活血利水复方对自发性高血压大鼠转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路介导下游结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及血管重塑的影响

目的:基于转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路探讨活血利水中药复方对自发性高血压大鼠血管重塑的保护作用及机制。方法:将自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组,Wistar大鼠作为空白组,每组10只。给予相应药物灌胃,4周后采用酶联免疫吸附试验方法检测血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量;采用逆转录聚合酶链反应检测大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达,并取冠状动脉组织进行马松三色染色。结果:与空白组比较,模型组血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物组大鼠干预后血清中C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6的含量不同程度降低(P<0.01)。其中,卡托普利组和活血利水复方高剂量组上述3项指标表达最低,与其他组的差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);卡托普利组和活血利水复方高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠主动脉转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,卡托普利组及活血利水复方低剂量组、活血利水复方中剂量组、活血利水复方高剂量组大鼠主动脉组织转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达不同程度降低(P<0.05或P<0.01)。结论:活血利水中药复方可通过调控转化生长因子-β1/SMAD家族蛋白信号通路及下游结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平,降低C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6等炎症因子的表达,抑制炎症反应,从而改善高血压病炎症状态及血管重塑,其机制可能与降低转化生长因子-β1、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白沉积有关。

转化生长因子β信号通路与非综合征型唇腭裂发病风险的基因-基因及基因-环境交互作用

目的:探索亚裔人群中转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路基因多态性与非综合征型唇裂合并或不合并腭裂(non-syndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P)的关联及可能存在的基因-基因、基因-环境交互作用。方法:选取1038个NSCL/P核心家系作为研究对象。对TGF-β信号通路上的10个基因的343个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行了传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT),采用条件Logistic回归模型进行基因-基因交互作用分析和基因-环境交互作用分析。研究收集的环境因素包括患儿母亲孕期吸烟、被动吸烟、乙醇摄入量以及维生素使用情况。由于患儿母亲孕期吸烟和饮酒暴露率较低(<3%),因此,仅对母亲孕期被动吸烟及补充多种维生素这两个环境因素与基因之间的交互作用进行了分析。采用Bonferroni法对结果进行多重检验校正,显著性的阈值设置为P=1.46×10-4。结果:共有4个基因的23个SNP位点与NSCL/P之间存在关联(P<0.05),但经过Bonferroni多重检验校正后,这些关联均未达到统计学显著性水平。经过Bonferroni多重检验校正之后,6对SNP[rs4939874(SMAD2)与rs1864615(TGFBR2),rs2796813(TGFB2)与rs2132298(TGFBR2),rs4147358(SMAD3)与rs1346907(TGFBR2),rs4939874(SMAD2)与rs1019855(TGFBR2),rs4939874(SMAD2)与rs12490466(TGFBR2),以及rs2009112(TGFB2)与rs4075748(TGFBR2)]存在显著的统计学交互作用(P<1.46×10-4),基因-环境交互作用的分析没有达到多重检验校正阈值的显著结果。结论:未发现TGF-β通路基因多态性与NSCL/P的关联,该通路上部分基因可能通过基因-基因交互作用影响NSCL/P的发病风险。未来仍需其他独立研究的证据支持,以进一步的探索其中潜在的生物学机制。

SOX9通过转化生长因子β信号通路调节角膜内皮损伤后内皮-间质转化过程

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中SNAIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

益消方经转化生长因子β1信号通路干预糖尿病合并脂肪肝的实验研究

目的:探索益消方对糖尿病合并脂肪肝的影响和作用机制。方法:观察组为12周龄雄性自发糖尿病(KKAy)小鼠,按照随机数字表法随机分为模型组、中药组(益消方干预)、西药组(氯沙坦干预);对照组为同周龄雄性近交系(C57BL/6J)小鼠。干预周期为12周。观察干预前后血糖、血脂-、肝功能变化,肝脏组织进行病理染色,检测肝脏组织转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))信号通路蛋白和信使核糖核酸(mRNA)的变化。结果:与模型组比较,益消方干预8周体质量、肝重指数显著降低(P<0.05,P<0.01),干预第4、8、12周空腹血糖显著降低(P<0.01),干预8周胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶水平降低(P<0.05,P<0.01)。病理形态方面益消方干预4周脂肪变性评分下降(P<0.05)。益消方干预12周后,TGF-β_(1)及其信号蛋白、mRNA的表达均显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论:益消方可显著改善KKAy小鼠的肥胖和糖脂代谢紊乱,调节TGF-β_(1)信号通路蛋白和基因表达,减轻肝脏脂肪变性。

