活血利水复方对自发性高血压大鼠转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路介导下游结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及血管重塑的影响

目的:基于转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路探讨活血利水中药复方对自发性高血压大鼠血管重塑的保护作用及机制。方法:将自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组,Wistar大鼠作为空白组,每组10只。给予相应药物灌胃,4周后采用酶联免疫吸附试验方法检测血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量;采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达,并取冠状动脉组织进行马松三色染色。结果:与空白组比较,模型组血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物组大鼠干预后血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量不同程度降低(P<0.01)。其中,卡托普利组和活血利水复方高剂量组上述3项指标表达最低,与其他组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);卡托普利组和活血利水复方高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠主动脉转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,卡托普利组及活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。结论:活血利水中药复方可通过调控转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路及下游结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,降低C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态及血管重塑,其机制可能与降低转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白沉积有关。

LPS刺激对断奶仔猪肝脏形态、功能及转化生长因子β1/Smads通路的影响

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激后对断奶仔猪肝脏形态、功能和转化生长因子β1(TGF-β1)以及Smads通路的影响。选取18头21日龄、体重(7.09±0.9)kg杜×长×大断奶仔猪,随机分成3个处理,每个处理6头猪。预饲14 d后,腹膜注射100μg/kg BW的LPS,分别在注射前(0 h)、注射4 h和24 h后屠宰仔猪,取血浆和肝脏样品待测。结果表明:HE切片显示,与对照组(0 h)相比,LPS刺激4 h后肝细胞损伤严重,有明显炎性细胞浸润,出现大量坏死且细胞核溶解固缩。LPS刺激24 h后肝细胞核溶解固缩,较刺激4 h后损伤有所缓解。与对照组(0 h)相比,LPS刺激4 h后血浆中谷草转氨酶(AST)、谷草转氨酶和谷丙转氨酶比值(AST/ALT)、碱性磷酸酶(AKP)活性升高(P<0.001),LPS刺激24 h后血浆中AST、AST/ALT活性升高(P<0.001),AKP活性降低(P<0.05),ALT活性均无显著变化。肝脏中TGF-β1基因表达在刺激4 h和24 h后均升高(P<0.05);TGF-βR2在LPS刺激4 h后下降(P<0.001);Smad3在LPS刺激4h后下降(P<0.05);Smad4在LPS刺激4h后有上升趋势(P<0.10)。由此可见,在LPS刺激后仔猪肝脏受损,TGF-β1/Smads信号通路被迅速激活参与肝脏的损伤修复。

长链非编码RNA 00941、微小RNA-145表达及转化生长因子β1/Smad通路相关因子在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究长链非编码RNA00941(Linc00941)、微小RNA-145(miR-145)表达及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)通路相关因子在胃癌组织中的表达与意义。方法:选取收治的51例胃癌患者,手术治疗后经病理学检查确诊。收集其胃癌组织及其癌旁组织,比较其中Linc00941、miR-145及TGF-β1/Smad通路相关因子表达差异;提取患者的胃癌组织细胞进行组织培养,并对其进行Linc00941、miR-145基因的转染、沉默,分析其对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较较,胃癌组织患者的Linc00941及其信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。胃癌组织中的TGF-β1、转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)及Smad2/3均较癌旁组织显著降低(均P<0.05)。NC组、Linc00941转染组及Linc00941沉默组三组间吸光值(A值)及凋亡率两两比较均存在统计学差异(均P<0.05),Linc00941沉默组在培养24、48、72 h时的A值低于NC组,凋亡率高于NC组;Linc00941转染组各时间的A值高于NC组,凋亡率低于NC组(均P<0.05)。与NC组比较较,Linc00941沉默组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,Linc00941转染组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组培养24、48、72 h的A值均降低,凋亡率升高;miR-145沉默组的A值升高,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,miR-145沉默组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。结论:在胃癌组织中,Linc00941及其mRNA相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低,TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、TGF-βRⅡ及Smad2/3表达降低,且Linc00941、miR-145表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

自体动静脉内瘘狭窄与转化生长因子-β1/Smad4信号通路的关系

目的探讨自体动静脉内瘘(AVF)狭窄与转化生长因子(TGF)-β1/Smad4信号通路的关系。方法选取2017年10月至2020年2月于贵州医科大学附属医院行AVF的60例患者为观察组,选取同期50例因外周血管疾病行血管切除的患者为对照组。比较两组患者的年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血全段甲状旁腺激素(iPTH)、β2微球蛋白、C反应蛋白(CRP)水平、Smad4及TGF-β1蛋白水平。结果两组患者年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血iPTH、β2微球蛋白、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组Smad4蛋白表达量低于对照组,TGF-β1蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1、Smad4在透析患者AVF狭窄组织中异常表达,并在静脉内膜增生引起瘘管狭窄的过程中发挥重要作用。

