转化生长因子β2对人眼Tenon囊成纤维细胞中赖氨酰氧化酶家族表达的诱导作用

背景研究表明，转化生长因子β2（TGF-β2）促进Tenon囊成纤维细胞（TFs）的活化，在青光眼滤过术后结膜下纤维化过程中发挥作用，但其作用机制尚未完全明了。赖氨酰氧化酶家族（LOXs）与细胞外基质重塑有关，了解青光眼术后滤过泡的纤维化过程中TGF-β2与LOXs活化的关系对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的防治具有重要意义。目的观察TGF-β2对体外培养的人眼TFs中LOXs蛋白表达变化的影响。方法将培养的第4～8代人TFs分为正常对照组和不同质量浓度TGF-β2培养组，分别在细胞培养液中添加终质量浓度为2、4、8和16ng／ml TGF-β2继续培养24h，采用Western blot法测定不同质量浓度TGF-β2培养组细胞中LOXs蛋白表达的变化，确定最适TGF-β2刺激质量浓度。用4ng／ml TGF-β2分别处理培养的TFs6、12、24和48h，采用Western blot法测定各时间点细胞中LOXs蛋白表达的变化。采用细胞免疫荧光法分别检测正常对照组和4ng／ml TGF-β2培养组TFs中LOX蛋白的表达及其在细胞中的分布。结果Western blot法检测显示，正常对照组及2、4、8和16ng／ml TGF-β2培养组人TFs中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白的表达强度均随TGF-β2质量浓度的升高而增加，各组间细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3和LOXL4蛋白相对表达量的总体比较，差异均有统计学意义（F=37．338、13．438、31．067、11．767、15．167，均P〈0．01）。细胞中LOX、LOXL1、LOXL2、LOXL3及LOXL4蛋白相对表达量的升高呈TGF-β2剂量依赖性。正常对照组及4ng／ml TGF-β2刺激人TFs后6、12、24和48h组，细胞中LOXL2蛋白的相对表达量分别为0．68±0．07、1．09±0．10、1．32±0．07、1．50±0．06和1．89±0．12，其表达强度呈时间依赖性，总体比较差异有统计学意义（F=82．832，P=0．000）。正常对照组人TFs中LOX蛋白表达强度较弱，主要位于细胞质中，TGF-β2培养组细胞中LOX蛋白的表达强度明显强于正常对照组，且表达LOX蛋白的细胞增多。结论正常人TFs中可见LOXs呈低表达，TGF-β2以剂量和时间依赖的方式上调人TFs中LOXs蛋白的表达。这个结果为青光眼术后滤过泡纤维化的相关防治研究提供了实验依据。

肠型胃癌细胞中酪蛋白激酶2相互作用蛋白1与转化生长因子β_1表达的相关性

目的探讨酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)与转化生长因子β1(TGF-β1)在肠型胃癌细胞中表达的相关性。方法 Western blotting方法检测不同分化肠型胃癌细胞(高分化MKN28细胞、中分化SGC7901细胞和低分化BGC823、MKN45及AGS细胞)中CKIP-1与TGF-β1表达,Spearman相关性分析CKIP-1与TGF-β1表达相关性;分别构建过表达及干扰表达CKIP-1的人肠型腺癌MKN28细胞模型,Westernblotting方法检测各组细胞TGF-β1表达。结果与高分化胃癌MKN28细胞相比,中分化SGC7901细胞与低分化BGC823、MKN45及AGS细胞CKIP-1表达均降低、TGF-β1表达均升高(P <0.01);与中分化SGC7901细胞相比,低分化BGC823、MKN45及AGS细胞CKIP-1表达降低、TGF-β1表达升高(P <0.01);Spearman相关性分析显示不同分化肠型胃癌细胞中CKIP-1与TGF-β1表达负相关(r=-0.689 2,P <0.01)。与空白对照组相比,CKIP-1过表达组MKN28细胞TGF-β1表达下降(P <0.01),CKIP-1干扰表达组MKN28细胞TGF-β1表达增加(P <0.01)。结论肠型胃癌细胞中CKIP-1与TGF-β1蛋白表达负相关,CKIP-1蛋白可能通过负性上调TGF-β1表达后促进了肠型胃癌的恶性转化、发展及浸润转移。

