银屑病患者皮损中转化生长因子-β_1、-β_1受体及其信号转导蛋白Smad2、3的表达

目的:观察银屑病患者皮损与正常人皮肤中T细胞转化生长因子(TGF)-β_1、TGF-β_1受体(TGF-β_1R I、TGF—β_1RⅡ)及其信号转导蛋白Smad2、3的表达,分析TGF—β_1信号转导通路在银屑病发病机制中的作用。方法:采用Real-time PCR(RTPCR)法检测20例银屑病患者皮损及10例正常人皮肤中TGF—β_1、TGF—β_1受体(I、Ⅱ)、Smad(2、3)mRNA的表达,用western blot杂交法检测TGF—β_1、Smad2、3的表达。结果:银屑病患者皮损中TGF—β_1、TGF—β_1R I、TGF—β_1RⅡ及其信号转导蛋白smad2、3的mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.01),TGF—β_1和Smad2、3的蛋白表达明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:T细胞TGF-β1信号转导通路的低表达可能有助于银屑病患者表皮过度增殖状态的发生和发展。

左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导中转化生长因子β1及Smad2/3的影响

背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞;分别以空白血清对照组,左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠),以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。结果与结论:左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组,差异有显著性意义(P<0.05),且左归丸优于右归丸(P<0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且左归丸组效果更好,表明中医"滋肾阴"法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

转化生长因子β1及Smad2/3、4在糖尿病肾脏的动态表达及意义研究

目的观察1型糖尿病大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)及信号转导蛋白Sm ad2/3、Sm ad4蛋白在肾脏的动态表达,探讨它们在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及其相互关系。方法实验动物随机分为5组,依病程长短分为①A组(2周组),②B组(4周组),③C组(8周组),④D组(16周组),⑤E组(24周组),每组分别设有正常对照组(N组)和糖尿病组(DM组)。采用尾静脉注射链脲菌素(STZ)法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方法检测肾脏TGF-β1、Sm ad2/3、Sm ad4及纤连蛋白(FN)的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量。结果正常对照组大鼠肾脏TGF-β1极少表达,Sm ad2/3、Sm ad4有少量表达,而糖尿病大鼠三者的表达均显著高于正常对照组;随糖尿病进展,肾组织纤连蛋白表达及24h尿蛋白都增多;糖尿病16周时肾脏TGF-β1表达分别与Sm ad2/3、Sm ad4及FN、24h蛋白尿均呈正相关关系。结论STZ-1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和下游信号转导蛋白Sm ad2/3、Sm ad4参与了肾病时肾脏肥大硬化的发生。

疏肝平喘方通过转化生长因子-β_(1)/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的:阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)/叉头框蛋白P3(Foxp3)以及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的干预作用,对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad信号通路的影响。方法:建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)和TGF-β_(1)水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果:疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β_(1),与地塞米松比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当(均P>0.05);Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当(均P>0.05)。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β_(1)/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。

色素上皮衍生因子对高糖诱导人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1／Smad信号转导途径的影响

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）对高糖诱导人肾小球系膜细胞（HMCs）转化生长因子-β1（TGF-β1）／Smad信号转导途径的影响。方法体外培养HMCs并将其分为正常对照组（5．6mmol／L葡萄糖）、渗透压对照组（5．6mmol／L葡萄糖＋24．4mmol／L甘露醇）、高糖组（30mmol／L葡萄糖）、干预1组（30mmol／L葡萄糖＋10nmol／LPEDF）、干预2组（30mmol／L葡萄糖＋40nmol／LPEDF）和干预3组（30mmol／L葡萄糖＋100nmol／LPEDF），分别作用24h后收集样本，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测TGF-β1、纤维连接蛋白（FN）及Smad7 mRNA表达，Western blot检测Smad7蛋白的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TGF-β1、FN蛋白水平，免疫细胞化学检测p-Smad2／3蛋白的表达。结果与正常对照组比较，高糖组TGF-β1、FN表达明显增加，Smad7表达明显减少（P〈0．05或P〈0．01），p-Smad2／3蛋白表达增加，而渗透压对照组与正常对照组比较无明显改变。与高糖组比较，PEDF干预组TGF-β1、FN表达减少，Smad7表达增加（P〈0．05或P〈0．01），p-Smad2／3蛋白表达呈下降趋势。结论PEDF能抑制高糖诱导的TGF-β1、FN和p-Smad2／3蛋白过度表达及上调Smad7表达。PEDF可能通过影响TGF-β1／Smad信号转导途径达到抗纤维化的作用，延缓糖尿病肾病的进程。

