转人α-乳清蛋白基因克隆牛及其胚胎移植受体血常规和血清生化指标的研究

分别选择转人α-乳清蛋白基因牛(转基因组)及其胚胎移植受体(受体组)和普通牛(对照组)各5头,对3组试验牛进行颈静脉跟踪采血3次,每次间隔14d,分析血常规和血清生化指标.结果表明:在血常规指标中,转基因组牛的红细胞数和血小板显著低于对照组(P<0.05),红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白量显著高于对照组(P<0.05);受体组牛的红细胞数、血红蛋白浓度和红细胞比积均显著低于对照组(P<0.05).在血清生化指标中,转基因组和受体组牛的血清电解质K和P含量均显著小于对照组(P<0.05).转基因组牛的血脂浓度、肌酸激酶活性、天冬氨酸氨基转移酶活性和尿素氮浓度均显著低于对照组(P<0.05),而血肌肝浓度显著高于对照组(P<0.05);受体组牛的血糖浓度、总蛋白浓度和尿素氮浓度等指标均显著低于对照组(P<0.05),而天冬氨酸氨基转移酶活性显著高于对照组(P<0.05).尽管转人α-乳清蛋白基因克隆牛及其胚胎移植受体在某些血常规和血清生化指标上与对照牛存在显著差异,但所有指标均处在健康牛正常值范围内.

转人α-乳清蛋白基因奶牛性控冻精人工授精效果试验

研究了输精部位、不同精液来源及育成和成母牛等因素对转入α-乳清蛋白基因性控冻精人工授精妊娠率的影响．并对转入α-乳清蛋白基因性控冻精和常规冻精的人工授精效果进行了比较，以便为制定转人仅一乳清蛋白基因性控冻精的合理授精方案提供科学依据。促进转入α-乳清蛋白基因奶牛新品种产业化。

黑豆-乳清双蛋白膳食对大鼠体内免疫的调节作用

黑豆蛋白和乳清蛋白分别是两种优质的植物源和动物源蛋白质原料,食用后均可改善机体的免疫特性,但双蛋白对机体免疫调节作用的研究相对较少。本试验利用标准膳食(CP)、乳清蛋白膳食(WP)、黑豆蛋白膳食(BSP)和黑豆-乳清双蛋白膳食(BS-WP)对4组大鼠进行为期60 d的喂养,喂养周期结束后对各组大鼠的血清生化指标、免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)IgM、IgA和IgG质量浓度、脾淋巴细胞增殖指数、自然杀伤细胞活力、脾脏指数和胸腺指数进行测定,探究黑豆乳清双蛋白对大鼠体内免疫的调节作用。结果表明,与单一蛋白源相比,BS-WP组大鼠的血清免疫生化指标总蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、和谷丙转氨酶显著提升(P<0.05);IgG、IgA和IgM的质量浓度均有显著增加(P<0.05),且IgG增加最为显著,与单一WP组和BSP组相比,BS-WP组大鼠的IgG分别增加了38.23%和41.02%,此外,脾脏和胸腺指数也均有显著增加(P<0.05),脾脏指数分别增加了35.33%和35.91%,胸腺指数分别增加了31.51%和34.26%。由此可知,黑豆-乳清双蛋白膳食可显著提升机体免疫能力。

超高效液相色谱-串联质谱法检测乳清蛋白粉中神经节苷脂GD3

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速测定乳清蛋白中双唾液酸神经节苷脂(GD3)的方法。通过试验优化样品的初次提取条件(提取剂比例及用量)和再萃取条件(萃取剂用量)。在样品充分溶解后,用4 mL三氯甲烷-甲醇溶液(V_(三氯甲烷)∶V_(甲醇溶液)=1∶2)提取1.0 mL样液,转移合并提取液,加入2.0 mL水进行萃取转移为最佳提取条件。然后分别对质谱与色谱条件(定量扫描模式、色谱柱以及流动相pH)进行优化,选取Syncronis HILIC硅胶色谱柱,以0.01 mol/L乙酸铵水溶液-乙腈(pH5.6)为流动相,进行色谱分离,色谱分离后采用母离子监测模式定量测定和多反应监测模式定性分析。在最佳优化分析条件下,双唾液酸神经节苷脂GD3质量浓度在0.5~50.0μg/mL内具有良好的线性关系,相关系数(R^(2))>0.99,回收率在87.3%~103.7%,精密度(RSD)为4.16%~8.95%,检出限在0.1 g/kg。该方法可用于乳清蛋白粉中双唾液酸神经节苷脂GD3。