长链非编码RNA 00941、微小RNA-145表达及转化生长因子β1/Smad通路相关因子在胃癌组织中的表达及意义

目的:探究长链非编码RNA00941(Linc00941)、微小RNA-145(miR-145)表达及转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)通路相关因子在胃癌组织中的表达与意义。方法:选取收治的51例胃癌患者,手术治疗后经病理学检查确诊。收集其胃癌组织及其癌旁组织,比较其中Linc00941、miR-145及TGF-β1/Smad通路相关因子表达差异;提取患者的胃癌组织细胞进行组织培养,并对其进行Linc00941、miR-145基因的转染、沉默,分析其对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁组织比较较,胃癌组织患者的Linc00941及其信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低(均P<0.05)。胃癌组织中的TGF-β1、转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)及Smad2/3均较癌旁组织显著降低(均P<0.05)。NC组、Linc00941转染组及Linc00941沉默组三组间吸光值(A值)及凋亡率两两比较均存在统计学差异(均P<0.05),Linc00941沉默组在培养24、48、72 h时的A值低于NC组,凋亡率高于NC组;Linc00941转染组各时间的A值高于NC组,凋亡率低于NC组(均P<0.05)。与NC组比较较,Linc00941沉默组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,Linc00941转染组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组培养24、48、72 h的A值均降低,凋亡率升高;miR-145沉默组的A值升高,细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与NC组比较较,miR-145转染组的细胞迁移数目及细胞侵袭数目均降低,miR-145沉默组均升高,组间两两比较差异存在统计学意义(均P<0.05)。结论:在胃癌组织中,Linc00941及其mRNA相对表达水平升高,miR-145及其mRNA相对表达水平降低,TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、TGF-βRⅡ及Smad2/3表达降低,且Linc00941、miR-145表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

右美托咪定通过调控白细胞介素-17及转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路对脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

miRNA调控转化生长因子-β信号通路介导常见肝脏疾病的研究进展

转化生长因子-β(TGF-β)作为一类调节细胞增殖、生长和分化的细胞因子,参与稳态平衡、组织修复、免疫炎症和细胞外基质重塑等病理生理过程。微RNA(miRNA)是一种短链非编码RNA,通过阻断翻译过程或诱导靶信使RNA降解等方式在转录后环节调控基因的表达。TGF-β信号转导参与肝脏疾病的始终,与非酒精性脂肪性肝病、肝炎、肝纤维化和肝癌等慢性肝脏疾病联系密切,miRNA通过调控TGF-β信号转导影响肝脏疾病的发生发展。因此,探讨miRNA调控TGF-β信号通路在肝脏疾病中的作用可为临床防治肝脏疾病提供新思路。

中医药基于转化生长因子-β信号通路在动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化(AS)是由脂质沉积引起的慢性炎症性疾病,其病变部位易引起不稳定斑块脱落,导致血栓形成,最终可能导致心肌梗死和中风等不良心脑血管事件发生。转化生长因子-β(TGF-β)信号通路参与调控多种细胞生长、分化、凋亡等过程,在AS主要发病机制与治疗中发挥着关键作用。近年来,中医药靶向TGF-β信号通路,调控AS内脂质沉积、内皮功能损伤及稳定斑块,为减轻AS患者症状及改善预后提供有效帮助。现将从TGF-β信号通路在AS中的作用机制及中医药靶向调节TGF-β信号通路防治AS方面进行综述,以期为预防和延缓AS及其并发症提供更多的临床应用方向。