转化生长因子-β_2对牛眼小梁细胞吞噬功能的影响

观察转化生长因子 β2 (transforming growth factor- β2 ,TGF- β2 )对体外培养牛眼小梁细胞吞噬功能的影响。体外培养牛眼小梁细胞经 0、 0 .32、 1.0 0、 3.2 0 ng/ m l TGF- β2 处理 2 4h后 ,加入乳胶微粒 ,2 4h后作瑞氏染色 ,光镜下数取相邻 2 0个细胞中的微粒数。结果发现 :0 .32、 1.0 0、 3.2 0 ng/ ml TGF- β2 可促进牛眼小梁细胞吞噬乳胶微粒 ,与对照组比较有显著差异 ;同时呈现明显的量效关系。提示 TGF- β2

孕激素调节人成骨细胞转化生长因子-β_1,β_2的表达

目的探讨孕激素对人成骨样细胞MG-63细胞株转化生长因子(TGF)-β1,TGF-β2表达的调节作用,验证孕激素治疗绝经后骨质疏松症(osteoporosis,OP)的假设机制。方法人成骨样细胞系MG-6购自美国培养物保存中心(ATCC号:CRL-1427);用无酚红的MEXX培养液培养,在细胞培养的不同时间,用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;放射免疫法测定骨钙素(BGP)含量。MG-63细胞用孕酮干预。ELISA检测MG-63细胞TGF-β1,TGF-β2蛋白质分泌。结果MG-63细胞分泌的ALP、孕酮促进MG-63细胞TGF-β1,TGF-β2蛋白质分泌呈剂量依赖性(t=10.232～109.454,P<0.001);1×10-9mol/L孕酮诱导12～24h促进TGF-β1,TGF-β2蛋白质分泌,呈时间依从性。结论孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF-β1,TGF-β2表达,促进成骨细胞增殖与分化、增强成骨功能及骨基质合成,促进骨形成。

转化生长因子β1在下颌骨牵引成骨过程中的作用

目的 :研究TGF β1在不同时期下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化 ,探讨其可能发挥的作用。 方法 :恒河猴 16只 ,10只行单侧下颌骨牵引 ,6只行双侧下颌骨牵引 ,采用下颌角部骨截开术 ,5d间歇期后以每天0 .5mm× 2次的速度牵引 ,共 15d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、12周时处死一组动物。将牵引区骨块制作脱钙石蜡切片 ,进行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :牵引完成后早期阶段 ,TGF β1阳性着色颗粒广泛分布于牵引区的纤维血管基质、成骨细胞及成软骨细胞中 ,尤其是在截骨断端的血肿区 ,TGF β1的阳性着色最强。在稳定期 ,牵引区TGF β1的阳性着色逐渐减弱 ,主要见于胶原纤维矿化、成骨细胞形成类骨质的区域 ,且主要位于血小板、血管内皮细胞及成骨细胞胞浆中。牵引完成后 12周 ,除骨髓腔中纤维血管基质可见少量TGF β1的阳性着色颗粒外 ,在骨外膜、骨基质及骨细胞内已见不到明显的TGF β1的阳性着色。结论 :TGF β1活跃参与了牵引区新骨的形成过程 ,它在刺激和诱导骨前体细胞及原始间充质细胞增殖分化 ,促进牵引区成骨细胞及血管内皮细胞增生方面可能发挥了重要作用。