益消方经转化生长因子β1信号通路干预糖尿病合并脂肪肝的实验研究

目的:探索益消方对糖尿病合并脂肪肝的影响和作用机制。方法:观察组为12周龄雄性自发糖尿病(KKAy)小鼠,按照随机数字表法随机分为模型组、中药组(益消方干预)、西药组(氯沙坦干预);对照组为同周龄雄性近交系(C57BL/6J)小鼠。干预周期为12周。观察干预前后血糖、血脂-、肝功能变化,肝脏组织进行病理染色,检测肝脏组织转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))信号通路蛋白和信使核糖核酸(mRNA)的变化。结果:与模型组比较,益消方干预8周体质量、肝重指数显著降低(P<0.05,P<0.01),干预第4、8、12周空腹血糖显著降低(P<0.01),干预8周胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶水平降低(P<0.05,P<0.01)。病理形态方面益消方干预4周脂肪变性评分下降(P<0.05)。益消方干预12周后,TGF-β_(1)及其信号蛋白、mRNA的表达均显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论:益消方可显著改善KKAy小鼠的肥胖和糖脂代谢紊乱,调节TGF-β_(1)信号通路蛋白和基因表达,减轻肝脏脂肪变性。

有氧运动调节转化生长因子β/Smad通路缓解db/db糖尿病小鼠的肝脏纤维化

背景:有氧运动可抑制糖尿病小鼠肝纤维化,但具体作用机制尚未阐明。目的:基于转化生长因子β/Smad信号通路探讨有氧运动改善db/db小鼠肝纤维化的作用机制。方法:将8周龄雄性db/db小鼠和年龄匹配的m/m小鼠随机分为m/m对照组、m/m+运动组、db/db对照组、db/db+运动组,每组10只,运动组小鼠接受12周有氧运动。运动结束后检测各组小鼠空腹血糖,进行葡萄糖耐量测试和胰岛素耐量测试;摘取肝脏计算肝脏指数,摘眼球取血检测生化指标;苏木精-伊红染色、油红O染色和Masson染色观察小鼠肝组织的病理变化,免疫组化检测肝组织中转化生长因子β1、p-Smad3的表达;Western blot检测肝组织中转化生长因子β1、Smad3、p-Smad3、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平。结果与结论:①与m/m组和m/m+运动组小鼠相比,db/db组小鼠体质量、肝质量、肝脏指数、空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白和肌酶水平均显著升高(P<0.01);高密度脂蛋白水平显著降低(P<0.01);转化生长因子β1、p-Smad3、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著升高(P<0.01);葡萄糖、胰岛素耐量测试的曲线下面积显著增加(P<0.01);肝组织病理染色显示大量炎症细胞浸润,脂滴增多,明显纤维化;②与db/db组相比,db/db+运动组小鼠体质量、肝质量、肝脏指数、空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白和肌酶水平显著降低(P<0.05或P<0.01);高密度脂蛋白水平显著升高(P<0.05);转化生长因子β1、p-Smad3、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);此外,糖耐量、胰岛素耐量测试的曲线下面积明显减少(P<0.01,P<0.05),肝脏病理损伤得到明显改善;③结果表明,有氧运动有效减轻了糖尿病小鼠肝纤维化,其机制可能与调控转化生长因子β/Smad信号通路有关。

妊娠期高血压患者血清转化生长因子-β1和Smad3、Smad4浓度与临床意义

目的探讨妊娠期高血压(hypertension during pregnancy,HDP)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad3、Smad4的浓度与临床意义。方法选取河北中石油中心医院妇产科2021年1月至2022年8月诊治的96例HDP患者作为研究组,同时选取96名在本院产检且一般资料与HDP患者相匹配的正常孕妇作为对照组。采用Logistic回归分析影响孕妇发生HDP的相关因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析TGF-β1和Smad3、Smad4对HDP的诊断效能。结果两组患者年龄、孕周、孕次、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度及有原发性高血压(高血压)家族史的患者所占比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有高血压家族史、TGF-β1、Smad3、Smad4浓度升高均为孕妇发生HDP的危险因素(P<0.05)。血清TGF-β1、Smad3、Smad4诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.720、0.730,而三者联合诊断的曲线下面积为0.916,三者联合优于血清TGF-β1、Smad3、Smad4各自单独诊断(Z三者联合-TGF-β1=6.864、Z三者联合-Smad3=5.955、Z三者联合-Smad4=5.907,P均<0.001),其敏感度和特异度分别为82.29%、78.50%。结论血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度与HDP的发生密切相关,三者联合检测对HDP具有较高的诊断价值。

