转化生长因子-β1／TGFβ激活激酶信号表达变化在心房颤动心肌纤维化中的作用

目的探讨心房颤动的发生过程中是否存在心房肌的纤维化，以及TGF-β1／TAK1信号系统在心房颤动心肌纤维化中的作用。方法20只新西兰大白兔随机分成两组：假手术组（GroupS）和快速起搏组（GroupP）。给予兔左心房心外膜电起搏，以900次／min高频起搏，建立房颤模型。起搏前后及房颤后记录心电图。取兔心房组织，观察细胞结构变化（HE染色），比较左房重量指数及胶原蛋白的表达水平（Masson染色），免疫组化、Westen—blot检测TGF-61、TAK1蛋白表达水平，PCR检测TGF-β1mRNA、TAKImRNA的表达水平。结果①起搏兔的左房重量、左房重量指数明显高于GroupS。Masson染色显示起搏兔的左心房心肌间质胶原显著增多。②起搏组的TGF—β1、TAK1的表达明显高于GroupS。③在起搏组中，代表心肌纤维化的心肌间质胶原及LAWI与TGF-β1、TAK1的表达密切相关（P〈0．05），其中与TGF—β1呈正相关（R2=0．72，P〈0．05），与TAKI亦呈正相关（R^2=0．762，P〈0．05）。结论心房颤动在发生早期即存在心房组织的纤维化。快速起搏诱导的心房颤动早期，TGF-β1／TAK1通路信号mRNA及蛋白表达水平明显升高，TGF-β1／TAK1通路信号可能是心房纤维化信号途径之一，可能成为房颤治疗的新靶点。

转化生长因子β激活激酶-1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨转化生长因子β激活激酶-l(TAK1)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法2011年8月一-2013年2月随机选择病理科送检的乳腺标本180例,其中正常乳腺组织80例,乳腺纤维瘤组织60例,乳腺癌组织40例,均进行免疫组化分析TAK1表达情况,并对乳腺癌的病理特征进行相关性分析。结果正常乳腺组织细胞排列有序,细胞形态完整;乳腺纤维瘤组织显示大量腺腔或细胞条索;乳腺癌组织显示为癌组织呈条索或岛屿状分布,在间质内浸润性生长。TAK1在3组中的阳性表达率分别为7.50%、46.67%和70.00%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。TAK1的阳性表达率在不同腋窝淋巴结转移状况和临床分期中对比差异有显著性(P<0.05),乳腺癌患者不同年龄、BMI与病理类型中的对比差异无显著性(P>0.05)。结论FAK1在乳腺癌组织中呈现高阳性表达,并且与病理学转移、临床分期有明显相关性,可能是导致乳腺癌发生发展的因素之一。

转化生长因子β激活激酶1介导的细胞自噬在小鼠脑缺血-再灌注损伤中的作用

目的评价转化生长因子β激活激酶1(TGFβ-activated kinase-1,TAK1)介导的细胞自噬在小鼠脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,IR)损伤中的作用。方法雄性昆明小鼠72只,8周龄,体重(25.0±3.5)g,采用随机数字表法分为六组:空白对照组(C组)、假手术组(S组)、IR组、TAK1短发夹RNA(shRNA)慢病毒组(T组)、阴性对照慢病毒组(Y组)和生理盐水组(NS组),每组12只。T组、Y组和NS组分别以1μl/min侧脑室注射TAK1shRNA慢病毒、阴性对照慢病毒和等量生理盐水10μl。2周后IR组、T组、Y组和NS组制备脑IR损伤模型,缺血2h后恢复灌注;S组分离颈总动脉但不夹闭,其余手术步骤同IR组。再灌注24h后进行神经功能缺陷评分(neurological severity scores,NSS);NSS评分完成后处死小鼠,取脑组织测定脑梗死体积;Western blot法检测小鼠脑组织TAK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1和p62蛋白含量。结果 IR组、T组、Y组和NS组NSS评分和脑梗死体积百分比明显高于C组(P<0.05);T组NSS评分和脑梗死体积百分比明显低于IR组(P<0.05)。IR组、Y组和NS组脑组织TAK1蛋白含量明显高于C组(P<0.05);T组脑组织TAK1蛋白含量明显低于IR组(P<0.05)。IR组、T组、Y组和NS组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白含量明显高于C组(P<0.05),p62蛋白含量明显低于C组(P<0.05);T组脑组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白含量明显低于,p62蛋白含量明显高于IR组(P<0.05)。结论 TAK1介导的细胞自噬参与小鼠脑缺血-再灌注损伤机制。