入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平与CHB肝纤维化严重程度的相关性及对疾病预后的预测价值

目的探讨入院时血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源蛋白2(Smad2)、Smad同源蛋白3(Smad3)及透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)水平与慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化严重程度的相关性及联合检测对疾病预后的预测价值。方法选取河南省中医院2021年3月至2022年3月收治的78例CHB肝纤维化患者作为研究组,选择同期78名健康体检者作为对照组。比较研究组和对照组及不同肝纤维化分期、不同炎症活动分级CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平;分析入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平与肝纤维化分期、炎症活动分级的相关性。CHB肝纤维化患者治疗3个月后,根据患者预后分为预后良好和预后不良亚组,比较预后良好和预后不良患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平;分析入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平联合检测对CHB肝纤维化患者预后不良的预测价值。结果研究组入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ高于对照组(P<0.05);不同肝纤维化分期、炎症活动分级CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ比较:S1<S2<S3<S4、G1<G2<G3<G4,差异有统计学意义(P<0.05);入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平与肝纤维化分期、炎症活动分级均呈正相关(P<0.05)。预后良好患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平均低于预后不良患者(P<0.05);入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平联合预测肝纤维化患者预后不良的曲线下面积(AUC)优于各指标单一检测(P<0.05)。结论CHB肝纤维化患者入院时血清TGF-β1、Smad2、Smad3、HA、PCⅢ、LN、CⅣ水平均呈现高表达,且与肝纤维化分期、炎症活动分级密切相关,其联合检测对CHB肝纤维化患者预后有较高的预测价值,可用于评估CHB肝纤维化患者病情严重程度和预后,为制定针对性治疗措施提供参考。

生长分化因子11对小鼠海马神经细胞系HT22增殖与分化的影响

目的分析生长分化因子11(GDF11)在体外对小鼠海马神经细胞系HT22增殖、分化的影响,探讨GDF11对神经细胞的作用机制。方法用完全培养基(含5%马血清、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基)将小鼠海马神经细胞系HT22在37℃和5%CO_2条件下培养过夜后,更换为饥饿培养基(含1%胎牛血清和0.5%马血清的高糖DMEM)继续培养6 h后,分为实验组:弃去原有培养基,加入含有不同浓度GDF11(12.5、25、50、100 ng/m L)的饥饿培养基培养6、24或48 h;对照组:弃去原有培养基,加入与实验组相同体积的饥饿培养基培养6、24或48 h。采用增强型CCK8法检测细胞活力及增殖情况,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞周期蛋白Cycling D2、神经干细胞标志蛋白Nestin、神经元标志蛋白βⅢ-Tubulin、星形胶质细胞标志蛋白GFAP及表皮生长因子受体EGFR、Notch1等信号通路蛋白的mRNA表达情况,通过Western blot方法分析GDF11对HT22细胞的Smad2/3、环磷腺苷效应元件结合蛋白Creb等蛋白的磷酸化的影响。结果处理24 h,实验组HT22细胞活力与对照组相近(P>0.05);处理48 h,25ng/m L r GDF11实验组与对照组细胞活力(%)为74.50!1.45 vs 69.17!0.73(P<0.05),其他实验组(r GDF11浓度分别为12.5、50和100 ng/m L)细胞增殖与对照组比较无明显差别(P>0.05)。qRT-PCR检测:实验组βⅢ-Tubulin基因表达上调明显(P<0.01),且有剂量依赖性;Nestin基因表达下调(P>0.05);GFAP基因表达明显上调(P<0.05);Cycling D2基因、EGFR基因和Notch1基因表达均明显下调(P<0.05)。Western blot分析:实验组Smad2/3蛋白和Creb蛋白的磷酸化与对照组相比明显上调(P<0.05)。结论 GDF11可能通过抑制Notch、EGFR信号通路,激活TGF-β、CREB信号通路等抑制小鼠海马神经细胞系HT22的增殖、促进其向神经元和星形胶质细胞的分化。