参附汤联合茯苓四逆汤治疗心阳亏虚型慢性心力衰竭患者的疗效及对其转化生长因子β1、Smad同源物3表达的影响

目的探讨参附汤联合茯苓四逆汤治疗心阳亏虚型慢性心力衰竭患者的疗效及对其转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、Smad同源物3(Smad homolog 3,Smad3)表达的影响。方法选取2020年1月—2023年1月期间北京市怀柔区中医医院收治的90例心阳亏虚型慢性心力衰竭患者,按随机数字表法分为对照组和研究组,每组各45例。对照组予常规西医治疗,研究组在对照组的基础上加用参附汤合茯苓四逆汤治疗。4周为1个疗程,两组患者均治疗4个疗程。观察比较两组患者治疗前后心功能[左室舒张末期内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左室收缩末期内径(Left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEEF)、每搏输血量(Blood transfusion volume per stroke,SV)]、心衰因子[心型脂肪酸结合蛋白(Heart-type Fatty Acid Binding Protein,H-FABP)、脑钠肽(Natriuretic peptide,BNP)]、心肌纤维化指标[Ⅰ型前胶原氨基端前肽(Type I procollagen amino terminal peptide,PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端末肽(TypeⅢprocollagen amino terminal peptide,PⅢNP)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin IcTnI)]、TGF-β1、Smad3表达量变化,评价活动耐力、心衰评分、明尼苏达评分、中医证候积分,并统计临床疗效及主要心血管不良事件(MACE)发生情况。结果治疗后两组患者心功能LVEDD、LVESD指标均较治疗前降低,LVEF、SV指标较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心功能LVEDD、LVESD指标明显低于对照组,LVEF、SV指标明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者心衰因子H-FABP、cTnI、BNP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心衰因子H-FABP、cTnI、BNP水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者心肌纤维化PICP、PⅢNP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心肌纤维化PICP、PⅢNP水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者TGF-β1、Smad3表达量均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组TGF-β1、Smad3表达量均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者活动耐力较治疗前升高,心衰、明尼苏达评分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组活动耐力评分明显高于对照组,心衰、明尼苏达评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者中医证候积分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组中医证候积分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后研究组临床总有效率95.56%(43/45)明显高于对照组80.00%(36/45),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,研究组MACE发生率4.44%(2/45)明显低于对照组17.78%(8/45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附汤合茯苓四逆汤可显著改善心阳亏虚型慢性心力衰竭患者临床症状及体征,降低TGF-β1、Smad3表达,抑制心肌纤维化,促进心脏功能恢复,效果理想。

疏肝平喘方通过转化生长因子-β_(1)/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的:阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)/叉头框蛋白P3(Foxp3)以及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的干预作用,对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad信号通路的影响。方法:建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)和TGF-β_(1)水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果:疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β_(1),与地塞米松比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当(均P>0.05);Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当(均P>0.05)。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β_(1)/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。

湿生扁蕾呫吨酮联合益生菌调控TGF-β1/Smads通路及炎性因子干预大鼠结肠炎癌转化

目的基于TGF-β1/Smads通路及炎性因子探讨湿生扁蕾呫吨酮(GPX)联合益生菌干预结肠炎癌转化的机制。方法将90只大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组[饮用右旋糖酐硫酸钠(DSS)3 d]和给药组。其中,模型组又分为炎症期组、炎癌前期组[注射二甲基肼(DMH)4周]、炎癌中期组(注射DMH 13周)、炎癌末期组(注射DMH 21周);给药组是在炎癌末期组的基础上边建模边给药且根据所给药物再分组,即饮用DSS 3 d,在饮用DSS的第1天就开始灌胃各组药物,每日1次,持续8周,分别为GPX 69.3 mg/kg(GPX组)、益生菌400 mg/kg(益生菌组)、GPX 69.3 mg/kg+益生菌400 mg/kg(联合组)、沙利度胺13.5 mg/kg(沙利度胺组)。对各组疾病活动指数(DAI)、结肠长度和湿质量指数进行比较;观察大鼠结肠瘤体特征;HE染色观察结肠病理变化;Western blot和酶联免疫吸附试验分别检测转化生长因子(TGF)-β1,Smad4,Smad7和白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果与炎癌末期组比较,各给药组结肠长度增加,结肠壁厚、湿质量指数与瘤体最大直径降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,Smad7、IL-6、TNF-α水平降低,GPX组与联合组DAI得分降低(P<0.05),GPX组、益生菌组和联合组的肠黏膜层结构和形态改善,结肠隐窝结构与杯状细胞数量增加;与益生菌组和GPX组比较,联合组结肠壁厚、结肠湿质量指数、瘤体数量降低,TGF-β1和Smad4蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论GPX和益生菌联用可抑制结肠炎癌转化,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smads通路和抑制IL-6、TNF-α表达有关。

