吡唑类转化生长因子-β受体激酶抑制剂的定量构效关系研究

用分子力学、分子模拟退火动力学、量子化学等方法对转化生长因子-β受体激酶(TβR-Ⅰ)的取代吡唑类抑制剂进行了结构优化.用遗传算法(GFA)并结合多元线性回归方法(MLR),对该类抑制剂进行了定量构效关系研究,筛选出了影响抑制剂活性的主要因素,建立了定量构效关系方程(QSAR).结果表明,分子的总偶极矩的Y分量的平方(μy)2、分子中喹啉环上的氮原子的净电荷QN3、Jurs的相对负电荷表面积RNCS描述等是影响该类化合物抑制活性的主要因素.所得模型对该类化合物关于TβR-Ⅰ的抑制活性有较好的预测效果(R2=0.834,Rcv2=0.575,s=0.243,F=13.439).

IGF-1R信号通路及上皮-间质转化对非小细胞肺癌A549细胞EGFR-TKIs获得性耐药的作用

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-1R)信号通路及上皮-间质转化(EMT)对EGFR野生型、K-ras突变型非小细胞肺癌A549细胞表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)获得性耐药的作用。方法选用EGFR野生型、K-ras突变型的非小细胞肺癌A549细胞,用吉非替尼将其诱导成耐药细胞A549/GR。MTT法检测细胞增殖,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力,qRT-PCR和Western blot法分别检测EMT标志分子及IGF-1R信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果 A549/GR对吉非替尼的敏感性显著下降(P<0.05)。与A549细胞比较,A549/GR细胞形态呈现间质化改变,侵袭和转移能力均显著增加(P<0.05)。A549/GR细胞中间质标志Vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增多(P<0.05),上皮标志E-Cadherin表达量显著减少(P<0.05)。与A549细胞相比,A549/GR细胞IGF-1R的mRNA和蛋白及其磷酸化表达量均未见明显改变(P>0.05),而AKT磷酸化水平及其mRNA水平明显上调(P<0.05),ERK蛋白及其磷酸化和mRNA表达量均明显增加(P<0.05)。A549/GR细胞的EGFR及其磷酸化蛋白表达量较A549细胞明显下降(P<0.05)。结论 EMT及AKT和ERK信号通路的激活均可能在EGFR野生型、K-ras突变型A549细胞的EGFRTKIs获得性耐药中起重要作用,但获得性耐药与IGF-1R表达无关。

上皮-间质转化和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药中的作用

目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(insulin-like growth factorⅠreceptor,IGF-1R)在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)获得性耐药中的作用。方法:选用EGFR基因突变型和野生型的人肺腺癌细胞PC-9和H460,分别用吉非替尼和厄洛替尼将其诱导成耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞。MTT法检测各组细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测IGF-1R及EGFR信号通路分子及EMT相关分子的蛋白和mRNA表达。结果:PC-9/ZD和H460/ER为EGFR-TKI获得性耐药细胞,分别对吉非替尼和厄洛替尼的敏感性显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与PC-9和H460细胞相比,耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞形态呈现间质细胞表型,细胞侵袭和迁移能力增加(P<0.05)。PC-9/ZD和H460/ER细胞中间质标志分子vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增加(P<0.05),PC-9/ZD细胞的E-cadherin表达量显著减少(P<0.05)。与PC-9和H460细胞相比,PC-9/ZD与H460/ER细胞的IGF-1R及其磷酸化蛋白表达量显著增加(P<0.05),AKT和ERK磷酸化水平明显上调(P<0.05)。PC-9/ZD细胞的EGFR磷酸化水平与PC-9细胞相比未见明显差异(P>0.05),而H460/ER细胞的EGFR磷酸化水平较H460细胞显著降低(P<0.05)。结论:EGFR突变型PC-9细胞和野生型H460细胞的获得性耐药细胞中均发生了EMT,并且IGF-1R信号蛋白表达增多,提示EMT及IGF-1R信号转导通路均可能在NSCLC的EGFR-TKIs获得性耐药中起重要作用。

EGFR-TKI获得性耐药相关T790M突变与非小细胞肺癌上皮间质转化和IGF-1R的相关性研究

目的 研究表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)获得性耐药相关T790M突变与非小细胞肺癌上皮间质转化(EMT)和胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)的相关性。方法 选择我院2014年3月-2015年4月期间进行EGFR-TKI治疗并发生耐药的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者64例,根据T790M突变情况分为突变组和未突变组,随访病情转归,检测肿瘤组织中EMT标志基因和IGF-1R通路分子的表达量。结果 突变组患者无进展生存期及总生存期均显著短于未突变组(P<0.05);突变组肿瘤组织中波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、IGF-1R、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、细胞外信号调节激酶(ERK)的mRNA表达量显著高于未突变组,E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA表达量显著低于未突变组,差异均有统计学意义。结论 EGFR-TKI获得性耐药相关T790M突变可促进NSCLC肿瘤组织发生EMT和IGF-1R通路激活。

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的 了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果 TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论 TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,?