特异性抑制转化生长因子β激活激酶1活性对妊娠期糖尿病孕妇外周血单核细胞炎症通路的影响

目的探讨特异性抑制转化生长因子β激活激酶1(TAK1)活性的变化对妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血单核细胞炎症通路的影响。方法选取GDM孕妇及正常孕妇各30例,采集外周静脉血,分离单核细胞和血浆。依据细胞加药组别的不同,分为LPS刺激组(L组)、脂多糖组(LPS组)、TAK1抑制剂组(LT组)、TAK1抑制剂组(T组)及空白对照组(W组),培养、加药后Western blot检测TAK1及核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中LPS浓度及各组炎症因子[白介素-1(IL-1)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,比较各组结果的差异,探讨TAK1的作用。结果 GDM孕妇与正常孕妇比较,血浆LPS浓度升高;TAK1及NF-κB蛋白表达量增加,炎症因子(IL-1、IL-10、TNF-α)水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。各小组间比较,L组相较于其他组的TAK1、NF-κB蛋白表达量增加,炎症因子(IL-1、IL-10、TNF-α)表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);正常孕妇中,LT组、T组、W组NF-κB蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05),LT组、T组未检测到TAK1明显表达,可检测到W组少量表达,LT组相对于T组,TNF-α、IL-1、IL-10表达水平升高(P<0.05),LT组、T组与W组上清炎症因子表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);GDM孕妇中,LT组、T组、W组TAK1及NF-κB蛋白表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05),LT组相对于T组,TNF-α、IL-1、IL-10表达水平升高(P<0.05),Pearson相关性分析发现,TAK1、NF-κB蛋白表达量与炎症因子(IL-1、IL-10、TNF-α)水平呈正相关(P<0.05)。结论 TAK1可能参与GDM孕妇外周血单核细胞炎症通路的形成,抑制TAK1的活性,可以下调通路下游关键介质NF-κB及炎症因子的表达。

乳腺浸润性导管癌术后组织中转化生长因子β激活酶1和核因子-κB的表达

目的检测乳腺浸润性导管癌中转化生长因子β激活酶(TAK)1和核因子(NF)-κB的表达,分析其临床意义。方法乳腺浸润性导管癌并行乳腺癌改良根治手术的57例患者作为观察组,留取术后蜡块组织,37例距肿瘤边缘>3 cm的正常乳腺组织作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中TAK1和NF-κB的表达。结果观察组中TAK1和NF-κB表达的阳性率明显高于对照组,观察组中TAK1和NF-κB表达的阳性率与肿瘤的组织学分级、肿瘤的最大径相关,TAK1表达的阳性率与肿瘤的淋巴结转移相关,TAK1和NF-κB均与患者的年龄、分子分型无明显相关性;相关分析显示TAK1和NF-κB呈正相关性。结论 TAK1和NF-κB高表达对促进肿瘤性病变的形成和进展有一定意义,二者具有正向协同作用。

泼尼松龙可抑制转化生长因子β激活激酶1诱导的成骨细胞凋亡

背景:研究显示转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor beta activated kinase 1,TAK1)在骨、关节的发育以及骨形态信号转导中发挥着重要作用,与骨关节炎的发生也存在一定的相关性。目的:探究泼尼松龙通过抑制TAK1表达对诱导成骨细胞凋亡的影响。方法:将M3T3-E1成骨细胞经原代培养后传代培养。取第3代细胞分为3组,正常细胞组(对照组)、阴性转染+泼尼松龙组、TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组。采用碱性磷酸酶染色和钙结节染色评估成骨细胞分化能力的变化;采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内磷酸化(p)-TAK1、TAK1、磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)、JNK蛋白表达,MTT法检测M3T3-E1细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡变化。结果与结论:①TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞的碱性磷酸酶红染程度较少,阴性转染+泼尼松龙组次之,正常细胞组碱性磷酸酶染色最多;钙结节染色显示与正常细胞组相比,阴性转染+泼尼松龙组钙结节数量明显减少,TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组结节数量最少;②荧光显微镜显示,阴性转染+泼尼松龙组细胞出现破碎,形态发生改变,TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组破碎细胞数量明显增加;③Western Blot显示,3组间p-TAK1、p-JNK蛋白表达量逐渐降低(P<0.05);④MTT检测显示,3组间TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞增殖抑制率最高(P<0.05);在12-48h随着时间的延长,细胞增殖抑制率呈逐渐上升趋势,在72h时开始下降;⑤流式细胞仪检测结果显示,TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组G2期细胞比例高于其他2组,S期细胞比例显著低于其他2组(P<0.05);⑥TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞凋亡率明显高于正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组(P<0.05);⑦结果说明,沉默TAK1表达后能够增强泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡的作用,可能与JNK信号通路相关。