长链非编码RNA SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1/Smads通路的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。方法:运用反转录PCR(RT-PCR)检测lncRNA SIL在人肺泡上皮细胞株A549、HEPApiC、肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)以及被肺炎链球菌R6感染的A549、HEPApiC、AECⅡ细胞的表达,显示其表达在R6感染的A549细胞中最高,故应用A549细胞进行后续实验。将A549细胞随机分为A549组(常规培养)、A549+R6组(用R6感染A549细胞)、lncRNA SIL mimic组(在A549细胞中转染lncRNA SIL mimic,并用R6感染细胞)和lncRNA SIL siRNA组(在A549细胞中转染lncRNA SIL siRNA,并用R6感染细胞)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达,并设立TGF-β1/Smads通路抑制剂组进行对照。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组炎症因子表达。结果:与A549组比较,A549+R6组lncRNA SIL表达升高(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组lncRNA SIL表达升高,lncRNA SIL siRNA组表达降低(均P<0.05)。与lncRNA SIL mimic组比较,lncRNA SIL siRNA组lncRNA SIL表达降低(P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组不同时间细胞增殖率降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组不同时间细胞增殖率降低,lncRNA SIL siRNA组不同时间细胞增殖率升高(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组细胞凋亡率增加,lncRNA SIL siRNA组细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL siRNA组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达降低,Smad 6、Smad 7蛋白表达升高(均P<0.05)。lncRNA SIL siRNA组与抑制剂组各指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与A549组比较,A549+R6组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(IL-1β)、IL-6水平升高(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,lncRNA SIL siRNA组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(均P<0.05)。结论:肺炎链球菌感染后,沉默lncRNA SIL可逆转肺上皮细胞凋亡增加及增殖减少的情况,并抑制TGF-β1/Smads通路激活,减少炎症因子释放,从而抑制炎性反应。

紫草素调控转化生长因子β_(1)/Smad信号通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞上皮-间充质转化和迁移能力

目的 探讨紫草素对转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^(-1)作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β_(1)水平。(2)设细胞对照组、TGF-β_(1)9 pmol·L^(-1)组、TGF-β_(1)+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^(-1)组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^(-1)作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF-β_(1)水平。(2)与细胞对照组比较,TGF-β_(1)组A549划痕愈合百分率和迁移细胞数明显增加(P<0.01),N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、Smad4、PAI-1蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白连接区磷酸化水平显著升高(P<0.05,P<0.01),E-钙黏蛋白水平显著降低(P<0.01);与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^(-1)组上述指标的变化被逆转(P<0.05,P<0.01)。结论 紫草素通过调控TGF-β_(1)/Smad信号通路而抑制TGF-β_(1)诱导的A549细胞EMT及迁移能力。

重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

转化生长因子β_1/Smads通路在急性心肌梗死后心肌重塑中的作用及祛瘀生新法的干预研究

目的通过研究祛瘀生新中药对转化生长因子(TGF)-β1/Smads通路的影响,探讨祛瘀生新法对急性心肌梗死后心肌重塑的效应机制。方法清洁级雄性Wistar大鼠50只随机分为正常组、假手术组、模型组、中药组、西药组,每组10只。中药组大鼠术前3 d给药,1次/d。7 d后,检测外周血骨髓间充质干细胞(BMSCs)含量,实时荧光定量RT-PCR检测心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表达,并观察心肌组织HE染色结果及免疫组化检测心肌c-kit细胞数。结果模型组较假手术组心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA表达均增加(P<0.05),Smad7 mRNA表达降低(P<0.05)。中药组心肌组织TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA表达降低,Smad7 mRNA表达增加,中药组及西药组较模型组c-kit细胞数明显增多,并能减轻心肌组织的病理损伤。中药组与西药组比较,TGF-β1mRNA、Smad3 mRNA和Smad7 mRNA表达无显著性差异(P>0.05)。结论祛瘀生新法能有效抑制急性心肌梗死后心肌重塑。

