MHCII+双阳性细胞的比率,在浓度(0～50μg/ml)范围内呈现剂量依赖性,当浓度高于50μg/ml时,双阳性细胞表达率呈现降低趋势。经多糖作用后吞噬FITC-dextran的能力降低,其中PS3的作用效果最明显,表达PE-CD11c×FITC-dextran的细胞比率只有11.53%。结论:车前子多糖促进CD11c+MHCII+双阳性细胞的比率,降低对FITC-dextran的吞噬能力,初步表明车前子多糖可以促进树突状细胞的成熟。

车前子多糖对便秘模型小鼠通便作用的研究

目的:研究车前子多糖对便秘模型小鼠的润肠通便作用。方法:将雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组和三个剂量的给药组。给药组分别经口给予低、中、高剂量(0.1、0.2、0.4g/kgbw)的车前子多糖;空白组和模型组给予20ml/kgbw的蒸馏水;阳性对照组给予1.0g/kgbw的麻仁丸。连续灌胃8d后,观察各组小鼠的首次排黑便时间、5h内排便粒数,测定粪便含水量和小肠墨汁推进率。结果:车前子多糖能显著缩短首次排黑便时间、增加5h内排便粒数、提高粪便含水量和小肠墨汁推进率。结论:车前子多糖具有润肠通便的作用。

车前子多糖抗炎作用机制的实验研究

目的:观察不同浓度车前子多糖(PSP)对各期炎症模型的影响,探讨其可能机制。方法:将小鼠和大鼠随机各分为阴性对照组、阳性对照组和PSP低、中、高剂量组,每组10只。采用二甲苯致耳廓肿胀、醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性增高,蛋清致大鼠背部气囊滑膜炎,棉球诱发小鼠肉芽肿,探讨PSP的抗炎作用。称体质量测定各组小鼠耳的炎症肿胀程度及肉芽增生水平,用化学方法检测各组小鼠腹腔洗涤液中的伊文思蓝含量、滑膜炎渗出液容积、渗出液中的白细胞(WBC)计数和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,渗出液和血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果:与阴性对照组相比,车前子多糖能够抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性的增加,以及小鼠棉球肉芽肿的形成差异有统计学意义(P<0.01);其较阴性对照组还能明显减少渗出液容积,降低渗出液中WBC、MDA、TNF-α含量及血清中MDA水平,并能提高渗出液和血清中SOD的活性,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)结论:PSP能够减轻各期炎症形成,机制可能与抑制炎性因子的渗出、消除自由基和抑制脂质过氧化有关。

车前子多糖对小肠运动障碍小鼠的影响

目的:探讨车前子多糖对小肠运动障碍小鼠的影响。方法:观察车前子多糖对灌服阿托品后形成小肠运动障碍的小鼠小肠推进率的影响。结果:车前子多糖能够提高小鼠小肠推进率。结论:车前子多糖对小肠运动障碍小鼠具有促进小肠蠕动的作用。

微波技术用于车前子多糖的提取

为保持车前子多糖的生物活性,提高得率,采用微波技术提取车前子多糖。通过正交试验确定了微波提取的最佳工艺参数,用该法提取所得车前子多糖采用蒽酮-硫酸法测定其多糖含量。结果表明,微波提取车前子多糖的最佳工艺参数为:车前子与水的质量比为1:15,在微波强度为60%的条件下提取65s。与其它方法比较,微波提取方法时间短,得率高,是车前子多糖提取的一种优选方法。

大粒车前子多糖提取工艺优化及其理化性质测定

采用水提、醇沉法从大粒车前子中提取得到多糖提取物,然后经Sevag法脱蛋白、SephacrylTM S-400HR葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3三个组分。应用高效凝胶渗透色谱法等方法测定PLCP-2组分纯度及其理化性质;进一步采用单因素试验结合二次响应面法对车前子多糖提取工艺进行优化。结果表明:PLCP-2为均一多糖(PLP),测得其相对分子质量为1849268、糖含量87.3%、蛋白含量1.2%、糖醛酸含量14.7%;通过岭脊分析获得最佳提取工艺条件,结合实际操作将最佳条件修正为提取温度99℃、料液比1:30(g/mL)、提取时间5.45h,实际测得多糖得率为13.79%,与理论预测值比较接近。该工艺经济、简约、可行性强。

