一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ型受体的构建

目的设计并构建一种新型的截短型转化生长因子-βⅡ受体(tTGF-βRⅡ)。方法 RT-PCR方法扩增TGF-βⅠ的CDS序列、tTGF-βRⅡ,并将其分别克隆至pGBKT7和pGADT7载体中。利用酵母双杂交和GST-pulldown试验检测tTGF-βRⅡ与TGF-βⅠ间的相互作用。人工合成该tTGF-βRⅡ多肽。结果成功地设计并克隆了一种新的tTGF-βRⅡ,其可以与配体TGF-βⅠ结合。结论制备的tTGF-βRⅡ可以作为TGF-βRⅡ的拮抗剂,竞争性的与TGF-βⅠ结合,为瘢痕治疗奠定了基础。

道地通管汤对输卵管炎大鼠转化生长因子-βⅡ型受体和Smad2的mRNA表达的影响

目的观察道地通管汤对输卵管炎大鼠输卵管组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)mRNA和Smad2 mRNA的影响。方法 68只雌性SD大鼠,随机抽取12只作为正常组,剩余大鼠采用混合菌制成输卵管炎模型,建模成功的48只大鼠分为模型组和道地通管汤低、中、高剂量组,各12只。正常组与模型组给予生理盐水灌肠,道地通管汤低、中、高剂量组分别给予不同浓度的道地通管汤灌肠[0.35 g/(100 g·d)、0.7 g/(100 g·d)、1.4 g/(100 g·d)],并于给药第15天、30天随机抽取每组6只大鼠检测其输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的相对表达量情况。结果 (1)与正常组比,模型组给药第15、30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均增高(P<0.05);道地通管汤各剂量组给药第30天时,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)与模型组比,给药第15、30天时道地通管汤中、高剂量组TGF-βRⅡ和Smad2mRNA的表达量均降低(P<0.05),给药第15天时道地通管汤低剂量组TGF-βRⅡ的表达量也降低(P<0.05)。(3)道地通管汤各剂量组中TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量呈低剂量组>中剂量组>高剂量组,给药第30天时道地通管汤低剂量组与道地通管汤高剂量组的TGF-βRⅡ表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)道地通管汤各剂量组中,给药第30天时TGF-βRⅡ和Smad2 mRNA的表达量均低于给药第15天,其中道地通管汤各剂量组中Smad2 mRNA的表达量组内比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论道地通管汤能抑制输卵管炎性大鼠输卵管组织中TGF-βRⅡ和Smad2的mRNA表达;道地通管汤给药30 d作用效果较好,且道地通管汤中剂量与高剂量作用效果相近。

转化生长因子-βⅡ型受体在胃癌中的表达及临床意义

目的 :研究TGF βRⅡ型受体在胃癌组织中的表达意义。 方法 :采用免疫组化SP法 ,检测 6 2例胃癌组织中TGF βRⅡ的表达情况。结果 :胃癌组织中TGF βRⅡ型受体表达阳性率为 14 5 % (9/6 2 ) ,与Rorrmann分型、浸润深度相关 (P <0 0 5 )。生存期超过 5年的患者阳性率显著高于生存期低于5年者 (P <0 0 5 )。结论 :TGF RⅡ参与胃癌的进展 。