转化生长因子-β诱导活化蛋白-1活化及促进NIH3T3细胞α2Ⅰ型胶原表达的研究

目的 研究活化蛋白 1(AP 1)在转化生长因子 β(TGF β)促进Ⅰ型胶原基因表达中的作用 ,探讨病理性瘢痕的形成机制。方法 用 5 μg/LTGF β刺激鼠成纤维细胞株NIH 3T3细胞 ,分别采用凝胶迁移变动分析 (EMSA)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术研究TGF β对AP 1的活化及其对α2 Ⅰ型胶原mRNA水平的影响。结果 5 μg/LTGF β刺激NIH3T3细胞 ,0 .5h即可检测到AP 1被活化 ,随时间推移AP 1的活性逐渐增强 ,6h达到峰值 ,而后活性逐渐减弱 ,2 4h仍然可检测到AP 1的活性。用TGF β刺激NIH3T3细胞 ,2 4h后提取总RNA ,经RT PCR分析 ,与对照组相比α2 Ⅰ型胶原mRNA水平明显增高。结论 TGF β刺激NIH3T3细胞 ,可激活AP 1并可以上调α2 Ⅰ型胶原的表达。

TGF-β1及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1(TGFβ1)及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义。方法手术切除大鼠双侧卵巢。术后13周,取离体胫骨测量组织学参数髓腔面积百分率(%Ma.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th),用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测大鼠骨组织TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化法检测Smad23蛋白在骨组织中的定位,用Westernblot杂交法检测骨组织TGFβ1、Smad23蛋白表达。结果与对照组(Sham组)比较,模型大鼠(OVX组)骨组织Tb.Th缩小,%Ma.Ar明显增大,差异有显著性(P<0.01);OVX组TGFβ1的mRNA、蛋白及Smad23蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Smad23蛋白广泛表达于骨组织干骺端,主要表达于骨基质表面及骨小梁周围的成骨细胞。结论TGFβ1及其信号转导蛋白Smad23可能在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用。

肾上腺髓质素通过Smad2/3信号途径抑制TGF-β1刺激的肺成纤维细胞前胶原蛋白的合成

目的观察肾上腺髓质素(AM)对转化生长因子β1(TGF-β1)促进肺成纤维细胞1型前胶原蛋白α1(Col1α1)、3型前胶原蛋白α1(Col3α1)基因表达及Smad2/3通路的影响,探讨AM对TGF-β1促肺成纤维细胞胶原合成作用的机制。方法体外原代培养人胚肺成纤维细胞(HFLF),利用反转录PCR(RT-PCR)观察AM及TGF-β1对HFLF的Col1α1、Col3α1 mRNA表达的影响;Western blot法观察AM及TGF-β1对HFLF磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达的影响。结果 TGF-β1可以刺激HFLF的Col1α1、Col3α1 mRNA和p-Smad2/3蛋白表达,AM则可抑制基础条件下TGF-β1促进的Col3α1 mRNA表达,同时也抑制Smad2/3蛋白的表达。结论 AM可能通过Smad2/3信号转导途径,抑制TGF-β1促进的HFLF前胶原蛋白的合成作用。

血管紧张素-（1-7）下调转化生长因子-β1/Smad通路致胶原蛋白-Ⅰ表达减少并抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

支气管哮喘（哮喘）气道重塑涉及免疫、炎症反应及气道结构改变,并最终导致气流受限不可逆,气道阻力增加以及气道高反应性加重,是难治性哮喘的病理基础. 成纤维细胞（ FB）向肌成纤维细胞（ MF）转化是哮喘气道重塑的重要步骤之一. 在肾素-血管紧张素系统（ RAS ）中,血管紧张素转化酶（ ACE）-血管紧张素Ⅱ （ AngⅡ）-血管紧张素Ⅰ型受体AT1 受体轴可促进胶原蛋白形成,而与之相拮抗的 RAS新分支——ACE2-Ang-（ 1-7 ）-Mas 轴是否能够有效抑制FB向MF转化,并下调转化生长因子β1（TGF-β1）,α-平滑肌动蛋白（α-SMA）以及Ⅰ型胶原蛋白（ Col-Ⅰ）等关键蛋白的水平,进而延缓哮喘气道重塑的发生发展尚不明确. 本研究拟探讨Ang-（ 1-7 ）在AngⅡ诱导的 FB 向 MF 转化过程中的作用.

