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人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定
被引量:
1
1
作者
李攀
崔成成
+3 位作者
杨思达
黄芬
曾韦锟
井申荣
《医学分子生物学杂志》
CAS
2014年第3期139-143,共5页
目的构建人星状病毒非结构蛋白3(non.structureproteinla/3,nsPla/3)基因酵母双杂交诱饵重组质粒,电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla/3编码的基因序列,定向插入到穿梭表达载体pG...
目的构建人星状病毒非结构蛋白3(non.structureproteinla/3,nsPla/3)基因酵母双杂交诱饵重组质粒,电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla/3编码的基因序列,定向插入到穿梭表达载体pGBKT7改造后的pGBST7中,测序确定无误后将其电转化到Y2HGold酵母感受态细胞中,对细胞特性即nsPla/3一pGBST7诱饵质粒表达产物的毒性和报告基因自激活作用进行鉴定。结果测序结果表明诱饵重组质粒构建正确,阅读框无误。电转化酵母后,其表达产物对酵母细胞无毒性作用,对报告基因亦无激活作用。结论成功构建了用于酵母双杂交的酵母转化子,为研究nsPla/3蛋白与宿主细胞具体作用的靶蛋白和HAstV在细胞内的复制机制奠定了基础。
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关键词
人星状病毒
nsP1a/3基因
酵母双杂交
转化子特性
原文传递
题名
人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定
被引量:
1
1
作者
李攀
崔成成
杨思达
黄芬
曾韦锟
井申荣
机构
昆明理工大学医学院
出处
《医学分子生物学杂志》
CAS
2014年第3期139-143,共5页
基金
国家自然科学基金(No.31360619,31160193),云南省应用基础研究面上项目(No.2010ZC055,2012FB135)
文摘
目的构建人星状病毒非结构蛋白3(non.structureproteinla/3,nsPla/3)基因酵母双杂交诱饵重组质粒,电转化酵母感受态细胞后鉴定酵母转化子特性。方法聚合酶链反应扩增人星状病毒nsPla/3编码的基因序列,定向插入到穿梭表达载体pGBKT7改造后的pGBST7中,测序确定无误后将其电转化到Y2HGold酵母感受态细胞中,对细胞特性即nsPla/3一pGBST7诱饵质粒表达产物的毒性和报告基因自激活作用进行鉴定。结果测序结果表明诱饵重组质粒构建正确,阅读框无误。电转化酵母后,其表达产物对酵母细胞无毒性作用,对报告基因亦无激活作用。结论成功构建了用于酵母双杂交的酵母转化子,为研究nsPla/3蛋白与宿主细胞具体作用的靶蛋白和HAstV在细胞内的复制机制奠定了基础。
关键词
人星状病毒
nsP1a/3基因
酵母双杂交
转化子特性
Keywords
human astrovirus
nsPla/3 gene
yeast two-hybrid
transformant characteristics
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人星状病毒非结构蛋白酵母双杂交诱饵表达载体构建及酵母转化子特性鉴定
李攀
崔成成
杨思达
黄芬
曾韦锟
井申荣
《医学分子生物学杂志》
CAS
2014
1
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