转化生长因子-β_2体外诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的观察

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)在转化生长因子(TGF-β2)诱导下向软骨细胞表型转化的能力,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可能性。方法抽取兔髂骨骨髓液3～4ml,进行原代和传代培养,传代后实验组以高糖DMEM无血清特定培养液诱导,培养液含TGF-β210ng/ml、地塞米松10-7mol/L、维生素C50μmol/L;对照组以高糖DMEM无血清培养液培养,相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变,诱导21d后细胞形态变化最为显著,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色深而均匀。结论TGF-β2可有效诱导MSCs向软骨细胞表型转化,分泌软骨细胞特异性基质,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源。

胰岛素对人RPE细胞增殖及转化生长因子-β_2分泌的影响

目的:探讨胰岛素对RPE细胞增殖和分泌转化生长因子-β2(TGF-β2)的影响。方法:将不同浓度的胰岛素(0.1～10×103U/mL)加入培养基刺激ARPE-19细胞不同时间(0～48h)。采用MTS法检测RPE细胞的增殖情况;采用ELISA法检测各种处理情况下RPE细胞分泌TGF-β2的情况,Real-time PCR法检测TGF-β2mRNA的表达情况。结果:MTS结果显示,作用12h后,各实验组与对照组比较RPE细胞明显增殖(P<0.05)。ELISA结果表明胰岛素可明显促进RPE细胞分泌TGF-β2,并呈时间及剂量依赖性。Real-time PCR结果显示,胰岛素作用24h后,TGF-β2mRNA表达上调(P<0.01),且10×103U/mL胰岛素组TGF-β2mRNA表达明显高于0.1×103U/mL胰岛素组(P<0.01)。结论:RPE细胞是眼内近视信号因子TGF-β2的重要来源,胰岛素可以通过促进RPE细胞增殖并分泌TGF-β2进行信号传递,促进近视发生。

特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)特异性短发夹RNA(shRNA)对人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000)。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为(543.58±25.32)、(400.26±30.74)、(202.72±23.24)ng/L,明显低于阴性对照组的(659.78±20.95)、(547.45±24.65)、(442.87±17.43)ng/L及空白组的(721.75±30.19)、(756.61±30.19)、(787.60±18.37)ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000)。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。

转化生长因子-β_2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的观察形觉剥夺性近视(FDM)形成中视网膜转化生长因子-β2(TGF-β2)水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨。方法出生3d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度。免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达。结果形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义(P<0·01),遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少(P<0·01),TGF-β2mRNA的表达下调。结论TGF-β2参与调控FDM形成。

转化生长因子-β_2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究

目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用。方法组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;q RT-PCR及Western blot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况。结果免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性。TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和Col-Ⅰ表达量显著增加,呈典型活化状态;q RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β2可诱导PSCs活化及上皮间质转化。

转化生长因子-β_2在糖尿病仓鼠视网膜中的表达意义

目的:探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子-β(2TGFβ2)产生的关系以及TGF-β2的作用机制。方法:链脲佐菌素制备仓鼠糖尿病模型,用免疫组织化学法检测正常对照组和糖尿病动物模型(16周)视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。结果:糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。结论:提示TGF-β2与糖尿病视网膜病变(DR)形成过程有关。

青光眼患者房水中转化生长因子-β_2的定量研究

目的 :通过检测青光眼患者房水中转化生长因子 - β2 (transforminggrowthfactor - β2 ,TGF- β2 )的水平 ,探讨TGF - β2 在青光眼发病机制中的作用。方法 :在手术中收集了 31份青光眼患者房水样本 ,其中原发性开角型青光眼 ( primaryopen -angleglaucoma ,POAG) 1 1眼、原发性闭角型青光眼 ( pri maryangle -closureglaucoma,PACG) 1 0眼、青少年型青光眼 (juvenileglaucoma,JG) 1 0眼。另收集 1 0份白内障患者的房水样本作为对照。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测房水中TGF - β2 的含量。结果 :POAG和JG组房水中成熟 (有生物活性 )TGF - β2 的浓度分别为 2 5 6.7± 93.3pg/ml和 2 77.0±1 0 3.8pg/ml,比PACG组 1 5 1 .4± 81 .0 pg/ml和白内障组 1 36.9± 5 7.7pg/ml有显著性升高 (P <0 .0 1 )。而POAG组、JG组和PACG组TGF - β2 的总量 (有生物活性的 +潜活的 )分别为 1 677.5±5 64.6pg/ml、1 739.4± 5 92 .0pg/ml和 1 499.2± 490 .4pg/ml,各组间比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,它们与白内障组 1 0 0 4 .9± 372 .1 pg/ml比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :POAG和JG患者房水中成熟TGF - β2 的水平明显增高 ,高水平的成熟TGF - β2 可能在POAG和JG的发病机制中起着重要作用。