转化生长因子β_1的生物学作用及应用进展

转化生长因子β1(TGF-β1)属于TGF-β家族,现已被证实与基因转录、创伤愈合、瘢痕化及纤维化等生物学过程有关。TGF-β1能使正常成纤维细胞的表型发生转化,改变成纤维细胞的细胞壁生长特性。TGF-β1可以制成多种剂型,既可作为外用溶液和注射剂直接应用于临床,也有报道将其制成凝胶剂、微球等缓控释剂型,延长其作用时间并增加其靶向性。目前其部分作用机制仍不完全明确,尚需要进一步的研究。

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。

转化生长因子-β1/Smads信号转导通路在慢性盆腔炎中的表达及调控作用

慢性盆腔炎是临床妇科常见的一种疾病,多因急性盆腔炎未彻底治愈发展而来,但更多的是由于起病缓慢,临床症状较轻,未能及时引起注意,诊治不及时,故而迁延为慢性。目前慢性盆腔炎的发病率、诊断率逐年升高,但治愈率较低,且尚无有效的抗炎药物。

肾复康对肾纤维化模型大鼠转化生长因子-β_1、Smad2、Smad7表达的影响

目的:评价肾复康对纤维化模型大鼠的疗效和对肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Smad2、Smad7表达的影响。方法:选取SD大鼠70只,完全随机分为假手术组、肾复康组及模型组,其中肾复康组及模型组均接受肾间质纤维模型制备,将造模第2天肾复康组接受不同剂量肾复康灌胃,对照组及假手术组接受同等体积的生理盐水灌胃,均干预21 d。干预结束收集各组24 h尿液,检测24 h尿蛋白(24 UP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平的变化,并断头取材,用苏木精-伊红(HE)染色评价各组肾组织的病理变化,免疫组化法检测各组肾组织TGF-β_1的变化,用Western blotting法检测Smad2、Smad7水平。结果:与假手术组比较,肾复康组及模型组24 UP、SCr及BUN水平明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与模型组比较,肾复康组24 UP、SCr及BUN水平有所下降,差异有统计学意义(P <0. 05),且随着肾复康剂量升高趋势更明显。与假手术组比较,肾复康组及对模型组肾组织病理学评分均明显升高,其中肾复康组评分低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。随着肾复康剂量的增加病理学评分逐渐下降;假手术组肾组织仅有少量TGF-β_1、Smad2表达,模型组Smad2、TGF-β1呈高表达,随着肾复康剂量的增加Smad2、TGF-β_1水平逐渐下降。造模后Smad7水平下降,肾复康干预后Smad7水平有所上调,并随着水平的增加而上调趋势更明显。结论:肾复康可明显改善肾间质纤维化模型大鼠病情,其作用机制可能与介导肾脏组织TGF-β_1、Smad2、Smad7有关。

黄芪桂枝五物汤对老年糖尿病肾病转化生长因子-β基因表达调控区甲基化的影响

目的:观察黄芪桂枝五物汤对老年糖尿病肾病(DN)的临床疗效,同时分析其对转化生长因子-β(TGF-β)基因表达调控区甲基化的影响。方法:选取2016年6月至2017年6月承德市中医院收治的老年DN患者90例,随机分成对照组和观察组,每组45例。2组患者均接受糖尿病教育、糖尿病饮食,观察组在此基础上加用黄芪桂枝五物汤,2组均以6周作为1个疗程,3个疗程后观察疗效、蛋白尿排泄率和TGF-β基因甲基化水平。结果:2组临床总有效率比较,观察组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后2组患者UAER均较治疗前改善,观察组改善的幅度更为明显(P<0.05)。治疗后2组的VEGF蛋白和mRNA表达均有所下降,其中观察组下降的趋势较对照组明显(P<0.05)。观察组TGF-β基因甲基化为(13.66±8.22)%,对照组组为(66.89±11.18)%,明显低于观察组(P<0.05)。结论:黄芪桂枝五物汤可有效治疗老年糖尿病肾病,其作用机制可能与降低TGF-β基因表达调控区甲基化水平有关。