刺山柑总生物碱对系统性硬皮病转化生长因子-β_1/Smad4通路的调控作用

目的研究刺山柑总生物碱对系统性硬皮病(SSc)转化生长因子-β_1(TGF-β_1) Smad4通路的调控作用。方法将90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、青霉胺组(125 mg·kg^(-1))及刺山柑总生物碱小(225 mg·kg^(-1))、中(450 mg·kg^(-1))、大(900 mg·kg^(-1))剂量组。除正常对照组外,其余5组小鼠背部注射盐酸博莱霉素建立SSc模型,成模后受试药组小鼠背部外敷刺山柑总生物碱乳膏,青霉胺组给予青霉胺灌胃,正常对照组、模型对照组背部外敷不含药基质,每天1次,连续60 d。末次给药后,Western blotting检测皮肤TGF-β_1表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠皮肤组织激活素受体样激酶1(ALK1)、Smad4及核因子-κB (NF-κB)水平。结果与模型对照组比较,刺山柑总生物碱各剂量组TGF-β_1及刺山柑总生物碱大剂量组ALK1和Smad4表达明显降低(P<0.05或P<0.01),皮肤NF-κB含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论刺山柑总生物碱能下调SSc小鼠TGF-β_1、ALK1与Smad4异常表达,对SSc小鼠TGF-β_1/Smad4通路有一定抑制作用。

银杏叶提取物对TGF-β1诱导增殖的SD乳鼠心肌成纤维细胞生长抑制作用及其机制

目的观察银杏叶提取物(GBE)对TGF-β1诱导增殖的SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFb)生长抑制作用,并探讨其机制。方法取出生1~3 d的SD乳鼠CFb分为4组,其中TGF-β1组加入20 ng/mL的TGF-β1溶液,低浓度GBE组加入20 ng/mL的TGF-β1溶液和2μg/mL的GBE溶液,高浓度GBE组加入20 ng/mL的TGF-β1溶液和20μg/mL的GBE溶液,对照组加入等量含10%胎牛血清的DMEM。取各组细胞,继续培养48 h,采用MTT比色法测算各组细胞增殖率,采用荧光定量PCR法检测各组细胞结缔组织生长因子(CTGF)、氨基末端激酶(JNK)、P38 mRNA。结果TGF-β1组、低浓度GBE组、高浓度GBE组、对照组细胞增殖率分别为124.1%±13.4%、106.1%±7.5%、83.5%±5.2%、100.0%,其中TGF-β1组与对照组、高浓度GBE组相比,P均<0.05。TGF-β1组细胞CTGF、JNK、P38 mRNA相对表达量均高于对照组(P均<0.05),高浓度GBE组细胞CTGF、JNK、P38 mRNA相对表达量均低于对照组和TGF-β1组(P均<0.05)。结论高浓度GBE(20 ng/mL)对TGF-β1诱导增殖的SD乳鼠CFb有生长抑制作用,其机制可能与下调TGF-β1-samd/TAK1信号通路中CTGF、JNK、P38基因表达有关。

荔枝核总黄酮通过抑制TLR4-TAK1抗大鼠肝纤维化的机制分析

目的探讨荔枝核总黄酮对四氯化碳(CCl 4)诱导的肝纤维化模型的抗肝纤维化作用机制。方法利用40%CCl 4-花生油溶液背部皮下注射构建肝纤维化大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、扶正化瘀组、荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设空白组。连续灌胃给药8周后,取肝左大叶进行HE染色,观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR法检测各组大鼠肝脏ColⅠ、ColⅢ、α-SMA mRNA的表达水平;并通过Western blotting检测大鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)、磷酸化转化生长因子β激活激酶1(P-TAK1)、氨基末端蛋白激酶(JNK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)的表达情况。结果肝组织HE染色显示,与肝纤维化模型大鼠比较,荔枝核总黄酮各剂量均能不同程度的改善大鼠肝脏炎症浸润情况。肝纤维化相关因子检测显示,荔枝核总黄酮各剂量肝脏ColⅠ、ColⅢ与α-SMA mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与模型组比较,荔枝核总黄酮低、中剂量组肝脏TLR4、P-TAK1蛋白表达下降(P<0.05),低剂量组的肝脏P-JNK蛋白也降低(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮能减轻CCl 4诱发的大鼠肝纤维化,此作用可能与抑制肝脏TLR4-TAK1通路有关。