靶向转化生长因子-βⅡ型受体核酸适配子结合位点预测及相关验证研究

目的预测转化生长因子-βⅡ型受体(TRβⅡ)胞外段蛋白与靶向适配子S58的结合位点,并在体外进行验证,证实S58的结构稳定性。方法通过适配子ssDNA序列建立其三维结构,在蛋白质数据库搜索受体蛋白TRβⅡ胞外段的晶体结构,运用计算机辅助技术对两个分子进行对接实验,根据结果指导剪切优化适配子结构,分别用生物传感器技术及蛋白免疫印迹法验证其亲和力。结果核酸适配子ssDNA S58与TRβⅡ胞外段蛋白结合的可信位点包括位点Ⅰ(T4、T5、G6、C7)、位点Ⅱ(G13、A14、T15、C16、G17、C18)、位点Ⅲ(T31、G32、T33、C34)及位点Ⅳ(G40、A41、T42、T43、T44、G45、G46)。S58与TRβⅡ胞外段蛋白的亲和力高,S58的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达明显较DMEM对照降低(P<0.05),根据结果剪切适配子S58后得到优化后的ssDNA亲和力、α-SMA表达均不如S58。结论核酸适配子S58为受体蛋白TβRⅡ的高特异性分子,具有一定稳定性,任何结构的改变均会降低与TβRⅡ的亲和力。计算机辅助的分子对接技术成为一项探索分子间作用的重要手段,为医学基础研究提供了良好的理论依据。

RNA干扰抑制转化生长因子-βⅡ型受体的表达改善食管癌术后吻合口狭窄

目的观察抑制转化生长因子-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）表达对食管成纤维细胞参与瘢痕形成的影响。方法利用5例食管癌术后患者吻合口狭窄处的活检组织，原代培养食管成纤维细胞并行细胞免疫化学鉴定。针对人TGF-βRⅡ基因序列设计合成的小片段RNA（siRNA）转染成纤维细胞，荧光显微镜观察转染效率；采用Westernblot和逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测TGF—βRⅡ和纤维粘连蛋白的表达；细胞划痕实验评价细胞迁移能力。结果原代食管成纤维细胞培养成功，细胞抗波形蛋白免疫荧光阳性。针对TGF-βRⅡ的siRNA转染成纤维细胞48h后转染效率达80％以上，与对照组比较明显抑制了TGF—βRⅡ和纤维粘连蛋白的表达（P〈0．05），并抑制了成纤维细胞（70．6±9．5）％的迁移能力。结论使用RNA干扰技术沉默食管成纤维细胞TGF-βRⅡ的表达抑制了其在瘢痕形成中的作用。

肺癌组织分型与转化生长因子-βⅡ型受体和肿瘤相关性巨噬细胞计数的关系

目的检测肺腺癌和肺鳞状细胞癌中转化生长因子-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）和肿瘤相关性巨噬细胞（TAMs）计数，探讨两者与肺腺癌和肺鳞状细胞癌的关系。方法应用免疫组织化学法检测TGF-βRⅡ蛋白和TAMs在肺腺癌和肺鳞状细胞癌组织中的表达，并与癌旁正常肺组织中的表达进行比较。结果（1）TGF-βRⅡ蛋白的表达在肿瘤组织中明显降低（P〈0．01），其表达下调与肺癌的组织学类型、淋巴结转移、临床分期相关（P〈0．05）。（2）TAMs在肿瘤间质内浸润数量明显增多（P〈0．01），并与肺癌的组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期密切相关（P〈0．05）。结论TGF-βRⅡ蛋白表达水平降低可促进肺癌的发生、浸润和转移，对肺腺癌发生或进展影响很大，并可能通过下调TGF-βRⅡ的表达、诱导TAMs至肿瘤间质，从而促进肿瘤的发生、发展，且这种作用在非小细胞肺癌中具有较普遍的意义。

胃癌中转化生长因子-βRⅡ、胰岛素样生长因子-ⅡR、Bax基因突变与微卫星不稳定性相关性研究

目的:检测胃癌组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(IGF-ⅡR)和Bax基因突变与微卫星不稳定性(MSI)发生情况,探讨其相关性以及MSI在胃癌发生发展中可能的作用机制。方法:胃镜下取36例胃癌标本,酚与氯仿法抽提基因组DNA,银染PCR-SSCP方法同时检测目的位点。结果:胃癌组织中TGF-BRⅡ、IGF-ⅡR和Bax基因发生突变分别有7例、6例和6例,MSI发生率达58.3％,3种基因突变均见于MSI阳性的胃癌,尤其是MSI-H型胃癌。结论:MSI可通过引起靶基因突变,特别是部分抑癌基因突变,促进了部分胃癌的发生发展。