丹参酮Ⅱ_A磺酸钠联合拉米夫定对慢性乙型肝炎转化生长因子-β_l及肝功能的影响

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠联合拉米夫定对慢性乙型肝炎转化生长因子-β1肝功能的影响。方法 将十堰市太和医院感染科2014年4月～2015年7月收治的380例慢性乙型肝炎患者分为观察治疗组、丹参酮ⅡA磺酸钠组、拉米夫定组、丹参酮＋拉米夫定组,检测采用不同治疗方案治疗后四组患者转化生长因子-β1TGF-β1及血清肝纤维化血清学指标：IV型胶原（c IV）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、透明质酸（HA）;肝微粒体细胞色素P450亚型酶（CYP2E1、CYPIA2、CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9）活性;肝功能[胆汁酸（TBA）、总胆红素（STB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰转移酶（GGT）]。结果 丹参酮＋拉米夫定组TGF-β1、LN、PC-Ⅲ、c IV、HA、CYP2E1、CYP3A4酶活性、STB、TBA、ALT、GGT、AST均有不同程度降低,总有效率达95.79%,与其它三组比较,P〈0.05。结论 丹参酮ⅡA磺酸钠联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效确切。

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β_2表达的抑制作用

目的 观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法 体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论 曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。

Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用

研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用。培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Westernblot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异。结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显著受到抑制。表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。

丹红软肝胶囊药物血清对肝星状细胞增殖的干预作用

目的观察丹红软肝胶囊含药血清对肝星状细胞(HSC)增殖及分泌的相关细胞因子的干预作用。方法 15只SD大鼠按随机数字法分为3组,即丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组和正常对照组,各5只,通过灌胃制备丹红软肝胶囊及复方鳖甲软肝片药物血清。将HSC-6细胞分为3组,分别加入含丹红软肝胶囊、复方鳖甲软肝片药物血清及正常小鼠血清的培养基,培养24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测HSC的增殖率,收集培养上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组吸光度(OD)值均低于正常血清对照组(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组HSC细胞增殖的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量与正常血清对照组比较均降低(P<0.01);丹红软肝胶囊组、复方鳖甲软肝片组培养上清中Ⅰ型胶原、TGF-β1的含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丹红软肝胶囊可抑制活化的HSC产生TGF-β1,并对HSC分泌胶原产生抑制作用,进而抑制HSC的增殖,这可能是其抗纤维化作用机制之一。

他汀类药物在糖尿病肾病防治中的作用

近年研究显示他汀类药物能够降低尿蛋白 ,延缓肾动脉硬化的进展 ,对肾脏有保护作用。目前认为这一作用除了通过降低血脂带来的间接益处外 ,他汀类药物还可抑制系膜细胞增殖 ,下调转化生长因子 β1 表达 ,从而减少细胞外基质蛋白沉积。其上述作用可能是通过抑制小G蛋白异戊二烯化从而影响早期基因产物、转录因子和细胞周期调节蛋白而实现的。

Statin类药物促成骨细胞BMP-2表达机理

骨形态形成蛋白因子Ⅱ(BMP-2)属转化生长因子TGF-β超家族成员,具有活性最高和能单 独诱导骨形成的特性。BMP-2能促进成骨细胞分化和增加成骨细胞标志基因的表达,这在成骨 细胞分化过程中起非常关键的作用,最终促进骨形成。因此BMP-2可作为治疗骨质疏松症药物 的新作用靶点。目前,已证明可上调BMP-2表达的上调剂多为Statin类药物。它们多通过抑制 Rho和Rho激酶的活性;增加游离的有活性的eNOS;抑制HMG-CoA还原酶的活性等方面促骨形 成。研究Statin类药物促BMP-2表达上调的机理,可为进一步寻找更有效的治疗骨质疏松症药物 提供新靶点和新思路。