miR-143-3p通过靶向TAK1抑制肺癌增殖和侵袭

目的:分析miR-143-3p在肺癌细胞中的表达情况以及对肺癌进展的作用。方法:通过starBase数据库和肺癌病例组织检测分析miR-143-3p在肺癌组织和正常对照组织中的表达差异;分析miR-143-3p在肺癌细胞HCC27、H1975、A549和肺上皮细胞BEAS-2B中的mRNA水平差异;采用CCK-8法检测miR-143-3p对肺癌细胞增殖活性的影响;采用Transwell实验检测miR-143-3p对肺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过qRT-PCR检测miR-143-3p对整合素α6(ITGA6)、锚蛋白重复及PH结构域3(ASAP3)、黑色素瘤相关抗原A9(MAGE-A9)和转化生长因子β激活激酶1(TAK1)表达的影响;通过Western印迹检测miR-143-3p对TAK1蛋白表达的影响。结果:starBase分析和肺癌病例组织检测结果显示miR-143-3p在肺癌组织中低表达,同样地,miR-143-3p在肺癌细胞中的表达也显著低于正常肺上皮细胞;过表达miR-143-3p抑制了肺癌细胞的增殖活性、迁移和侵袭能力;过表达miR-143-3p显著抑制TAK1的表达。结论:miR-143-3p在肺癌中通过靶向TAK1抑制肺癌的增殖和侵袭,miR-143-3p在肺癌进展中详细的分子作用机制和信号通路仍须进一步探讨。

GSK3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1和血清PAI-1表达的影响

目的观察糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)抑制剂Licl对糖尿病肾病(DN)大鼠的影响,从而明确GSK-3β抑制剂对DN的作用机制。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组(NC组,n=10),Licl组(n=10),DN组(n=20),DN+Licl组(n=20)。通过一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合长期高脂饮食,建立DN大鼠模型;通过腹腔注射GSK-3β抑制剂Licl进行药物干预。观察各组大鼠一般状态、体重、肾重/体重的变化;检测血糖、尿量、尿蛋白、血肌酐等指标;肾脏PAS染色观察各组大鼠肾脏病理改变;ELISA方法检测各组大鼠血清纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的水平,IHC方法检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,进行组间比较。结果与NC相比,DN组大鼠一般状态、体重、肾重/体重、血糖、血肌酐、尿量、尿蛋白、肾脏病理均出现了DN特有的变化特征,血清PAI-1明显增高,肾组织TGF-β1的表达明显上调。DN+Licl组较DN组大鼠存活率高,尿蛋白、血清PAI-1表达显著减少,肾脏病理较DN组明显减轻,而肾组织TGF-β1表达明显增加。结论 GSK-3β抑制剂Licl能够降低DN大鼠血清PAI-1水平、蛋白尿及死亡率。DN大鼠较正常大鼠肾组织TGF-β1表达明显上调,GSK-3β抑制剂Licl能进一步增加DN大鼠肾组织TGF-β1蛋白的表达。抑制GSK-3β,对治疗DN有积极的意义。但是GSK-3β抑制剂Licl作为药物治疗DN,应考虑其效应的两面性。

草鱼TAB2与TAK1蛋白互作鉴定及其对两种抗菌肽基因表达的影响

为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利用荧光共定位、免疫共沉淀及Western blot技术鉴定Ci TAB2与Ci TAK1在细胞内共定位及相互作用情况。最后将过表达质粒pEGFP-N1-Citak1与pEGFP-N1-Citab2共同转染草鱼肾细胞(CIK细胞),检测Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平。结果显示,拟态弧菌感染能够显著改变Citab2和Citak1的相对表达水平,前者于感染后不同时间在各检测组织中表现出不同的时空表达模式,而后者均呈现先上调后下调的表达模式;荧光显微镜下观察到Ci TAB2与Ci TAK1共定位于转染后的HEK293T和CIK细胞的胞质中,且在HEK293T细胞内能够形成Ci TAB2-Ci TAK1蛋白复合物;共同过表达Ci TAB2与Ci TAK1后,CIK细胞内Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平在各检测时间点均显著上调。结果表明,Ci TAB2与Ci TAK1存在互作关系且二者互作能够促进上述两种抗菌肽的转录表达。本研究从蛋白互作调控抗菌肽表达的角度为防治鱼类弧菌病提供了新策略。