人α-乳清蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠中高效表达

从粘粒文库中筛选出人α 乳清蛋白基因 ,构建 9 5kb的转基因表达载体 .利用显微注射的方法获得 6 8只F0 代小鼠 ,经PCR检测和DNA印迹分析证实有 8只小鼠 (4 ♂ ,4♀ )为整合人α 乳清蛋白基因的转基因阳性小鼠 ,整合率为 11 7% ,整合拷贝数在 1至 8之间 .利用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和蛋白质印迹分析 ,4只雌性F0 代转基因阳性小鼠全部表达了人α 乳清蛋白 .放射免疫测定法测定 ,含量分别为 0 6 2g/L、 0 4 8g/L、0 5 6 g/L、 3 2 1g/L ;同时测定F0 代 5 0号转基因公鼠的后代阳性母鼠 (5 0 2号 )乳样中人α 乳清蛋白含量也达到 1 0 3g/L ,证明由原代转基因公鼠遗传给后代的人α 乳清蛋白基因亦获得了稳定的表达 .所构建的人α 乳清蛋白转基因载体具有结构较小 ,表达量高 ,可以稳定遗传等优点 .为利用人α 乳清蛋白基因改善牛乳成分和品质奠定了基础 .

转人α-乳清白蛋白基因番茄的获得

由农杆菌介导、采用叶盘法将人α-乳清白蛋白基因导入番茄外植体,经过筛选培养,获得了18株抗性植株。PCR分析和GUS染色检测结果表明外源基因已经导入到番茄中。这一结果为进行人α-乳清白蛋白生物反应器研究奠定了基础。

牦牛垂体特异转录因子-1、生长激素和α-乳清蛋白基因多态性的分析

利用PCR-RFLP技术分析了麦洼牦牛、九龙牦牛和西藏牦牛GH、Pit-1和α-LA基因的多态性。采用普通牛所用的PCR引物均能在牦牛上正确地扩增出上述几个基因相应大小的片段。GH、Pit-1和α-LA(-1689)基因特定位点均未检测到多态性,基因型分别为AA、BB和AA;利用PCR-RFLP分析牦牛乳蛋白基因型具有准确、快速的特点,并能对新生牦牛和公牦牛乳蛋白或泌乳相关基因型进行分析。

超高效液相色谱-串联质谱法测定乳清蛋白运动营养粉多糖的单糖组成及含量

建立了同时测定乳清蛋白运动营养粉多糖水解产物中鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖、木糖、半乳糖醛酸、甘露醇、葡萄糖醛酸、甘露糖、葡萄糖12种糖类化合物的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。乳清蛋白运动营养粉样品经超声辅助提取,采用Sevag法除蛋白,直至无蛋白析出,然后经酸水解进行单糖组成测定。以5 mmol/L乙酸铵+0.02%甲酸水溶液作为流动相A,甲醇作为流动相B,在电喷雾离子源负离子(electrospray ion source negative ion,ESI-)模式下,用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)分析检测,外标法定量。结果表明,12种糖类化合物在质量浓度为0.10~6.00μg/mL范围内,各单糖的线性关系良好,相关系数(r)均大于0.995,检出限为0.0037~0.0326 mg/g,定量限为0.0123~0.1087 mg/g。分别向样品中添加12种糖类化合物标准品浓度为40、100和160 mg/g的3个水平,其加标平均回收率为76.12%~99.12%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)为0.12%~10.01%(n=6)。应用该方法对乳清蛋白运动营养粉样品进行分析,结果发现:15份样品中的12种糖类化合物均有不同程度检出,且多种单糖在不同样品中含量差异较大。该方法的建立可为乳清蛋白运动营养粉多糖的组成及其活性提供技术支撑及基础数据。

