人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定

目的构建人星状病毒非结构蛋白3（non．structureproteinla／3，nsPla／3）基因酵母双杂交诱饵重组质粒，电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla／3编码的基因序列，定向插入到穿梭表达载体pGBKT7改造后的pGBST7中，测序确定无误后将其电转化到Y2HGold酵母感受态细胞中，对细胞特性即nsPla／3一pGBST7诱饵质粒表达产物的毒性和报告基因自激活作用进行鉴定。结果测序结果表明诱饵重组质粒构建正确，阅读框无误。电转化酵母后，其表达产物对酵母细胞无毒性作用，对报告基因亦无激活作用。结论成功构建了用于酵母双杂交的酵母转化子，为研究nsPla／3蛋白与宿主细胞具体作用的靶蛋白和HAstV在细胞内的复制机制奠定了基础。