葡萄籽提取物原花青素对长波紫外线诱导皮肤成纤维细胞表达TGF-βRⅡ与Smad7的影响

目的观察不同浓度葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对长波紫外线(UVA)诱导人皮肤成纤维细胞表达转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体和Smad7蛋白的影响。方法本实验选用体外培养的人皮肤成纤维细胞株(HSFs)为研究对象,实验主要分3组,空白对照组,单纯光照组(UVA照射人皮肤成纤维细胞),照光加药组(UVA照射细胞后予不同浓度GSPE干预)。应用免疫细胞化学技术检测UVA照射前、后及不同浓度GSPE干预后对皮肤成纤维细胞TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达的情况。结果与空白对照组相比,单纯UVA光照组人皮肤成纤维细胞TGF-βRⅡ蛋白表达下降(P<0.05),Smad7蛋白表达升高(P<0.05);与单纯光照组相比,UVA照射后经25μg/m L、50μg/m L和100μg/m L浓度GSPE处理后,成纤维细胞TGF-βRⅡ蛋白表达水平均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达水平均下降(P<0.05),且于50μg/m L和100μg/m L GSPE处理后,成纤维细胞TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达量均接近正常水平(P>0.05)。结论适当浓度GSPE可通过显著上调TGF-βRⅡ蛋白水平以及下调Smad7蛋白水平的表达来对抗UVA抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,进而减轻UVA所致细胞外基质的降解,延缓了皮肤光老化的进程。

TGF-βRⅡ、NF-κB在肺癌中的表达及肿瘤相关性巨噬细胞计数与肺癌临床病理特征的关系

目的通过对肺腺癌和肺鳞状细胞癌中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、核转录因子-κB(NF-κB)的表达及肿瘤相关性巨噬细胞(TAMs)计数的研究,探讨三者与肺腺癌和肺鳞状细胞癌的关系。方法应用免疫组织化学技术检测TGF-βRⅡ蛋白、NF-κB蛋白及肿瘤相关性巨噬细胞在肺腺癌和肺鳞状细胞癌组织中的表达,并与癌旁正常肺组织中的表达进行比较。结果①TGF-βRⅡ蛋白的表达在肿瘤组织中明显降低(P<0.01),其表达下调与肺癌的组织学类型、淋巴结转移、临床分期相关(均P<0.05)。②NF-κB蛋白的表达在肿瘤组织中明显增强(P<0.01),其表达增强与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期相关(P<0.01,P<0.05)。③TAMs在肿瘤间质内浸润数量明显增多(P<0.01),并与肺癌的组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期密切相关(P<0.05,P<0.01)。④TGF-βRⅡ蛋白与NF-κB蛋白的表达呈负相关(P<0.01),NF-κB蛋白的表达与TAMs的浸润数量呈正相关(P<0.01)。结论 TGF-βRⅡ蛋白表达水平降低可能促进肺癌的发生、浸润和转移,对肺腺癌发生或进展可能影响更大;NF-κB可能通过下调TGF-βRⅡ的表达、吸引肿瘤相关性巨噬细胞至肿瘤间质而促进肿瘤的发生、发展,且这种作用在非小细胞肺癌中具有较普遍的意义。

六味地黄颗粒对哮喘大鼠转化生长因子-βⅠ、Ⅱ型受体影响的研究

目的探讨六味地黄颗粒对哮喘大鼠肺部TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量的干预作用;方法逆转录-荧光实时定量PCR法检测大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA含量,比较正常组、哮喘模型组、各用药组之间两个指标水平的差异;结果联合用药组的大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA接近,均接近于于正常组,且显著低于模型组;结论六味地黄颗粒能够协同激素类药物,下调哮喘大鼠肺组织TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡmRNA的表达。