胃肠道间质瘤中TGF-β_1、uPA的表达及其意义

目的:探讨胃肠道间质瘤中TGF-β1、uPA的表达及其在胃肠道间质瘤(GIST)发生及发展中的作用。方法:应用RT-PCR和Western-blot方法检测93例GIST标本中TGF-β1、uPA mRNA和蛋白水平表达。结果:TGF-β1、uPA mRNA及蛋白在GIST组织中呈现高表达,TGF-β1、uPA mRNA及蛋白变化与NIH分级、肿瘤侵袭转移及黏膜受侵密切相关(P<0.05),二者呈现正相关(r=0.356,P<0.05)。结论:GIST中TGF-β1、uPA mRNA及蛋白均呈现高表达,并且可能在GIST发生发展中起重要作用。

转化生长因子-β激活激酶1在病理性心肌肥大中的作用研究进展

转化生长因子-β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)是促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinase, MAPKKK)家族的成员之一,参与调节一些重要的生物功能。心肌肥大分为生理性心肌肥大和病理性心肌肥大,它们的发生机制和蛋白表达不同。TAK1既参与正常心肌的发育,也在调节病理性心肌肥大发生和发展中发挥着重要的作用。血管紧张素II (angiotensin II, AngII)或压力负荷通过不同的方式,如经低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)促进TAK1转录和表达,或经转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)、甲状腺激素及泛素蛋白酶等促进TAK1磷酸化或泛素化,诱导病理性心肌肥大。本文就TAK1在病理性心肌肥大发生和发展中的作用进行综述,为临床心肌肥大的防治提供重要策略和潜在靶点。

有氧运动通过抑制TAK1-MAPK信号通路改善压力超负荷诱导的心肌重构

目的:探讨有氧运动在压力超负荷诱导的心肌重构中的作用及机制。方法:将6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术+对照(Sham+CON)组、假手术+游泳(Sham+SWIM)组、主动脉缩窄+对照(TAC+CON)组、主动脉缩窄+游泳(TAC+SWIM)组。手术后1周游泳组小鼠开始有氧运动训练。运动训练结束后,采用超声心动图检测小鼠心功能,HE染色、Masson染色和TUNEL染色分别检测心肌细胞横截面积、心肌间质纤维化和心肌细胞凋亡情况。蛋白质印迹(Western blot)法检测心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、胶原蛋白(Collagen)Ⅰ和Ⅲ、Bax、Bcl-2、磷酸化转化生长因子-β-激活激酶1(p-TAK1)、磷酸化c-Jun N-末端激酶1/2(p-JNK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和磷酸化P38(p-P38)蛋白表达水平。结果:超声心动图检测发现,与Sham+CON组相比,TAC+CON组左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)明显降低(均P<0.05);有氧运动可显著提高TAC小鼠的LVFS和LVEF(均P<0.05)。HE染色、Masson染色和TUNEL染色显示,有氧运动明显降低TAC小鼠的心肌细胞横截面积、心肌间质纤维化和心肌细胞凋亡水平(均P<0.05)。Western blot分析显示,与Sham+CON组相比,TAC+CON组ANP、BNP、Bax、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表达水平升高,Bcl-2表达降低,TAK1、JNK1/2、ERK1/2和P38蛋白的磷酸化水平升高(均P<0.05)。有氧运动后,ANP、BNP、Bax、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表达水平降低,Bcl-2表达升高,TAK1、JNK1/2、ERK1/2和P38蛋白的磷酸化水平降低(均P<0.05)。结论:有氧运动可以通过抑制TAK1-MAPK通路改善TAC小鼠的心功能,改善心肌间质纤维化,减少压力超负荷诱导的心肌细胞凋亡。

