瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子-βⅠ、Ⅱ型受体的表达及调控

目的 :了解瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子 (Transforminggrowthfactor ,TGF) βⅠ、Ⅱ型受体的表达及TGF β1 、β3对其的影响。方法 :体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)和正常皮肤成纤维细胞 (NFB) ,利用免疫组化及计算机图象分析系统测定TGF βⅠ、Ⅱ型受体含量。 结果 :KFB胞浆内阳性信号明显强于NFB (P <0 0 5 ) ;经TGF β1 、β3处理组胞浆内阳性信号差别均不明显 (P >0 0 5 )。结论 :KFB存在高表达的TGF βⅠ、Ⅱ型受体 ;TGF β1 、β3均能促进KFBTGF βⅠ。

截短型转化生长因子-βⅡ型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达

目的 研究截短型转化生长因子 -β(TGF-β) 型受体在皮肤成纤维细胞的过度表达对 TGF-β1 自分泌的抑制作用。 方法 组织块法体外培养正常皮肤成纤维细胞 ,加入重组人 (rh) TGF- β1 (5ng/ ml)或含截短型 TGF- β 型受体基因的重组腺病毒 (50 pfu/ cell) ,并用 Northern印迹观察其对 TGF-β1 的基因调控。 结果 rh TGF-β1 能上调TGF-β1 和 I型前胶原的基因表达。截短型 TGF-β 型受体的过度表达能减少细胞 TGF-β1 的基因表达。 结论 截短型TGF- β 型受体的过度表达可以通过阻断 TGF- β1 的信号转导来抑制皮肤成纤维细胞 TGF- β1 的自分泌。

一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

克隆人源的截短型转化生长因子βⅡ型受体(tTGF-βRⅡ),成功构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。采用PCR技术扩增得到目的基因tTGF-βRⅡ,插入原核表达载体pGEX4T3的相应位点,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高可溶性表达的重组蛋白,重组蛋白GST-tTGF-βRⅡ经Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化后,再经凝血酶酶切,然后经Glutathione-Sepharose4B纯化获得目的蛋白tTGF-βRⅡ,SDS-PAGE分析表明:可以通过Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化得到GST-tTGF-βRⅡ,其分子量约37.0kDa,和目的蛋白tTGF-βRⅡ,分子量为11.0kDa。Western blot结果显示GST-tTGF-βRⅡ和tTGF-βRⅡ为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得tTGF-βRⅡ目的蛋白,对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好的抑制作用。

转化生长因子β_1Ⅱ型受体CA重复序列基因在人正常皮肤和瘢痕疙瘩中的表达

瘢痕疙瘩的生物学特性类似于肿瘤。最近研究表明，转化生长因子β1Ⅱ型受体（transforming growth factor—β1 receptor Ⅱ，TβRⅡ）是一种新的抑癌基因，而肿瘤细胞中最常见的是该基因表达异常。本研究主要是通过改变TβRⅡ基因突变的热点CA重复序列，以检测瘢痕疙瘩成纤维细胞是否存在与肿瘤细胞同样的基因突变。

应用噬菌体随机12肽库筛选TβR Ⅱ特异性序列

目的从噬菌体随机12肽库中筛选TGF-β1Ⅱ型受体(TGF-beta receptorⅡ,TβRⅡ)的特异性序列,评估其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用。方法以人TGF-β1单克隆抗体为靶,在噬菌体随机12肽库中进行4轮生物筛选;应用ELISA法挑选结合活性较好的单克隆噬菌体,进行DNA序列分析;MTT法评估TGF-β1单克隆噬菌体对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学效应。结果测序共获得5种类似于TβRⅡ的特异性序列。MTT结果显示其中有3种噬菌体模拟肽能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结论具有TβRⅡ特异性序列的噬菌体模拟肽能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。