连续式微滤膜分离乳清蛋白的研究

文章研究了跨膜压力对连续式微滤膜分离技术工艺参数、分离效果及组分组成的影响。以脱脂乳为原料,使用0.1μm陶瓷微滤膜三级连续在线洗滤工艺分离乳清蛋白和酪蛋白。实验使用0.08、0.11、0.14 MPa 3个梯度,在50℃,3.5倍浓缩的条件下连续生产240 min。计算跨膜压力并且检测截留液和透过液中的α-乳白蛋白(α-La),β-乳球蛋白(β-LG)含量及钾、钙、钠、镁等金属离子的含量。结果表明一级膜通量下降是导致整体膜通量下降的主要因素,经过240 min实验通量下降约17.2%。研究了不同跨膜压力下的膜通量变化情况,膜通量与跨膜压力呈正相关关系,水洗恢复率与跨膜压力呈负相关关系。随着实验时间的延长,膜表面形成不可逆的污堵层,乳清蛋白分离率下降,透过液中乳清蛋白含量下降,150 min后α-乳白蛋白浓度下降37%,β-乳球蛋白浓度下降36.5%。乳清蛋白中2种主要蛋白质比例会随着跨膜压力变化而变化,随着跨膜压力的升高β-乳球蛋白含量会逐渐升高。三级连续膜过滤后,乳清蛋白最高分离率90%左右(α-乳白蛋白为90.4%,β-乳球蛋白为92.7%)。乳中蛋白质的形态和功能受金属离子影响,分离过程中一价阳离子在膜两侧分布较均匀(脱除率大于80%),而二价阳离子则主要集中在截留液一侧(钙离子脱除率为38%)。透过液中的每克蛋白质所对应的金属离子比例远远大于其在截留液中的比例。

转人α-乳清白蛋白基因烟草中半胱氨酸含量的提高(英文)

将人α-乳清白蛋白基因构建到植物表达载体上,通过农杆菌介导采用叶盘法将人α-乳清白蛋白基因导入到烟草中,经过PCR和Southern blot分析表明:人α-乳清白蛋白基因已经整合到烟草基因组中;经过RT-PCR和GUS组织化学染色证明:人α-乳清白蛋白基因得到了表达。测定了9株转基因烟草叶片半胱氨酸含量,大部分植株有着明显的提高,最高幅度达到了318.02%,半胱氨酸含量平均提高了166.40%。

人α-乳清蛋白转基因克隆牛外源基因拷贝数的分析

为了探讨转基因克隆动物外源基因拷贝数及拷贝数在传代过程中的变化,本研究应用实时荧光定量PCR检测人α-乳清蛋白(human alpha-lactalbumin,HLA)转基因克隆牛及其子代共5头牛中外源基因的拷贝数,其中K060923为亲代,172、081、189、隆娃为子代。HLA基因在亲代转基因克隆牛K060923中的拷贝数为1.145,在子代转基因克隆牛172、081、189和隆娃中分别为0.998、1.107、0.891和0.842。结果表明,5头牛中外源基因拷贝数都在1左右,说明人α-乳清蛋白基本以单拷贝形式整合到宿主基因组中,且稳定遗传。

微波-超声辅助乳清分离蛋白糖基化工艺优化

为提高湿美拉德法低聚半乳糖(galactooligosaccharides,GOS)糖基化改性乳清分离蛋白(whey protein isolate,WPI)的接枝度并减少反应过程中副产物的产生,采用短时微波-超声蛋白改性和低温水浴糖基化的方法,考察微波-超声次数、WPI∶GOS(质量比)、水浴温度、水浴时间对GOS改性WPI的接枝度和乳化性能的影响。以接枝度为响应值,优化WPI-GOS缀合物制备工艺。优化结果为微波-超声3次、WPI∶GOS(质量比)2.8∶1、水浴温度61.3℃、水浴时间61.7 min。该工艺下,WPI-GOS接枝度为(62.48±0.74)%,GOS对WPI结构与功能改性效果明显,WPI-GOS缀合物具有较好的乳化性能、pH稳定性和热稳定性,反应产物白度高,褐变程度低。该研究结果可为蛋白糖基化改性提供一种新的方法和理论依据。

牦牛α-乳清蛋白基因的克隆与序列分析

根据奶牛α 乳清蛋白基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增并克隆了牦牛 (Poephagensgrunnieus)α 乳清蛋白基因的全序列。结果表明 ,牦牛α 乳清蛋白基因长 2 999bp ,其中 1～ 670bp为 5′侧翼序列 ,2 690～2 999bp为 3′侧翼序列 ,在 671～ 2 689bp之间 ,共有 4个外显子和 3个内含子 ,牦牛α 乳清蛋白基因共编码 14 2个氨基酸 ,其中第 1～ 19氨基酸之间的短肽为信号肽序列。牦牛的α 乳清蛋白基因有较高水平的表达可能与基因内非编码序列碱基突变引起的回文结构消失有关。该基因 5′侧翼序列在结构上牦牛和牛基本相同 ,只有MGF因子识别位点稍有差别。且牦牛的该序列更符合Groenen等 1994年总结的该因子识别位点的模式序列 ,因此牦牛的该基因