TAK1抑制剂对糖尿病大鼠MAPK与NF-κB信号通路的影响及其对肾脏保护机制

目的探讨TAK1抑制剂对糖尿病大鼠MAPK及NF-κB信号通路的影响及其对肾脏的保护机制。方法将48只大鼠按照随机数字表法分为DN组、TAK1组和对照组,每组16只。对照组大鼠正常喂养,不做任何处理;DN组、TAK1组通过向大鼠腹腔注射1%50 mg/kg STZ建立DN大鼠模型。每组分别于4周、8周时处死8只大鼠,观察各组大鼠肾脏组织病理变化,检测血清TNF-α、MCP-1、IL-1β表达,肾脏组织p38MAPK、NF-κBp63蛋白表达及p38MAPK、NF-κBp63 mRNA表达。结果 4周、8周时,DN组、TAK1组大鼠体质量、血糖、UAER均显著高于对照组(P<0.05),DN组大鼠体质量、UAER显著高于TAK1组(P<0.05)。DN组、TAK1组血清TNF-α、MCP-1、IL-1β水平显著高于对照组(P<0.05),DN组大鼠上述指标高于TAK1组(P<0.05);DN组、TAK1组p38MAPK、NF-κBp63蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),其中DN组上述指标高于TAK1组(P<0.05)。结论 TAK1通过激活MAPK及NF-κB信号通路来诱导炎症反应,并参与糖尿病肾脏损伤;TAK1抑制剂能够下调炎症因子的表达和释放而发挥抗炎作用。

TGF-β1受体ALK1和ALK5在翼状胬肉和正常结膜组织中的差异表达

目的:研究不同种类的转化生长因子β-1(TGF-β1)激活素受体样激酶(ALK)在翼状胬肉和正常结膜组织中的表达及其意义。方法:前瞻性研究。选取2020-06/12在徐州医科大学附属医院眼科就诊的40例手术中切除的翼状胬肉标本和40例白内障手术获取的正常结膜标本纳入本次研究。使用ALK1、ALK5免疫组织化学染色观察TGF-β1受体在胬肉和正常结膜组织中的表达定位,并统计染色阳性细胞比例;使用RT-PCR检测ALK1、ALK5 mRNA在胬肉和结膜组织中的表达;并以Western Blot检测ALK1、ALK5蛋白的表达。结果:根据免疫组织化学染色结果,ALK1在翼状胬肉组中的表达水平较正常结膜组明显升高,并且在整个翼状胬肉上皮细胞中均有表达,而在正常结膜组织中仅在上皮细胞的基底层中有表达;两组上皮细胞基底层均检测到ALK5,而翼状胬肉组ALK5水平较正常结膜组下降。两组间ALK1、ALK5阳性细胞比例有显著的差异(均P<0.05)。RT-PCR结果显示,与结膜组织相比,ALK1 mRNA在翼状胬肉中的表达明显增强,ALK5的表达明显减弱,两组间有显著差异(均P<0.05),Western Blot结果显示ALK1、ALK5蛋白的表达差异与RT-PCR结果基本一致。结论:翼状胬肉和正常结膜ALK的表达谱有明显的差异。与正常结膜组织相比,翼状胬肉组织的ALK1表达增强,ALK5表达减弱,表明TGF-β信号通路处于不同的活化状态,对于进一步研究翼状胬肉的发病机制提供实验依据。

基于TLR4/TAK1/NF-κB途径探讨MCAO大鼠缺血局部脑皮质微血管新生的内在机制

目的 探讨Toll样受体4/转化生长因子(TGF)-β激活激酶1/核因子(TLR4/TAK1/NF)-κB途径对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠缺血局部脑皮质微血管新生的内在机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、阴性病毒(NC)组和siRNA-TLR4转染(siRNA-TLR4)组各10只,除Sham组外,其余各组均采用线栓法建立MCAO大鼠模型,造模后1h假手术组与模型组均给予尾静脉注射等量生理盐水,阴性病毒组给予尾静脉注射阴性对照病毒,siRNA-TLR4转染组给予尾静脉注射siRNA-TLR4腺病毒。苏木精-伊红(HE)染色观察缺血局部脑皮质病理变化;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积;末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠缺血局部脑皮质细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测微血管内皮细胞数目;免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)、Ang-1、促血管生成素(Ang)-2表达水平;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测TLR4、转化生长因子(TGF)-β、TAK1、NF-κB p65 mRNA表达水平;Western印迹检测TLR4、TAK1和NF-κB p65蛋白表达。结果 沉默TLR4表达可改善脑组织损伤程度,明显降低脑梗死面积和脑皮质细胞凋亡率(P<0.01,P<0.05),明显促进脑皮质微血管内皮细胞(BMECs)增殖(P<0.05),明显上调血管新生相关因子VEGF、Ang-1和Ang-2表达(P<0.05),明显下调TLR4、TAK1、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论 TLR4/TAK1/NF-κB途径通过增加缺血局部脑皮质新生血管形成,从而改善脑缺血对脑组织的损伤。