长链非编码RNA SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1/Smads通路的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) SIL对肺炎链球菌感染的肺上皮细胞细胞增殖、凋亡及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路的影响。方法:运用反转录PCR(RT-PCR)检测lncRNA SIL在人肺泡上皮细胞株A549、HEPApiC、肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)以及被肺炎链球菌R6感染的A549、HEPApiC、AECⅡ细胞的表达,显示其表达在R6感染的A549细胞中最高,故应用A549细胞进行后续实验。将A549细胞随机分为A549组(常规培养)、A549+R6组(用R6感染A549细胞)、lncRNA SIL mimic组(在A549细胞中转染lncRNA SIL mimic,并用R6感染细胞)和lncRNA SIL siRNA组(在A549细胞中转染lncRNA SIL siRNA,并用R6感染细胞)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达,并设立TGF-β1/Smads通路抑制剂组进行对照。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组炎症因子表达。结果:与A549组比较,A549+R6组lncRNA SIL表达升高(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组lncRNA SIL表达升高,lncRNA SIL siRNA组表达降低(均P<0.05)。与lncRNA SIL mimic组比较,lncRNA SIL siRNA组lncRNA SIL表达降低(P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组不同时间细胞增殖率降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组不同时间细胞增殖率降低,lncRNA SIL siRNA组不同时间细胞增殖率升高(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组细胞凋亡率增加(P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组细胞凋亡率增加,lncRNA SIL siRNA组细胞凋亡率降低(均P<0.05)。与A549组比较,A549+R6组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达升高,Smad 6、Smad 7蛋白表达降低(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL siRNA组TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达降低,Smad 6、Smad 7蛋白表达升高(均P<0.05)。lncRNA SIL siRNA组与抑制剂组各指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与A549组比较,A549+R6组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(IL-1β)、IL-6水平升高(均P<0.05)。与A549+R6组比较,lncRNA SIL mimic组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,lncRNA SIL siRNA组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(均P<0.05)。结论:肺炎链球菌感染后,沉默lncRNA SIL可逆转肺上皮细胞凋亡增加及增殖减少的情况,并抑制TGF-β1/Smads通路激活,减少炎症因子释放,从而抑制炎性反应。

疏肝平喘方通过转化生长因子-β_(1)/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的:阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)/叉头框蛋白P3(Foxp3)以及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的干预作用,对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad信号通路的影响。方法:建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)和TGF-β_(1)水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果:疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β_(1),与地塞米松比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当(均P>0.05);Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当(均P>0.05)。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β_(1)/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。

转化生长因子β信号通路与骨关节炎

骨关节炎（OA）是中老年人常见的一种慢性退行性关节疾病,以骨质增生、关节肿痛和活动受限为主要临床表现,以关节软骨破坏、软骨下骨硬化、骨赘形成及滑液组织纤维化为主要病理改变,最终致残。OA的确切病因至今不明,目前认为是生物性因素与机械性因素共同作用的结果。转化生长因子（TGF）-β是一种多功能生长因子,在关节软骨的形成、稳定及修复过程中发挥重要作用。TGF-β信号分子刺激软骨的形成,

滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化和转化生长因子β1/Smads信号通路的影响

目的探讨滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads3信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,滋膵通脉饮高、低剂量组(17.6 g·kg^-1,8.8 g·kg^-1)和依那普利组(0.53 mg·kg^-1),空白对照组予以腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液,余组大鼠采用高脂高糖饲料喂养+单次腹腔注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。造模结束后,模型组和空白对照组灌服同等容积的蒸馏水,余组分别给与药物干预,共干预4周。4周后观察心脏指数和左室指数,PCR技术检测大鼠心肌组织转化生长因子(TGF)-β1 mRNA、Smads3 mRNA和Smads7 mRNA的表达,蛋白印迹法检测心肌组织TGF-β1、Smads3、Smads7的蛋白表达。Masson染色观察大鼠心肌结构的改变,计算胶原容积分数。结果与空白对照组比较,模型组心脏指数和左室指数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组心脏指数和左室指数明显降低(P<0.05,P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。Masson染色结果显示:空白对照组大鼠肌纤维排列整齐,肌纤维连接完好。模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,可见纤维断裂。高剂量组大鼠肌纤维排列整齐,可见极少量胶原纤维。低剂量组大鼠肌纤维排列稍紊乱。依那普利组可见极少量胶原纤维,肌纤维断裂不明显。与空白对照组比较,模型组大鼠胶原容积分数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组胶原容积分数明显降低(P<0.01)。结论滋膵通脉饮能抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化,改善心肌重构,其作用可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。

