阿托伐他汀对新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA的影响(英文)

目的探讨阿托伐他汀对醛固酮诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养乳鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR检测心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA的表达。结果给予醛固酮(10-7mol/L)4h后,TGF-βRⅠmRNA表达开始增加,8h达高峰;提前给予阿托伐他汀(10-6,10-5,10-4mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮诱导的TGF-βRⅠmRNA表达,而甲羟戊酸可逆转阿托伐他汀的这种抑制作用。结论阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。

六味地黄颗粒对哮喘大鼠转化生长因子-βⅠ、Ⅱ型受体影响的研究

目的探讨六味地黄颗粒对哮喘大鼠肺部TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量的干预作用;方法逆转录-荧光实时定量PCR法检测大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量,比较正常组、哮喘模型组、各用药组之间两个指标水平的差异;结果联合用药组的大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA接近,均接近于于正常组,且显著低于模型组;结论六味地黄颗粒能够协同激素类药物,下调哮喘大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA的表达。

USP4通过去泛素化转化生长因子-βⅠ型受体调控乳腺癌细胞的生物学活性

目的观察泛素特异性蛋白酶USP4对转化生长因子-βⅠ型受体（TGFβRI）的去泛素化调节及其对乳腺癌细胞生物学活性的调控。方法通过慢病毒感染构建过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株BT-549。在乳腺癌细胞中表达外源性泛素，通过泛素化实验验证USP4对TGFβRI的泛素化修饰。采用克隆形成实验和划痕实验检测USP4对乳腺癌细胞克隆形成能力、迁移能力的影响。结果过表达USP4的稳定乳腺癌细胞株中USP4mRNA的表达量（△Ct=3．43±0．05）是空白对照细胞（△Ct=7．26±0．03）的14．22倍，差异有统计学意义（t=69．350，P=0，000）；USP4蛋白的表达量是空白对照细胞的4．99倍，差异有统计学意义（t=28．440，P=0．000）。过表达USP4后TGFβ3RI的体外泛素化水平明显降低。在克隆形成实验中，稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞克隆形成率分别为（25．83±1．01）％、（11．83±0．60）％、（7．17±0．60）％，分别t=11．880、15．840，差异有统计学意义（P=0．000）。在划痕试验中，放大200倍视野下观察稳定过表达USP4、病毒对照及空白对照的BT-549细胞，每个视野可见发生迁移的细胞个数为（56．67±1．76）、（27．00±1．16）、（27．33±1．45）个，t=14．070、12．840，差异有统计学意义（P=0．000）。结论USP4可通过其去泛素化酶的活性解除TGFβRI耦联的泛素链稳定TGFβRI的表达，从而增强乳腺癌细胞的生物学活性。

联合应用TGF-β、TGF-βR siRNA对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路相关基因表达的抑制

目的:探讨TGF-β1、TGF-β1RsiRNA联合应用对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路的干预作用.方法:清洁级健康大鼠36只分为2组:正常对照组(n=6,注射生理盐水)与实验组(n=30).实验组动物在实验第1天和第5天腹腔注射CCl4花生油溶液6mL/kg,造成急性肝损伤并启动TGF-β/Smad信号传导通路.实验分为TGF-β1shRNA干预组(T);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA干预组(T+R1);TGF-β1shRNA+TβRⅡsiRNA干预组(T+R2);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA+TβRⅡshRNA干预组(T+R1+R2)和模型对照组(M).观察各实验组血清ALT、AST、HA;肝组织学RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中α-SMA、COL-1、COL-3、TGF-β1、Smad3、PCNA和TGF-αmRNA及蛋白的表达.结果:经shRNA质粒DNA干预的4个治疗组与模型组比较,均能显著降低血清ALT,AST及HA的水平(ALT:592.80±98.4IU/L,440.80±91.9IU/L,461.61±120.0IU/L,284.00±49.0IU/Lvs949.5±196.1IU/L;AST:686.80±112.3IU/L,591.00±99.87IU/L,607.50±84.8IU/L,398.30±61.9IU/Lvs985.67±274.8IU/L;HA:5682.80±824.14μg/L,2871.26±394.68μg/L,3004.29±354.25μg/L,1982.12±402.71μg/Lvs8444.65±812.15μg/L,P<0.05)的测定值;4个治疗组两两比较,T+R1+R2组疗效明显高于其他3组(P<0.01).与模型组比较.shRNA质粒DNA干预能明显抑制TGF-β1,Smad3,α-SMA,COL-1及COL-3的mRNA与蛋白的表达(均P<0.05).其抑制效果以T+R1+R2组最明显.对蛋白水平表达的作用也有相似趋势.结论:针对TGF-βRⅠ及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的siRNA联合治疗对小鼠肝损伤中TGF-β/Smad信号传导通路相关的基因表达的抑制具有协同作用.