HPLC柱前衍生法测定速溶型水解乳清蛋白粉中18种游离氨基酸含量

本文采用柱前衍生-高效液相色谱法同时测定速溶型水解乳清蛋白粉中18种游离氨基酸的含量。结果显示,各氨基酸色谱峰之间分离良好,18种氨基酸回归方程相关系数均在0.998以上,加标回收率在92.6%~107.4%,相对标准偏差小于5.0%。此方法可用于测定市售速溶型水解乳清蛋白含量,且较《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》(GB 5009.124-2016)操作更为简便,可取得良好的测定结果。

水牛α-乳清蛋白基因的克隆及序列分析

根据报道的奶牛α-乳清蛋白基因核苷酸序列设计和合成4对引物,采用PCR扩增的方法克隆并测定了水牛α-乳清蛋白全基因的核苷酸序列。结果表明,克隆的水牛α-乳清蛋白基因全长3 038 bp,包括5′侧翼区,3′侧翼区,3个内含子和4个外显子(该序列已被成功提交到GenBank,序列接收号为EU422984)。核苷酸序列比对结果表明,水牛α-乳清蛋白基因与报道的奶牛该基因的核苷酸序列同源性为97.53%。水牛α-乳清蛋白成熟肽的氨基酸序列与奶牛相比有两个氨基酸的差异。与奶牛相比,水牛α-乳清蛋白基因5′调控区发生了多处插入突变和碱基替换突变,这些插入和替换突变可能与水牛乳汁中α-乳清蛋白的高水平表达有关。

水牛α-乳清蛋白基因部分序列的测定与分析

根据奶牛α-乳清蛋白基因序列设计引物,用PCR方法扩增并克隆了包含水牛(Bubalusbubalis)α-乳清蛋白基因的5′侧翼序列(709bp)和第1外显子(160)、第1内含子(337bp)和部分第2外显子(73bp)的序列。将该序列与牛的相应序列进行比较表明,尽管具有非常高的同源性(97.6%),但仍然存在一些碱基差异,这些碱基差异导致了一些转录调控因子识别序列的产生或消失以及转录调控因子识别位点之间的距离的变化,这可能是导致这两个物种中该基因表达存在明显表达差异的原因之一。

牦牛α-乳清蛋白基因5′-非翻译区部分序列测定及PCR-RFLP分析

用PCR方法扩增了麦洼牦牛α-乳清蛋白基因5′-非翻译区的部分序列.该序列与普通牛的相应序列具有很高的同源性(98.1℅),但存在8个碱基差异,碱基突变类型包括1个缺失,5个转换和2个颠换.应用PCR-RFLP方法分析了麦洼牦牛和九龙牦牛α-乳清蛋白基因-1689位单碱基的多态性,结果在该位点没有检测到多态性.

PCR检测牛β-乳球蛋白-tPA转基因鼠

转基因鼠的检测是小鼠乳腺生物反应器制备中的关键一步。针对牛 β 乳球蛋白 (BLG) tPA转基因鼠系 ,设计成功一对引物扩增牛BLG上第三内含子与第四外显子之间 30 0bp片段 ,成功建立了转基因鼠的快速筛选方法 ,PCR检测快速灵敏 ,结果准确可靠。共筛选出

植物化的猪α-乳清蛋白基因人工合成

根据猪α-乳清蛋白基因 c DNA序列设计了多对特异性引物 ,采用循环 PCR方法人工合成了植物化的猪α-乳清蛋白基因编码区 (398bp)并对该 PCR产物进行测序。DNA序列测定结果表明 ,采用循环 PCR法扩增的产物是预期的猪 α-乳清蛋白基因编码区 ,该植物化的猪 α-乳清蛋白基因编码区可以用于植物转化 ,为猪 α-乳清蛋白基因转基因植物研究和在转基因植物中进行动物基因表达研究奠定了基础。

β-酪蛋白A2A2基因型奶牛在黑龙江省某牛场中的分布及泌乳性能

为探究β-酪蛋白A2A2基因型奶牛在牛群中的分布及泌乳性能,本研究对黑龙江省某规模化奶牛场第1胎次314头荷斯坦牛的血液样本中β-酪蛋白基因进行测序和分型检测;比较β-酪蛋白A1/A2基因型奶牛的分布规律及泌乳性能。结果表明:牛群中A1A1基因型频率为18.97%,A1A2基因型频率为48.41%,A2A2基因型频率为32.80%,A1基因频率为42.99%,A2基因频率为57.01%;β-酪蛋白不同基因型(A1A1、A1A2和A2A2)奶牛的泌乳量、乳脂和乳蛋白率等泌乳指标差异不显著。