M3型乙酰胆碱受体对血管平滑肌细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达及机制

目的 探讨M3型乙酰胆碱受体（M3R）对血管平滑肌细胞Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达影响及其机制.方法 体外培养A7r5大鼠主动脉平滑肌细胞株,Western blot法测定COL-Ⅰ、细胞外信号调节激酶1/2 （ERK1/2）、磷酸化ERK1/2 （p-ERK1/2）和转化生长因子-β1 （TGF-β1）表达.结果 乙酰胆碱（Ach 1.0×10^-7、1.0×10^-6、1.0×10^-5 mol/L,2h）呈浓度依赖性促进COL-Ⅰ的表达（P＜0.05）,M3R特异性阻断剂4-DAMP抑制Ach（1.0×10^-6mol/L）介导COL-Ⅰ表达（1.302±0.181比1.892±0.292,P＜0.05）;M3R促进p-ERK1/2表达上调（165％,P＜0.05）,ERK1/2特异性抑制剂U0126抑制M3R介导的COL-Ⅰ表达（1.421±0.176比1.912±0.190,P＜0.05）;M3R促进TGF-β1的表达（194％,P＜0.05）,TGF-β1特异性抑制剂SB431542抑制M3R介导的p-ERK1/2表达上调（1.121 ±0.059比1.875±0.078,P＜0.05）.结论 M3R通过激活TGF-β1-ERK1/2信号通路促进COL-Ⅰ的表达。

芳基/杂环芳基取代的吡唑类化合物的QSAR研究

用分子力学、分子模拟退火动力学、量子化学等方法对转化生长因子-β受体激酶(TβR-Ⅰ)的取代吡唑类抑制剂进行了结构优化.用遗传算法(GFA)并结合多元线性回归技术(MLR),对该类抑制剂进行了定量构效关系研究,筛选出了影响抑制剂活性的主要因素,建立了定量构效关系方程(QSAR).结果表明,抑制剂分子的最高占据轨道能量EHOMOJ、urs的面积加权部分负电荷表面积WNSA1等是影响AHSPs抑制活性的主要分子参数.所得模型对该类化合物关于TβR-Ⅰ的抑制活性有良好的评估和预测效果(R=0.977,R2cv=0.864,s=0.178,F=51.93).

芳基／杂环芳基取代的吡唑类化合物的定量构效关系研究

用分子力学、模拟退火分子动力学、量子化学等方法对转化生长因子-β受体激酶（TβR-Ⅰ）的取代吡唑类抑制剂进行了结构优化．用遗传算法（GFA）并结合多元线性回归技术（MLR），对该类抑制剂进行定量构效关系研究，筛选出了影响抑制活性的主要因素，建立定量构效关系方程（QSAR）．结果表明，分子的总偶极矩的Y分量μy、分子的最低空轨道（LUMO）与最高占据轨道（HOMO）的能量差△E、Jurs的分子中原子正电荷加权表面积分率FPSA3等是影响该类化合物抑制活性的主要因素．所得模型对该类化合物关于TβR-Ⅰ的抑制活性有较好的预测效果（R=0．898，RCV^2=0．642，s=0．263，F=11．105）．

取代吡唑类化合物对肿瘤抑制活性的QSAR研究与分子设计

采用量子化学中的密度泛函理论(DFT)方法,在B3LYP/6-31++G(d,p)基组水平上系统计算了TβR-I抑制剂吡唑类衍生物(AHSPs)的量子化学结构参数。用逐步线性回归方法(SR)对该类AHSPs化合物进行了定量构效关系研究,筛选出了影响化合物抑制活性的主要因素,得到了最优QSAR方程。研究结果表明,抑制剂分子的偶极矩μ、疏水系数logP、分子中吡啶环的7-N原子的Mulliken电荷是影响AHSPs类化合物的抑制活性的主要因素。偶极矩μ和疏水系数logP越小,吡啶环的7-N原子Mulliken净电荷越正,则化合物的抑制活性越强。所得模型对该类吡唑类化合物针对TβR-Ⅰ的抑制活性有较好的预测结果,据此设计出14个新型AHSPs分子,计算其量子力学参数,利用构效方程预测出新型AHSPs分子的性能,发现其中有3个分子可能有较好的理论抑制活性。