大粒车前子多糖乙醇分级及其理化性质研究

采用热水法从大粒车前子中提取、分离出多糖(Plantago asiaticaL.crude polysaccharide,PLCP),加水复溶后依次用40%和60%乙醇分级,得到不同级分多糖(PLCP-1和PLCP-2),上清液部分记为PLCP-3。凝胶柱层析法考察PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3凝胶色谱行为,GC测定单糖组成,红外和紫外光谱检测光谱性质,并测定糖含量、糖醛酸含量和蛋白含量。结果表明:PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3均为酸性多糖,蛋白含量较低,其糖含量依次为71.06%、76.71%和64.78%。紫外和红外测定结果显示,PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3均为酸性多糖,且含有一定量的蛋白。PLCP-1、PLCP-2和PLCP-3主要含有阿拉伯糖和木糖,还有少量的鼠李糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖等,但具体摩尔组成比例相差较大。

车前子多糖的测定方法研究

建立了一种准确测定车前子中多糖的方法。采用苯酚-硫酸法测定车前子中多糖量,以木糖作为标准对照物,检测波长480 nm。实验结果表明,车前子中多糖平均值为9.04%,平均加标回收率为98.2%,RSD=1.7%(n=6)。此测定方法适用于车前子多糖含量的测定,也可为其他戊糖含量高的多糖测定提供参考。

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制。方法选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较。T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,ARmRNA和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法。结果衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P<0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P<0.01),ARmRNA表达明显低于青年组(P<0.01),而RAGEmRNA表达明显高于青年组(P<0.01)。车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,ARmRNA表达明显高于衰老模型组(P<0.05,P<0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGEmRNA表达显著低于衰老模型组(P<0.05,P<0.01)。以车前子多糖大剂量组效果最明显。结论车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分。

车前子多糖抗脂质过氧化作用的研究

目的研究车前子多糖对硫酸亚铁-维生素C(Fe2+-VitC)致大鼠肝微粒体脂质过氧化的影响。方法通过大鼠肝微粒体的提取,制备Fe2+-VitC系统诱导的脂质过氧化损伤模型,检测车前子多糖对丙二醛(MDA)的抑制作用以及对超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响,观察车前子多糖的抗脂质过氧化作用。结果车前子多糖显著抑制肝微粒体脂质过氧化,表明车前子多糖具有抑制Fe2+-VitC增强肝微粒体脂质过氧化的效应。结论车前子多糖可能通过与Fe2+络合,降低反应体系中Fe2+游离浓度,而抑制微粒体脂质过氧化。

大粒车前子多糖分离、纯化及单糖组成分析

沸水法提取得到的大粒车前子粗多糖经过Sevag法脱蛋白后,运用生物大分子纯化系统(AKTA Purifier 100),采用凝胶柱层析法分离、纯化,得到一多糖组分(PLP,Plantago asiatica L.polysaccharide)。应用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分析PLP纯度并测定其相对分子质量。气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析PLP单糖组成。结果表明,PLP为均一多糖,其相对分子量约891.3kD。PLP主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖构成,其摩尔比为5.6:9.4:1.3:1。:

车前子多糖对大鼠肝线粒体自由基防御功能的影响

目的探讨车前子多糖(PSP)对大鼠肝线粒体自由基防御功能的影响。方法差速离心法提取雄性SD大鼠肝线粒体,采用硫酸亚铁-维生素C(Fe2+-Vit C)激发剂,建立大鼠肝线粒体脂质过氧化(LPO)模型,比色法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和抗氧化物酶(T-AOC)活性,观察PSP对各生化指标的影响。结果 PSP浓度在25、50和100 mg/L范围时,MDA含量分别为3.94±0.15,3.65±0.18和2.88±0.20,均显著低于模型组6.47±0.48(P<0.01),表明PSP对肝线粒体脂质过氧化有抑制作用,而对抗氧化物酶类活性均有激活作用,与模型组比较,均明显升高(P<0.01)。结论 PSP对大鼠肝线粒体自由基的防御功能可产生一定的影响,对"治未病"起到一定的防治作用。