特异性免疫治疗对哮喘大鼠转化生长因子-β_1/Smad信号通路的影响

目的:探讨特异性免疫治疗(specific immunotherapy,SIT)对哮喘大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)及信号转导分子Smads表达的影响。方法:40只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机均分成正常对照组、哮喘组、SIT对照组和SIT治疗组等4组,每小组10只。通过卵蛋白(OVA)雾化吸入的方法对致敏大鼠进行SIT,用双抗体夹心ELISA法测定血清和BALF中TGF-β1浓度,免疫组化方法检测肺组织TGF-β1以及磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、Smad7蛋白表达水平。结果:哮喘组和SIT治疗组的血清、BALF中TGF-β1浓度均分别高于正常对照组,但SIT治疗组与哮喘组相比,两者的TGF-β1浓度则均有所下降;哮喘组肺组织TGF-β1和P-Smad2/3蛋白表达较正常对照组和SIT治疗组增高,而Smad7蛋白表达下降。结论:SIT通过抑制哮喘大鼠体内TGF-β1和P-Smad2/3的过度表达及上调Smad7,从而阻断TGF-β1的胞内信号转导,可在一定程度上减轻哮喘大鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病转化生长因子-β_1/Smad4通路的调控作用

目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)转化生长因子-β_1(TGF-β_1) Smad4通路的调控作用。方法将90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、青霉胺组(125 mg·kg^(-1))及刺山柑总生物碱小(225 mg·kg^(-1))、中(450 mg·kg^(-1))、大(900 mg·kg^(-1))剂量组。除正常对照组外,其余5组小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立SSc模型,成模后受试药组小鼠背部外敷刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组给予青霉胺灌胃,正常对照组、模型对照组背部外敷不含药基质,每天1次,连续60 d。末次给药后,Western blotting检测皮肤TGF-β_1表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠皮肤组织激活素受体样激酶1(ALK1)、Smad4及核因子-κB (NF-κB)水平。结果与模型对照组比较,刺山柑总生物碱各剂量组TGF-β_1及刺山柑总生物碱大剂量组ALK1和Smad4表达明显降低(P<0.05或P<0.01),皮肤NF-κB含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱能下调SSc小鼠TGF-β_1、ALK1与Smad4异常表达,对SSc小鼠TGF-β_1/Smad4通路有一定抑制作用。

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肝星状细胞转化生长因子-β_1/Smads通路的影响

目的通过研究川芎嗪对体外培养的血管紧张素Ⅱ诱导的肝星状细胞(HSC)转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads通路的作用,探讨其治疗肝纤维化的机制。方法对大鼠HSC使用血管紧张素Ⅱ(1×10^(-5)mol/L)及血管紧张素Ⅱ(1×10^(-5)mol/L)联合不同浓度的川芎嗪(0.04、0.20和1.00 mg/ml)干预48 h,活细胞计数法(CCK-8)检测各组细胞增殖水平的变化,实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测各组细胞TGF-β_1、Smad2、Smad4的m RNA及蛋白表达。结果血管紧张素Ⅱ明显促进HSC的增殖,同时上调该细胞TGF-β_1、Smad2、Smad4的m RNA及蛋白表达(P<0.01),而血管紧张素Ⅱ对HSC的诱导作用可被川芎嗪抑制(P<0.01),并呈现浓度依耐性。结论川芎嗪抗肝纤维化的机制之一可能是通过调控肝星状细胞TGF-β_1/Smads通路实现的。

布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β_1/Smad信号通路的影响

目的探讨布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β1(TGFβ-1)/Smad信号传导通路影响。方法30只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机均分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和布地奈德组(B组)等3组,每小组10只,用卵白蛋白(OVA)制备哮喘大鼠模型,通过早期布地奈德混悬液雾化吸入方式对急性哮喘模型大鼠进行干预,用双抗体夹心ELISA法测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1浓度,免疫组化方法检测肺组织TGF-β1以及磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、Smad7蛋白表达水平。结果C组的血清、BALF中TGF-β1浓度分别低于A组和B组,B组血清、BALF中TGF-β1浓度较A组下降;A组肺组织P-Smad2/3蛋白表达较C组和B组增高,而Smad7蛋白表达下降。结论布地奈德早期干预可抑制急性哮喘大鼠体内TGFβ-1和P-Smad2/3的过度表达及上调Smad7,从而阻断TGFβ-1的胞内信号转导,可在一定程度上减轻急性哮喘大鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展。