扶阳强心方对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及转化生长因子-β1/Smad信号通路表达的影响

目的探讨扶阳强心方对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化及转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路表达的影响。方法将40只大鼠随机分为模型组(M组)、西药组(X组)、扶阳强心方灌胃组(Z组)、假手术对照组(K组),每组10只。除K组外,其他3组采用腹主动脉缩窄法制作CHF大鼠模型。造模成功后,Z组、X组分别给予扶阳强心方中药、卡托普利混悬液灌胃,M组与K组给予生理盐水10 mL/kg灌胃。灌胃8周后,观察4组心肌细胞形态,并检测4组大鼠心肌收缩功能,血浆脑利钠肽(BNP)、肌酸激酶水平,心肌组织TGF-β1、Smad3和Smad7蛋白的相对表达水平。结果病理学结果显示,Z组和X组大鼠的部分心肌纤维呈波浪状,心肌细胞肿胀较M组减轻。灌胃后,与M组相比,其他3组的左心室收缩末期内径、左心室舒张末期内径均减小而左心室射血分数(LVEF)升高,血浆BNP和肌酸激酶水平降低,TGF-β1蛋白相对表达水平降低而Smad7蛋白相对表达水平升高(均P<0.05);Z组的LVEF高于X组(P<0.05),而两组间其他指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论扶阳强心方可抑制CHF大鼠的心肌纤维化,并可改善心肌收缩功能,其作用机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路的表达有关。

妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎的疗效及对微小RNA-224-3P及转化生长因子β/Smad信号通路表达的影响

目的探讨妇炎康联合物理因子治疗慢性盆腔炎(CPID)的疗效及对微小RNA(miRNA)-224-3P及转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路表达的影响。方法将62例CPID患者随机分为观察组和对照组,每组31例。对照组给予诺氟沙星和甲硝唑抗感染治疗,观察组在对照组治疗方案基础上,给予妇炎康联合物理因子治疗。治疗1个疗程后,比较两组患者血清miRNA-224-3P、TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平及治疗效果。结果治疗后,两组患者血清miRNA-224-3P、TGF-β1和Smad-3水平均较治疗前降低,Smad-7水平较治疗前升高,且观察组血清miRNA-224-3P、TGF-β1和Smad-3水平低于对照组,Smad-7水平高于对照组,观察组疗效优于对照组(均P<0.05)。结论妇炎康联合物理因子治疗CPID患者的疗效优于常规抗感染治疗,可能与其通过调节miRNA-224-3P和TGF-β/Smad信号通路表达从而抑制炎症反应有关。

长链非编码RNA PCGEM1通过转化生长因子β2/Smad2信号通路调控口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PCGEM1通过转化生长因子β2(TGFβ2)/Smad2信号通路调控口腔鳞状细胞癌(OSCC)侵袭和转移的机制。方法将60例OSCC患者癌组织及距离癌组织超过2 cm处的正常组织纳入研究,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-148a、lncRNA PCGEM1在OSCC组织及正常组织、人正常口腔黏膜上皮细胞(OMEC)及人源OSCC细胞株KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15中的表达情况;分析lncRNA PCGEM1和miR-148a表达与患者临床病理信息之间的关系。构建lncRNA PCGEM1沉默细胞系KB-siPCGEM1及阴性对照(KB-NC),并以KB作为空白对照组,采用MTT、Transwell和划痕实验检测lncRNA PCGEM1对KB细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;使用生物信息学网站starBase预测lncRNA PCGEM1可以互补结合的微小RNA(miRNA),再根据www.microRNA.org网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;免疫印迹(Western blotting)检测TGFβ2/Smad2信号通路蛋白表达情况。结果qRT-PCR结果显示,OSCC组织中lncRNA PCGEM1、miR-148a的表达水平高于正常组织(P<0.05);lncRNA PCGEM1和miR-148a在不同TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度的患者癌组织中表达差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和KB-NC组相比,KB-siPCGEM1组细胞OD492 nm值下降,细胞侵袭数量及迁移率降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);生物信息学预测结果显示,lncRNA PCGEM1可与miR-148a互补结合,miR-148a与TGFβ2存在靶向结合位点;qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,KB-siPCGEM1组中miR148a、TGFβ2及p-Smad 2的表达明显低于空白对照组与KB-NC组(P<0.05),空白对照组和KB-NC组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论lncRNA PCGEM1在OSCC中高表达,高表达lncRNA PCGEM1可能通过上调miR-148a水平,强化TGFβ2/Smad2信号通路,从而促进OSCC的进展。