支架蛋白GIT2通过与Smad3相互作用调节其转录活性

G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(G protein-coupled receptor kinase interacting proteins 2,GIT2)是一种信号支架蛋白,可募集多种信号通路的关键分子,参与肌动蛋白细胞骨架组装、整合素介导的细胞粘附、G蛋白偶联受体的内化及胞内信号传递等生物学过程.采用酵母双杂交实验证明,TGF-β1信号通路的转录因子Smad3是GIT2的相互作用蛋白质,内、外源免疫共沉淀实验均证实,GIT2与Smad3存在蛋白质相互作用.报告基因实验及免疫印迹结果表明,GIT2增加Smad3的转录活性并增强TGF-β1诱导的Smad3的磷酸化.研究还发现,Git2-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的Smad3磷酸化受到抑制,其骨形成相关靶基因的表达水平也低于Git2+/+小鼠.本研究表明,GIT2通过与Smad3的相互作用调节其转录活性并活化TGF-β1信号通路,可能参与调节骨髓间充质干细胞的分化.

表皮生长因子受体靶向药物作用机制与相关标志物的研究现状

为贯彻理论与实践、普及与提高相结合的办刊方针,促进国内肿瘤界的学术交流,介绍肿瘤研究与治疗方面的新设备、新方法、新技术、新标准和新规范,自本期开始,我刊与阿斯利康有限公司合作,开办EGFR靶向治疗继续教育园地(共8期),邀请具有丰富理论知识和临床经验的教授,就有关肿瘤的临床诊断与治疗开展系列经验介绍与讲座,每期均附思考题。参加学习的医生只要准确回答每期讲座文章后面所附的问题,并将最后一期所附的集中答题卡寄回本刊编辑部,即可获得国家Ⅱ类继续教育学分8分。我们对参加学习的医生不再收取任何费用,欢迎广大临床医生踊跃参加。

参莲胶囊联合曲妥珠单抗对人表皮生长因子受体2阳性晚期胃癌化疗患者毒副作用及临床疗效的影响

目的 探讨参莲胶囊联合曲妥珠单抗对人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2, HER-2）阳性晚期胃癌化疗患者毒副作用及临床疗效的影响。方法 将符合入选标准的314例HER-2阳性晚期胃癌患者采用随机数字表法分为2组，每组157例。2组均采用SOX化疗方案（替吉奥＋奥沙利铂）治疗，对照组在此基础上加用曲妥珠单抗，治疗组在对照组基础上加服参莲胶囊。2组均以21 d为1个周期，共治疗6个周期，随访3年。采用双抗体夹心法检测基质衍生因子-1（stromal-derived factor-1, SDF-1）、趋化因子受体-4 （chemokine receptor-4, CXCR4）、纤维母细胞特异性蛋白-1（fibroblast specific protein-1, FSP-l）及骨髓相关蛋白-14（marrow related protein -14, MRP-l4）含量；观察治疗期间的毒副作用及随访期间患者生存率、总生存时间（overall survival, OS）、无疾病进展生存时间（progression- freely-survival, PFS），评价临床疗效。结果 治疗组临床有效率为78.1%（118/151）、疾病控制率为92.7%（140/151），对照组分别为66.4%（99/149）、79.9%（119/149），2组有效率与疾病控制率比较，差异有统计学意义（Z值分别为3.712、3.812，P值分别为0.039、0.037）。治疗后，治疗组血清SDF-1、CXCR4、FSP-l及MRP-l4含量低于对照组（t值分别为4.091、4.310、3.972、3.821，P值均＜0.01）。治疗期间，治疗组神经毒性、胃肠道反应、肝功能损伤、肾功能损伤、皮疹及骨髓抑制等毒副作用发生率低于对照组（χ2值分别为5.182、4.671、4.491、5.091、5.204、4.925，P＜0.05或P＜0.01）。随访期间，治疗组3年生存率高于对照组（χ2＝3.105，P＝0.043），PFS、OS高于对照组（t值分别为3.714、3.612，P＜0.05）。结论 参莲胶囊联合曲妥珠单抗可降低HER-2阳性晚期胃癌患者化疗后的毒副作用，延长患者生存时间。