车前子多糖研究进展

文章综述了车前子多糖的研究进展,包括提取纯化、结构分析、含量测定、药理活性等方面,可为合理开发车前子产品奠定基础。

车前子多糖抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖及其机制

采用组织贴壁培养法建立氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖模型,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察车前子多糖(plantain seed polysaccharide,PSP)对VSMC增殖的影响,结果表明ox-LDL诱导的VSMC增殖明显(P<0.05),认为该增殖模型成功建立。利用比色法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量以及一氧化氮合酶(NOS)的活性,探讨PSP在细胞水平的抗氧化作用,结果显示给予PSP后,MDA含量显著下降,SOD、NO和NOS水平明显升高(P<0.05),表明PSP具有一定的抗氧化作用。RT-PCR检测原癌基因(c-myc)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,观察PSP对c-myc和MCP-1mRNA表达的影响,以寻找药物的靶点并探讨PSP抗动脉粥样硬化作用的分子机制。结果表明,PSP下调c-mycmRNA和MCP-1mRNA的表达,可能是抗动脉粥样硬化的机制之一。

车前子多糖对小鼠阴道菌群失调的调整作用

目的:探讨车前子多糖对小鼠阴道菌群失调的调节作用。方法:34只雌性小鼠随机分成三组,除正常对照组外,其余两组用青霉素钠盐溶液小鼠阴道冲洗造成阴道菌群失调模型;用药后行阴道分泌物涂布培养。结果:模型组小鼠阴道内乳杆菌数量较正常对照组明显减少,药物处理组小鼠阴道内乳杆菌数量恢复并接近正常对照组水平。结论:车前子多糖对阴道菌群失调有调整作用。

富含车前子多糖饮料的制备及其肠道功能活性研究

以大粒车前子为原料制备富含水溶性多糖的提取液,在此基础上以感官评价为指标,通过单因素试验结合正交试验优化富含车前子多糖的功能性饮料工艺配方,并结合动物试验评价所得饮料对小鼠肠道功能的影响。结果表明:车前子多糖饮料的最佳工艺配方为车前子多糖提取液稀释2倍后用于饮料制作,在白砂糖添加量为6%,柠檬酸添加量为0.025%,茶多酚添加量为0.05%条件下得到的饮料口感最好;当CMC-Na和黄原胶的添加量均为0.01%时,车前子多糖饮料的稳定性最好;车前子多糖饮料可提高小鼠粪便的含水量,增加盲肠中丙酸和丁酸的浓度。所研发的车前子多糖饮料对肠道有一定的益生作用。

大粒车前子多糖及其铈配合物对磷酯键的水解作用

以大粒车前子多糖(PLCP)为配体与四价铈(Ce4+)结合,形成水溶性的大粒车前子多糖铈配合物(Ce-PLCP),并就该配合物及其配体对磷酯键的水解作用进行比较研究。结果表明:Ce-PLCP对对硝基苯磷酸二钠的表观水解速率常数达1.03×10-2min-1,而PLCP的表观水解速率常数仅为4.27×10-4min-1;Ce-PLCP对某些有机磷农药也有较好的水解效果,在48h内对乐果、氧化乐果、毒死蜱及敌敌畏的水解率分别为74.97%、69.57%、46.11%及44.17%,而PLCP对有机磷农药的水解效果都不及Ce-PLCP。

车前子多糖致突变毒性的实验研究

目的探讨车前子多糖对小鼠体细胞和生殖细胞的致突变作用。方法将体质量20～26g健康小鼠100只,雌雄各半,随机分为5组,分别为阴性对照组(蒸馏水,distilled Water)、阳性对照组(环磷酰胺,cyclophosphamide)和车前子多糖3个剂量组(剂量分别为100、200、400mg/kg)。阴性对照组及车前子多糖3个剂量组均灌胃给药,阳性对照组腹腔注射。采用间隔24h,连续7次给药,于末次给药后6h将小鼠处死,用于微核、染色体畸变检测。另取雄性小鼠50只(15～18g),分组及给药同上,在第1次给药后第35天观察精子畸形率。结果车前子多糖诱发的微核、染色体畸变和精子畸形率与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.01)。结论车前子多糖对小鼠体细胞和生殖细胞均无致突变作用。

车前子多糖一般药理学研究

目的观察车前子多糖(PSP)主要药效学以外的药理作用。方法观察用药后小鼠自主活动行为能力,家猫呼吸频率、呼吸深度和血压、心率的变化情况。结果PSP用药前后多项指标差异不显著(P>0.05)。结论在药物正常剂量范围内,PSP对神经系统、呼吸系统和心血管系统是安全的。