重组干扰素α-2b雾化对毛细支气管炎患儿炎症因子及血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)的影响

目的:探讨重组干扰素α-2b雾化对毛细支气管炎患儿炎症因子及血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Toll样受体4(TLR4)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的影响。方法:选取2020年1月—2022年6月在汉川市妇幼保健院诊治的118例毛细支气管炎患儿为研究对象,采用随机数表法将其分为对照组(n=59)和研究组(n=59)。对照组给予常规治疗,研究组在常规治疗的基础上给予重组干扰素α-2b雾化治疗。比较两组治疗前后的炎症因子及血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平。结果:治疗后两组白细胞介素-4(IL-4)、MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平较治疗前均降低,白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平较治疗前均升高,研究组IL-4、MMP-9、TLR4、TGF-β_(1)水平均低于对照组,IL-10、IFN-γ水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组的治疗总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组干扰素α-2b雾化辅助治疗毛细支气管炎患儿,可有效改善炎症因子,降低血清MMP-9、TLR4、TGF-β_(1),疗效显著。

转化生长因子β1及Smad信号转导通路在肾小球硬化中的作用

目的探讨转化生长因子β1(TGF—β1)及其信号转导分子Smad2、Smad3、细胞外基质(ECM)在肾小球硬化过程中的表达及其意义。方法以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型的肾活检标本,用免疫组织化学染色方法观察TGF—β1、Smad2、Smad3、纤连蛋白(FN)在肾小球中的染色强度,并对检测结果作图像分析处理。以体外培养的人系膜细胞为对象,观察TGF-β1对系膜细胞表达Smad2、Smad3、FN的影响。Smad2、Smad3、FN的基因表达采用RT—PCR检测;Smad2、Smad3、FN的蛋白表达采用Western印迹检测。结果所有增生、硬化病理类型肾小球肾炎中病变肾小球TGF—β1、Smad2、Smad3、FN蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05),且TGF—β1、Smad2、Smad3在肾小球中的表达与FN在肾小球中的蓄积呈显著正相关(P<0.05)。外源性TGF—β1刺激人肾系膜细胞后,系膜细胞Smad3mRNA和蛋白表达显著增高(P<0.05);Smad2mRNA和蛋白表达无明显改变(P>0.05);FNmRNA和蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论TGF—β1及其信号转导分子Smad蛋白可能参与了ECM在病变肾小球中的过量蓄积,从而在肾小球硬化过程中起重要作用。

乳腺癌组织中MMP-2、TIMP-2、TGF-β_1、TGF-β_1RⅠ的表达及相关性分析

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-2及其抑制物(TIMP-2)与转化生长因子(TGF)-β1及其I型受体(TGF-β1RI)在乳腺癌组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组化SP法检测80例乳腺癌组织中的MMP-2、TIMP-2与TGF-β1、TGF-β1RI蛋白。结果乳腺癌中MMP-2、TIMP-2、TGF-β1和TGF-β1RI阳性表达率分别为67.5%、45.0%、80.0%和67.5%;无淋巴结转移者MMP-2、TIMP-2阳性表达率为44.4%、66.7%,与转移淋巴结个数1～3(85.7%、21.4%)、>3个(87.5%、37.5%)相比,P均<0.01;TNM分期为Ⅰ期的MMP-2、TIMP-2阳性表达率分别为0、75%,分别与Ⅱ(65.0%、55.0%)、Ⅲ(86.7%、26.7%)、Ⅳ期(100%、0)相比,P均<0.05;肿瘤直径≤2cm者TIMP-2阳性表达率为66.7%,与直径2～5(51.9%)、>5cm(20.0%)相比,P均<0.05;MMP-2和TGF-β1的表达呈正相关(r=0.454,P<0.01),MMP-2和TGF-β1RI的表达呈负相关(r=-0.481,P<0.01)。结论MMP-2和TIMP-2的表达情况与乳腺癌侵袭转移有密切关系。MMP-2的表达与TGF-β1、TGF-β1RI关系密切,MMP-2可能在一定程度上受到TGF-β及其受体的调控。