TGF-β_2、TGFβRⅡ、载脂蛋白CⅢ、脂联素及瘦素在妊娠糖尿病患者中的表达水平

目的探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_2及TGF-βⅡ型受体(transforming growth factor receptor-βtypeⅡ,TGFβRⅡ)、载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)CⅢ、脂联素(adiponectin,APN)及瘦素在妊娠糖尿病患者中的表达及对预后的影响。方法选择2014年4月至2016年4月本院产检的50例妊娠糖尿病患者纳入妊娠糖尿病组,另选取同期本院接诊的50例正常孕妇纳入对照组。比较两组研究对象TGF-β_2、TGFβRⅡ、Apo CⅢ、APN、瘦素表达水平及母婴结局。妊娠糖尿病组患者于确诊后进行常规治疗,1个月后记录血糖控制情况,并比较不同血糖控制效果的患者TGF-β_2、TGFβRⅡ、Apo CⅢ、APN、瘦素表达水平。结果妊娠糖尿病组患者TGF-β_2、TGFβRⅡ、Apo CⅢ、瘦素表达水平均显著高于对照组(P<0.05),APN表达水平显著低于对照组(P<0.05)。血糖控制良好患者的TGF-β_2、TGFβRⅡ、Apo CⅢ、瘦素表达水平显著低于血糖控制欠佳患者(P<0.05),APN表达水平显著高于血糖控制欠佳患者(P<0.05)。妊娠糖尿病组患者妊娠期高血压疾病、胎膜早破、羊水过多、产后出血的发生率均显著高于对照组(P<0.05),两组研究对象终止妊娠率无显著差异(P>0.05)。妊娠糖尿病组早产儿和新生儿窒息发生率均显著高于对照组(P<0.05),Apgar评分显著低于对照组(P<0.05),两组巨大儿、新生儿肺炎发生率均无显著差异(P>0.05)。结论妊娠糖尿病患者TGF-β_2、TGFβRⅡ、Apo CⅢ、瘦素表达水平显著升高,APN表达水平显著降低,且与疾病的发生、发展密切相关,可作为预测妊娠糖尿病病的重要指标。

结肠癌组织中TGFβ_1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Sm ad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制。方法用EnV ision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Sm ad4蛋白的表达情况。结果TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Sm ad4表达下降。Sm ad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05)。TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05)。结论TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用。Sm ad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Sm ad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达。

联合应用TGF-β、TGF-βR siRNA对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路相关基因表达的抑制

目的:探讨TGF-β1、TGF-β1RsiRNA联合应用对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路的干预作用.方法:清洁级健康大鼠36只分为2组:正常对照组(n=6,注射生理盐水)与实验组(n=30).实验组动物在实验第1天和第5天腹腔注射CCl4花生油溶液6mL/kg,造成急性肝损伤并启动TGF-β/Smad信号传导通路.实验分为TGF-β1shRNA干预组(T);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA干预组(T+R1);TGF-β1shRNA+TβRⅡsiRNA干预组(T+R2);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA+TβRⅡshRNA干预组(T+R1+R2)和模型对照组(M).观察各实验组血清ALT、AST、HA;肝组织学RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中α-SMA、COL-1、COL-3、TGF-β1、Smad3、PCNA和TGF-αmRNA及蛋白的表达.结果:经shRNA质粒DNA干预的4个治疗组与模型组比较,均能显著降低血清ALT,AST及HA的水平(ALT:592.80±98.4IU/L,440.80±91.9IU/L,461.61±120.0IU/L,284.00±49.0IU/Lvs949.5±196.1IU/L;AST:686.80±112.3IU/L,591.00±99.87IU/L,607.50±84.8IU/L,398.30±61.9IU/Lvs985.67±274.8IU/L;HA:5682.80±824.14μg/L,2871.26±394.68μg/L,3004.29±354.25μg/L,1982.12±402.71μg/Lvs8444.65±812.15μg/L,P<0.05)的测定值;4个治疗组两两比较,T+R1+R2组疗效明显高于其他3组(P<0.01).与模型组比较.shRNA质粒DNA干预能明显抑制TGF-β1,Smad3,α-SMA,COL-1及COL-3的mRNA与蛋白的表达(均P<0.05).其抑制效果以T+R1+R2组最明显.对蛋白水平表达的作用也有相似趋势.结论:针对TGF-βRⅠ及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的siRNA联合治疗对小鼠肝损伤中TGF-β/Smad信号传导通路相关的基因表达的抑制具有协同作用.