转化生长因子-RhoGTP酶/Rho激酶系统信号通路在低氧诱导大鼠肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化中的作用及机制研究

目的低氧对大鼠肾小球内皮细胞(rat glomerular endothelial cells,rGECs)转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1的表达和转分化相关蛋白表达的影响及机制研究。方法低氧培养箱培养rGECs,根据低氧培养时间将细胞随机分为5组,检测细胞增殖活性、TGF-β1及转分化相关蛋白表达情况;在低氧培养细胞中在合适的时间分别加入RhoA/ROCK阻滞剂和TGF-β1受体阻滞剂,分别再次测定:①细胞培养液中TGF-β1表达;②转分化相关蛋白表达;③RhoA/ROCK活性变化。结果①随着低氧培养时间的延长,rGECs增殖活性增加,72h活性最大(F=546.63,P<0.001);②与常氧组比较,低氧组的TGF-β1(F=16.320,P<0.001)和α-SMA(F=5.032,P=0.009)表达升高,而CD-31(F=9.882,P<0.001)表达降低;③经RhoA/ROCK阻滞剂和TGF-β1受体阻滞剂阻滞后α-SMA蛋白表达下降(相对表达量由1.423分别下降至0.750、0.434),CD-31蛋白表达升高(相对表达量由0.741分别上升至0.779、0.934)。结论研究发现低氧可致rGECs增殖活性增加,促进rGECs向间质细胞转分化。并通过细胞信号阻滞剂研究发现低氧可能通过TGF-β1-RhoA/ROCK信号通路促进rGECs向间质细胞转分化。

环状RNA 42398调控转化生长因子-β1/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制

目的探讨环状RNA(circRNA)42398调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路在大鼠胆道闭锁肝纤维化中的作用机制。方法取大鼠肝星状细胞株HSC-T6构建慢病毒稳定感染的细胞系,根据转染RNA的不同将细胞分为阴性对照组、circRNA过表达组和circRNA敲低组。阴性对照组细胞转染阴性对照序列,circRNA过表达组细胞转染circRNA过表达序列,circRNA敲低组细胞转染circRNA低表达序列。应用细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,采用实量定量聚合酶链式反应检测各组细胞中TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA的表达,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达。结果各组细胞活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。circRNA过表达组与阴性对照组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。circRNA敲低组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论在大鼠细胞水平,circRNA 42398可通过调控TGF-β1/Smad信号通路而抑制肝星状细胞活化,从而抑制胆道闭锁肝纤维化,这为胆道闭锁肝纤维化的治疗和预防提供了依据。