贝那普利对糖尿病大鼠胰腺组织中TGF-β_1和Smad3表达的影响

目的研究贝那普利对糖尿病大鼠胰腺组织中TG F-β1和Sm ad3表达和R AS系统的影响。方法以健康成年W istar大鼠为实验对象,随机分为正常组、糖尿病未干预组和糖尿病贝那普利干预组3组。正常组以普通饲料喂养,糖尿病未干预组和糖尿病贝那普利干预组以高脂高糖饲料喂养。6周后腹腔注射链脲佐菌素诱导成糖尿病大鼠。于给药8周后处死。检测各组大鼠的血糖、胰岛素、体重。采用免疫组织化学方法检测胰腺组织中TG F-β1及Sm ad3蛋白的表达,并用彩色病理图像分析系统进行定量分析。采用放射免疫的方法检测胰腺组织中的血管紧张素Ⅱ的含量。结果与正常组相比,糖尿病未干预组血糖增加胰岛素分泌减少、体重减轻。TG F-β1及Sm ad3蛋白的表达明显增加。胰腺组织中的血管紧张素Ⅱ含量增加。贝那普利治疗后除体重无变化外上述指标均明显改善(P<0.05)。结论胰腺局部R AS系统和TG F-β1/Sm ad通路在糖尿病时是激活的,贝那普利治疗后可改善胰腺纤维化并可改善胰岛功能。

miR-10b靶向TGFBR1/SMAD3通路对特发性矮小症的软骨细胞增殖、肥大的影响机制

目的研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制。方法收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系。采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1及各自阴性对照转染C28/I2细胞,利用CCK-8实验检测C28/I2细胞增殖能力,Western blot检测侏儒相关转录因子2(RUNX2)、X型胶原α1链(COL10A1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、SMAD3、pSMAD3蛋白表达量。在StarBase数据库筛选miR-10b靶点,利用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10b与TGFBR1的靶向关系。结果ISS组血清miR-10b表达量高于健康对照组,且miR-10b表达越高,患儿的身高、IGF-1、骨特异性碱性磷酸酶的下降越明显(P<0.05)。与NC组相比,miR-10b inhibitor组细胞增殖能力升高,RUNX2、COL10A1、TGFBR1、pSMAD3蛋白表达上调(P<0.05);StarBase数据库提示miR-10b存在TGFBR1的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实两者结合。与si-NC相比,si-TGFBR1组TGFBR1表达量下调,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论miR-10b通过靶向TGFBR1/SMAD3通路在特发性矮小症中抑制软骨细胞的增殖、肥大。

FKBP11下调对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭及TGF-β_(1)/Smad3通路的影响

目的 探讨下调FK506结合蛋白11(FKBP11)对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad同源物3(Smad3)通路的作用。方法 2020年3月—2021年3月于武汉大学人民医院生物实验室进行实验。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(Western-blot)法测定人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)和RCC细胞系(A498、ACHN、CaKi-1、786-O)中FKBP11的mRNA和蛋白表达水平。将786-O细胞分为空白组(不转染)、对照组(转染阴性对照siRNA)、si-FKBP11组(转染si-FKBP11)和si-FKBP11+LY364947组(转染si-FKBP11同时加入TGF-β_(1)/Smad3通路抑制剂LY364947),采用qRT-PCR和Western-blot检测各组细胞中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖活力,Transwell小室检测细胞的侵袭和迁移能力,Western-blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、凋亡抑制蛋白(Twist)、锌指转录因子(Snail)、TGF-β_(1)、Smad3及磷酸化Smad3 (p-Smad3)蛋白表达水平。结果 与正常肾小管上皮细胞系HK-2比较,RCC细胞系A498、ACHN、CaKi-1、786-O中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05),且在786-O细胞中表达最高。与对照组比较,si-FKBP11组细胞中FKBP11 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、细胞侵袭和迁移能力及PCNA、Vimentin、Twist、Snail、TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白水平显著降低,E-cadherin蛋白水平显著增高(P<0.05);与si-FKBP11组比较,si-FKBP11+LY364947组细胞增殖能力、细胞侵袭和迁移能力以及PCNA、Vimentin、Twist、Snail、TGF-β_(1)和p-Smad3蛋白水平显著降低,E-cadherin蛋白水平显著增高(P<0.05);而空白组与对照组上述各项指标变化比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FKBP11下调可通过抑制TGF-β_(1)/Smad3通路激活进而抑制RCC细胞增殖、侵袭和迁移。