应用噬菌体随机12肽库筛选TβR Ⅱ特异性序列

目的从噬菌体随机12肽库中筛选TGF-β1Ⅱ型受体(TGF-beta receptorⅡ,TβRⅡ)的特异性序列,评估其对瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用。方法以人TGF-β1单克隆抗体为靶,在噬菌体随机12肽库中进行4轮生物筛选;应用ELISA法挑选结合活性较好的单克隆噬菌体,进行DNA序列分析;MTT法评估TGF-β1单克隆噬菌体对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学效应。结果测序共获得5种类似于TβRⅡ的特异性序列。MTT结果显示其中有3种噬菌体模拟肽能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。结论具有TβRⅡ特异性序列的噬菌体模拟肽能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖。

糖尿病大鼠肾脏TGF-β受体蛋白表达的实验研究

目的：探讨持续高血糖对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)和转化生长因子βII型受体(TGFβRII)蛋白表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠20只随机分为正常对照组（C组）和糖尿病组（D组），实验第9周用免疫组化和图像分析系统检测两组肾脏TGFβRI和TGFβRII蛋白表达水平。结果：与对照组相比，糖尿病组TGFβRI和TGFβII蛋白表达分别增加100%和118%（P<0.01）。结论：持续高血糖显著增加糖尿病大鼠肾脏TGFβRI和TGFβRII受体蛋白表达，可能对糖尿病肾病的发生发展发挥重要作用。

5-Aza-dC对硫酸铍诱导A549细胞中TβRⅡDNA甲基化的作用

目的探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对BeSO_(4)诱导人肺腺癌A549细胞中转化生长因子-βⅡ型受体(TβRⅡ)DNA甲基化的作用。方法建立BeSO_(4)染毒的A549细胞培养实验模型,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR)检测TβRⅡ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)和胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)的mRNA表达;用5-Aza-dC进行干预,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法检测TβRⅡDNA甲基化水平,用蛋白质印迹法(Western blot)检测TβRⅡ蛋白相对表达水平。结果根据细胞增殖结果建立低、中、高剂量组(终浓度分别为1、10和100μmol/L);BeSO_(4)可以诱导细胞形态变化,从椭圆形紧密连接的上皮细胞到纺锤形松散连接的间质细胞,并且随着暴露时间的延长,形态变化更加明显,BeSO_(4)在不同时间内诱导的细胞存活率随暴露时间延长而降低,最终选用细胞存活相对较多且低、中、高剂量组差异均有统计学意义的48 h作为干预时间;PCR结果显示:与对照组相比,BeSO_(4)各剂量组α-SMA、COL-Ⅲ和COL-Ⅰ的mRNA表达水平升高,这提示A549细胞胶原过量形成;与对照组相比,BeSO_(4)中、高剂量组的TβRⅡDNA甲基化水平分别增加77.52%和96.71%(P<0.05),5-Aza-dC干预组TβRⅡDNA甲基化水平较中剂量组降低28.60%(P<0.05);与对照组相比,BeSO_(4)低、中剂量组TβRⅡmRNA表达水平升高,中、高剂量组TβRⅡ蛋白相对表达水平分别升高117.49%、203.08%(P<0.05);5-Aza-dC干预后,TβRⅡ蛋白的表达水平较中剂量组降低15.22%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论5-Aza-dC干预可导致BeSO_(4)诱导的A549细胞TβRⅡDNA甲基化程度降低。

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系。方法应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响;FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化。结果不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性。结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化。