维甲酸诱导腭裂发生中转化生长因子-β信号通路相关分子表达的研究

目的研究维甲酸诱导腭裂发生中转化生长因子-β信号通路相关分子的表达。方法采用器官体外培养法进行腭板培养,实验分为对照组和全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)组。分别培养24 h、48 h、72 h后,苏木素-伊红染色观察两组腭板在不同时间点的融合情况,原位末端转移酶标记技术检测各组腭板细胞的凋亡,免疫组化检测各组腭板中caspase-9、转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)、转化生长因子-β受体Ⅱ(transforming growth factor type-Ⅱreceptor,TGFβRⅡ)、维甲酸核受体α(retinoic acid receptorα,RARα)、维甲酸核受体β(retinoic acid receptorβ,RARβ)及维甲酸X受体α(retinoic acid X receptorα,RXRα)的表达。结果成功建立维甲酸诱导腭裂模型,培养24 h、48 h、72 h后,对照组腭板的融合数分别为4个、8个、8个,而ATRA组未见腭板融合,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,ATRA组凋亡率和caspase-9表达上升(P<0.05)。ATRA能明显抑制TGFβRⅡ的表达(P<0.05),但对于TGF-β3的作用却较小。ATRA可明显上调RARβ的表达,并抑制RXRα在间充质中的表达。结论 ATRA可能通过诱导腭突间充质细胞的凋亡及转化生长因子-β信号通路相关分子和维甲酸受体的表达改变,而诱导腭裂形成。

转化生长因子-β信号通路抑制剂对胚胎干细胞定向分化的影响

目的探讨转化生长因子(TGF)-β信号通路抑制剂在胚胎干细胞(ESCs)向神经分化过程中的作用。方法以单层贴壁方法诱导ESCs向神经干细胞(NSCs)分化。实验组加TGF-β抑制剂,对照组不加。9 d后进行免疫荧光染色和qRT-PCR,统计Nestin阳性细胞比例,并检测NSCs标志物Nestin表达量。对实验组和对照组来源的NSCs分别进行神经元诱导分化和多巴胺(DA)能神经元诱导分化。免疫荧光染色后进行细胞计数,统计各类阳性细胞(包括β-tubulinⅢ+和TH+/MAP2+阳性细胞)比例,qRT-PCR检测神经元早期标志物β-tubulinⅢ、成熟神经元标志物MAP2及DA能神经元标志物TH的表达情况。结果实验组ESCs能更多地分化为NSCs,并且分化为未成熟神经元及DA能神经元的比例显著高于对照组(P<0.05)。结论 TGF-β信号通路抑制剂能促进ESCs定向分化。

大鼠正畸牙移动过程中转化生长因子-β/Smad信号通路相关蛋白质在Malassez上皮剩余细胞的表达变化

目的通过检测大鼠正畸牙移动过程中转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路相关蛋白质在Malassez上皮剩余细胞(ERM)中的表达情况以及ERM的功能变化,探讨TGF-β/Smad信号通路调控ERM参与正畸牙移动的作用机制。方法 30只雄性8周龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠,在上颌右侧第一磨牙与切牙间安装镍钛拉簧,加载50 g力,作为实验组,上颌左侧作为对照组。于加力前以及加力后1、4、7、10、14 d处死大鼠,取下双侧包括上颌第一磨牙及周围牙槽骨在内的组织块,采用免疫组织化学染色方法,通过Image-Pro plus图像分析系统软件对实验组和对照组切片进行分析,在同一光强度下测量染色阳性信号的积分光密度(IOD),观察ERM表达的TGF-β1、Smad2、Smad3、增殖细胞核抗原(PCNA)的IOD值表达变化,并且比较实验组和对照组第一磨牙牙颈部和根分叉区ERM数量以及ERM集群表面积变化。所有数据使用SPSS 17.0软件进行t检验和秩和检验统计分析。结果加力1 d后,TGF-β1、Smad2、Smad3免疫组织化学染色阳性增强,7 d后达到高峰,随后呈下降趋势;加力1、4、7、10、14 d组,TGF-β1、Smad2、Smad3的IOD值与对照组比较差异有统计学意义。加力4 d后,PCNA免疫组织化学染色阳性增强,加力7 d后明显增强,在第10 d达到高峰,随后呈下降趋势;加力4、7、10、14 d组,PCNA的IOD值与对照组比较差异有统计学意义。加力4、7、10、14 d组,ERM数量和ERM集群表面积与对照组比较差异有统计学意义。结论在力学刺激的作用下,ERM的数量增多,ERM集群表面积也增大,TGF-β/Smad信号通路相关分子TGF-β1、Smad2、Smad3在ERM内表达,并且随加力时间的增加而呈现趋势性变化,表明ERM在机械力作用下通过TGF-β/Smad信号通路来调控其在正畸牙移动过程中的作用。