目的提取并培养小鼠骨骼肌内肌源性干细胞（MDSCs），观察其在Toll样受体4（TLR4）激活后，对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的骨骼肌纤维化作用的影响。方法细胞培养：采用差速贴壁法获得小鼠肌源性干细胞，传代培养。所得细胞分为3...目的提取并培养小鼠骨骼肌内肌源性干细胞（MDSCs），观察其在Toll样受体4（TLR4）激活后，对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的骨骼肌纤维化作用的影响。方法细胞培养：采用差速贴壁法获得小鼠肌源性干细胞，传代培养。所得细胞分为3组，A组作为阴性对照，B组在培养液中加入重组人TGF-β1（rhTGF-β1），C组加入重组人TGF-β1和TLR-4激动剂热休克蛋白60（Hsp60）。上述各组细胞培养3 d后，分别行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、免疫荧光染色。检测各组细胞核因子（NF）-κB表达差异，明确B组细胞TLR-4是否被激活，再通过比较各组MDSCs在TLR-4激活后结缔组织生长因子（CTGF）和Ⅰ型胶原的表达水平。动物实验：取雄性小鼠24只（体重15～18 g），随机分为D、E、F 3组（每组8只）。每周一分别于左侧腓肠肌内侧头注射生理盐水（阴性对照）、rhTGF-β1、rhTGF-β1加Hsp60混合溶液，连续4周。第28天切取左侧腓肠肌内侧头测量肌湿重，Von Geison染色比较肌肉组织纤维化程度。结果细胞培养：RT-PCR测定A、B、C 3组所得核转录因子κB（NF-κB）相对表达量分别为：0.852±0.121、0.987±0.084、1.304±0.171（P=0.031）。CTGF相对表达量分别为：0.756±0.205、0.977±0.188、1.308±0.302（P=0.022）。Ⅰ型胶原相对表达量分别为：0.767±0.148、0.998±0.138、1.261±0.327（P=0.016）。Western blot测定A、B、C 3组NF-κB与内参的吸光度比值依次为：0.784±0.133、0.887±0.066、0.994±0.171（P=0.026）。CTGF与内参的吸光度比值依次为：0.644±0.125、0.863±0.109、0.998±0.512（P=0.018）。Ⅰ型胶原与内参的吸光度比值依次为：0.347±0.133、0.761±0.086、0.868±0.167（P=0.045）。与Western blot结果相对应，免疫荧光染色结果显示在A、B、C 3组CTGF和Ⅰ型胶原的表达依次增强，差异有统计学意义（P=0.025，P=0.012）。动物实验：D、E、F3组测得腓肠肌内侧头湿重值分别为（0.015±0.002）、（0.014±0.002）、（0.012±0.003） g，3组所测值依次降低，差异有统计学意义（P=0.037）。PD vs. E=0.033, PD vs. F=0.029, PE vs. F=0.016。D、E、F 3组Von Geison染色测得腓肠肌胶原纤维累积光密度比值分别为100.8±10.3、112.7±11.1、131.9±12.5。3组所测值依次升高，总体差异有统计学意义（P=0.013，PD vs. E=0.041, PD vs. F=0.027, PE vs. F=0.010）。结论小鼠骨骼肌肌源性干细胞表面TLR-4激活可促进TGF-β1介导的骨骼肌纤维化进程。展开更多
文摘目的探讨腺病毒介导的转化生长因子β-1(TGF-β1)对肾癌细胞凋亡的诱导作用。方法将肾癌细胞系786-0细胞培养后分实验组及对照组,实验组以腺病毒为载体将TGF-β1转染,对照组未转染,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果实验组的TGF-β1 m RNA以及蛋白的表达明显增强;实验组24、36、48、60、72 h的凋亡率分别为(7.58±0.02)%、(8.55±0.13)%、(13.49±0.25)%、(15.54±0.25)%、(16.58±0.27)%,与对照组细胞各时相点比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TGF-β1能够诱导786-0细胞的凋亡。
文摘目的提取并培养小鼠骨骼肌内肌源性干细胞（MDSCs），观察其在Toll样受体4（TLR4）激活后，对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的骨骼肌纤维化作用的影响。方法细胞培养：采用差速贴壁法获得小鼠肌源性干细胞，传代培养。所得细胞分为3组，A组作为阴性对照，B组在培养液中加入重组人TGF-β1（rhTGF-β1），C组加入重组人TGF-β1和TLR-4激动剂热休克蛋白60（Hsp60）。上述各组细胞培养3 d后，分别行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、免疫荧光染色。检测各组细胞核因子（NF）-κB表达差异，明确B组细胞TLR-4是否被激活，再通过比较各组MDSCs在TLR-4激活后结缔组织生长因子（CTGF）和Ⅰ型胶原的表达水平。动物实验：取雄性小鼠24只（体重15～18 g），随机分为D、E、F 3组（每组8只）。每周一分别于左侧腓肠肌内侧头注射生理盐水（阴性对照）、rhTGF-β1、rhTGF-β1加Hsp60混合溶液，连续4周。第28天切取左侧腓肠肌内侧头测量肌湿重，Von Geison染色比较肌肉组织纤维化程度。结果细胞培养：RT-PCR测定A、B、C 3组所得核转录因子κB（NF-κB）相对表达量分别为：0.852±0.121、0.987±0.084、1.304±0.171（P=0.031）。CTGF相对表达量分别为：0.756±0.205、0.977±0.188、1.308±0.302（P=0.022）。Ⅰ型胶原相对表达量分别为：0.767±0.148、0.998±0.138、1.261±0.327（P=0.016）。Western blot测定A、B、C 3组NF-κB与内参的吸光度比值依次为：0.784±0.133、0.887±0.066、0.994±0.171（P=0.026）。CTGF与内参的吸光度比值依次为：0.644±0.125、0.863±0.109、0.998±0.512（P=0.018）。Ⅰ型胶原与内参的吸光度比值依次为：0.347±0.133、0.761±0.086、0.868±0.167（P=0.045）。与Western blot结果相对应，免疫荧光染色结果显示在A、B、C 3组CTGF和Ⅰ型胶原的表达依次增强，差异有统计学意义（P=0.025，P=0.012）。动物实验：D、E、F3组测得腓肠肌内侧头湿重值分别为（0.015±0.002）、（0.014±0.002）、（0.012±0.003） g，3组所测值依次降低，差异有统计学意义（P=0.037）。PD vs. E=0.033, PD vs. F=0.029, PE vs. F=0.016。D、E、F 3组Von Geison染色测得腓肠肌胶原纤维累积光密度比值分别为100.8±10.3、112.7±11.1、131.9±12.5。3组所测值依次升高，总体差异有统计学意义（P=0.013，PD vs. E=0.041, PD vs. F=0.027, PE vs. F=0.010）。结论小鼠骨骼肌肌源性干细胞表面TLR-4激活可促进TGF-β1介导的骨骼肌纤维化进程。