HAX-1通过调控MDM2/SMAD3通路对TGF-β1诱导的特发性肺间质纤维化的作用机制

目的探讨造血细胞特异性蛋白1相关蛋白X-1(HAX-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的特发性肺间质纤维化的作用及机制。方法将A549细胞分为对照组(无处理)、TGF-β1组(用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、NC si组(用阴性对照siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+pcDNA3.1组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用pcDNA3.1空质粒转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+DMSO组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,向细胞培养液中加入溶剂DMSO处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+SIS3组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,用终浓度为1μmol·L^(-1)溶于DMSO的SIS3处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)。相应处理结束后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Western blot检测HAX-1、鼠双微体基因2(MDM2)、SMAD3、p-SMAD3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)蛋白表达水平。结果TGF-β1诱导细胞后,细胞由鹅卵石形或多角形转变为梭形、纺锤形,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HAX-1、α-SMA和COL1A1蛋白表达升高(P<0.05)。干扰HAX-1可提高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MDM2、p-SMAD3、α-SMA和COL1A1蛋白表达(P<0.05),并且细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形。MDM2过表达抵消HAX-1干扰对p-SMAD3、E-cadherin、α-SMA和COL1A1蛋白表达的影响(P<0.05)。SMAD3抑制剂SIS3处理后细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA和COL1A1蛋白表达下降(P<0.05)。结论HAX-1在TGF-β1诱导的A549细胞中高表达,HAX-1敲低可通过MDM2/SMAD3通路抑制TGF-β1诱导的肺泡细胞纤维化过程。

基于“痰瘀生风”理论研究中药复方调控TGF-β1/Smad2/3/α-SMA信号通路治疗痰浊血瘀型PAF的机制研究

目的基于“痰瘀生风”理论,以转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad2/3/α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)信号通路为切入点探究中药复方抑制心房纤维化,改善痰浊血瘀型阵发性房颤大鼠心房重构的可能机制。方法将60只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、中药复方高剂量组、中药复方中剂量组、中药复方低剂量组和维拉帕米组(n=10)。采用尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙(Ach-CaCl2)联合喂养高脂饲料方法建立痰浊血瘀型阵发性房颤大鼠模型,造模成功后,第2天开始灌胃,对照组及模型组采用等体积生理盐水灌胃,中药复方高剂量41.25g/(kg·d)、中剂量20.63g/(kg·d)、低剂量10.31g/(kg·d),日1次灌胃,维拉帕米组维拉帕米溶液25mg/(kg·d)日1次灌胃,用药干预2周后,心电图记录各组大鼠房颤持续时间、透射电镜观察大鼠心房肌组织超微结构,运用Western Blot法检测心房TGF-β1、Smad2/3、α-SMA蛋白表达。结果心电图显示造模成功,且与模型组相比,中药复方各剂量组及维拉帕米组大鼠房颤持续时间显著缩短(P<0.05);透射电镜下观察到心房肌细胞的肌小节轻微断裂,肌丝间未出现间隙;同时TGF-β1、Smad2/3、α-SMA表达显著下降(P<0.05)。结论中药复方可能通过调控TGF-β1/Smad/α-SMA通路相关蛋白的表达,抑制心房纤维化,改善心房重构,进而减少阵发性房颤的发生。

支架蛋白GIT2通过与Smad3相互作用调节其转录活性

G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(G protein-coupled receptor kinase interacting proteins 2,GIT2)是一种信号支架蛋白,可募集多种信号通路的关键分子,参与肌动蛋白细胞骨架组装、整合素介导的细胞粘附、G蛋白偶联受体的内化及胞内信号传递等生物学过程.采用酵母双杂交实验证明,TGF-β1信号通路的转录因子Smad3是GIT2的相互作用蛋白质,内、外源免疫共沉淀实验均证实,GIT2与Smad3存在蛋白质相互作用.报告基因实验及免疫印迹结果表明,GIT2增加Smad3的转录活性并增强TGF-β1诱导的Smad3的磷酸化.研究还发现,Git2-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的Smad3磷酸化受到抑制,其骨形成相关靶基因的表达水平也低于Git2+/+小鼠.本研究表明,GIT2通过与Smad3的相互作用调节其转录活性并活化TGF-β1信号通路,可能参与调节骨髓间充质干细胞的分化.