糖尿病大鼠肾脏TGF-β受体蛋白表达的实验研究

目的：探讨持续高血糖对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)和转化生长因子βII型受体(TGFβRII)蛋白表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠20只随机分为正常对照组（C组）和糖尿病组（D组），实验第9周用免疫组化和图像分析系统检测两组肾脏TGFβRI和TGFβRII蛋白表达水平。结果：与对照组相比，糖尿病组TGFβRI和TGFβII蛋白表达分别增加100%和118%（P<0.01）。结论：持续高血糖显著增加糖尿病大鼠肾脏TGFβRI和TGFβRII受体蛋白表达，可能对糖尿病肾病的发生发展发挥重要作用。

槲皮素对大鼠角膜碱烧伤后瘢痕形成的影响

目的探讨槲皮素(quercetin,QU)在大鼠角膜碱烧伤后抑制瘢痕形成的可能作用及其机制。方法建立SD大鼠角膜碱烧伤模型,以右眼为实验眼。SD大鼠随机分为5组,对照组术后予眼膏基质,QU治疗组分别予2.5、5、10、20 g/kg QU眼膏。术后裂隙灯显微镜检查,记录角膜混浊程度。于术后第4、7、14、21、28天处死动物,行组织学染色观察炎性细胞的浸润;Masson三色染色法观察角膜基质层胶原纤维的排列和增殖;免疫组织化学方法检测各组角膜组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和转化生长因子-βⅠ受体(TGF-βRⅠ)的表达。结果术后QU治疗组的角膜组织病理改变及角膜混浊程度较对照组轻,10 g/kg QU和20 g/kg QU组抑制角膜瘢痕形成作用强于2.5 g/kg QU和5 g/kg QU组,且10 g/kg QU和20 g/kg QU组间比较无统计学差异。HE染色和Masson染色均显示QU治疗组角膜基质层胶原纤维的密度较对照组低。碱烧伤后第7天TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达达高峰,之后逐渐减少,接近正常水平;10 g/kg QU和20 g/kg QU组抑制TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达作用强于2.5 g/kg QU和5 g/kg QU组,且10 g/kg QU和20 g/kg QU组间比较无统计学差异。结论QU眼膏具有一定程度减轻瘢痕化的作用,尤以10 g/kg浓度最佳。QU可能通过抑制TGF-β1和TGF-βRⅠ的表达发挥其作用。

LncRNA MRAK052509对矽尘诱导RLE-6TN中TGF-β信号通路与纤维化影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MRAK052509对矽尘诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞株RLE-6TN中转化生长因子-β(TGF-β)/SMAD信号通路及下游相应纤维化因子表达的影响。方法(1)建立大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系,随机分为对照组和模型组,模型组予剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测2组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509相对表达水平。(2)将RLE-6TN随机分为对照组、阴性对照组和敲减组,后2组分别以阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒转染,以qPCR法检测转染效率。(3)将NR8383/RLE-6TN细胞共培养体系随机分为4组,对照组和矽肺模型组下室均种入RLE-6TN细胞,阴性对照组和敲减组下室分别种入稳定转染阴性对照病毒和lncRNA MRAK052509敲减病毒的RLE-6TN细胞。除对照组外,其余3组向Transwell上室加入剂量为400 mg/m^(2)的游离二氧化硅刺激24 h后,收集RLE-6TN。采用qPCR法检测RLE-6TN中TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、Smad3和纤维黏连蛋白(FN)的mRNA相对表达水平,以蛋白免疫印迹法检测RLE-6TN中TGF-βRⅠ、SMAD3、磷酸化SMAD3(p-SMAD3)、FN、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和Ⅲ型胶原(COLⅢ)蛋白相对表达水平。结果(1)模型组RLE-6TN细胞的lncRNA MRAK052509 mRNA表达水平较对照组升高(P<0.01)。(2)敲减组RLE-6TN中lncRNA MRAK052509 mRNA相对表达水平分别低于空白对照组和阴性对照组(P值均<0.05)。(3)与对照组比较,模型组RLE-6TN中TGF-βRⅠ、Smad3、FN的mRNA相对表达水平和TGF-βRⅠ、SMAD3、p-SMAD3、FN、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达水平均升高(P值均<0.05);与矽肺模型组和阴性对照组比较,敲减组RLE-6TN中上述指标相对表达水平均下降(P值均<0.05)。结论敲减LncRNA MRAK052509可通过抑制TGF-βRⅠ的表达,阻断TGF-β/SMAD信号通路,延缓SiO2刺激所致RLE-6TN间质转化,下调FN、COLⅠ和COLⅢ等胶原纤维的表达,影响肺纤维化的进展。

N-乙酰半胱氨酸对矽尘诱导肺泡巨噬细胞自噬影响

目的探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383在染尘不同时间的自噬活动影响。方法常规培养NR8383细胞,染尘3、6、12、20、24 h,并给予NAC,分别收集细胞上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-βⅠ(TGF-βⅠ)表达水平,自噬水平检测采用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法。结果体外巨噬细胞染尘模型最佳时间为20 h;NAC+矽尘组NR8383细胞TNF-α表达[(116.82±8.98)pg/mL]低于矽尘组[(1823.58±764.85)pg/mL](P<0.05);NAC+矽尘组NR8383细胞TGF-βⅠ表达[(8.27±3.62)pg/mL]与矽尘组[(14.28±5.71)pg/mL]比较差异无统计学意义(P>0.05);NAC+矽尘组与矽尘组NR8383细胞LC3蛋白表达[分别为(3.52±0.57)、(3.84±0.53)pg/mL]高于对照组[(2.24±0.56)pg/mL];免疫荧光结果显示,矽尘组NR8383细胞在20 h荧光信号强于对照组;NAC+矽尘组NR8383细胞荧光强度与矽尘组无明显差异。结论矽尘刺激使NR8383细胞自噬表达增强;NAC可降低细胞上清液中TNF-α分泌水平,NAC可能参与染尘肺泡巨噬细胞的炎症反应过程。