糖尿病大鼠视网膜内转化生长因子-β_2及其受体的表达

目的 探讨糖尿病视网膜损伤和转化生长因子 β2 (TGF -β2 )产生的关系以及 TGF- β2的作用机制。方法 链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,用 Western blot方法检测不同病程糖尿病动物模型(2 周及 20 周)视网膜中 TGF -β2 的表达,RT -PCR测定其受体 TGF- βRⅠ及 TGF βRⅡ的表达。结果 糖尿病大鼠视网膜内 TGF β2 随糖尿病进展表达增加,其受体 TGF βRⅠ的表达和对照组相比无显著差异,而TGF- βRⅡ的表达显著增加。结论 TGF- β2 在糖尿病视网膜病变(DR)形成过程中有重要作用,并有可能通过TGF- βRⅡ型受体起作用。

转化生长因子-β_2、胰岛素样生长因子-Ⅰ在豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜的表达及作用

目的建立豚鼠形觉剥夺性近视眼模型,研究视网膜转化生长因子-β_2(TGF-β_2)mRNA、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA在形觉剥夺性近视眼的变化及作用。方法出生3d的实验用花色豚鼠45只,半透明眼罩遮盖左眼,右眼为对照眼。遮盖4周实验结束时,RT-PCR检测后极部视网膜中TGF-β_2mRNA、IGF-ⅠmRNA的表达水平。结果遮盖4周后遮盖眼形成明显的近视,TGF-β_2mRNA在遮盖眼表达量为(0.437±0.032),对照眼为(0.671±0.048),遮盖眼表达量较对照眼下降,差异有高度统计学意义(t=11.653,P<0.01);IGF-ⅠmRNA在遮盖眼表达量为(1.817±0.144),对照眼为(1.536±0.113),遮盖眼表达量较对照眼升高,差异有高度统计学意义(t=7.194,P<0.01)。结论 TGF-β_2、IGF-Ⅰ参与豚鼠形觉剥夺性近视形成。

转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义

目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。

二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转化的影响

目的研究二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)增殖、迁移及上皮间质转化的影响。方法选择永生化人LEC(HLEB-3细胞)作为细胞来源;将细胞融合度80%的人LEC置于含10 mg·L^(-1)TGF-β_(2)的DMEM低糖培养基中培养24 h作为对照组,经TGF-β_(2)处理再加入不同浓度二甲双胍进一步作用后的细胞作为实验组。处理后在倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化。采用CCK-8实验检测细胞毒性,计算细胞存活率,Western blot法检测细胞中辅助激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)、大肿瘤抑制因子1(LATS1)、波型蛋白(Vimentin)的表达,实时荧光定量PCR检测YAP1、LATS1、哺乳动物STE20样激酶1(MST1)、Vimentin、E-钙黏蛋白mRNA的表达。结果二甲双胍细胞毒性检测结果显示,当二甲双胍浓度大于15.0 mmol·L^(-1)时,人LEC的存活率明显降低,表明二甲双胍浓度对LEC存活影响较大,因此选择15.0 mmol·L^(-1)进行后续实验。二甲双胍对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖有显著的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性(均为P<0.001)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(均为P<0.05);LATS1蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin mRNA相对表达量均低于对照组,LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论二甲双胍在体外能够对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖、迁移及上皮间质转化产生抑制作用,同时可下调YAP1和Vimentin mRNA的表达,上调LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA的表达;该作用机制可能与其激活Hippo信号通路有关。

肺腺癌组织转化生长因子β_(1)、鼠双微体2表达变化及其与患者临床病理特征的关系

目的 分析转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化及其与患者临床病理特征的关系,探讨二者在肺腺癌发生发展中的作用。方法 选择手术切除且经术后病理确诊的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份。采用免疫荧光法观察TGF-β_(1)、MDM2蛋白定位情况,采用免疫组化法检测TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达情况,并比较不同病理特征的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率,分析肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达的关系。结果 与癌旁正常肺组织比较,肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白均呈过表达状态,TGF-β_(1)大量表达于细胞质、少量表达于细胞核,MDM2绝大多数表达于细胞质。肺腺癌组织TGF-β_(1)蛋白阳性表达42例份(70.00%)、MDM2蛋白阳性表达47例份(78.33%),癌旁正常肺组织分别为24例份(40.00%)、24例份(40.00%);肺腺癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织(P均<0.05)。不同性别、年龄、吸烟情况的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期及高中分化者(P均<0.05)。肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达呈正相关关系(r=0.539,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均升高,且淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌组织升高更明显,二者可能共同参与了肺腺癌的发生发展。

转化生长因子-β_(1)诱导多脏器纤维化机制的研究进展

脏器纤维化是多种慢性疾病的共同病理标志,转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))可促进肌成纤维细胞增殖与活化,促进细胞外基质沉积并抑制其降解,并通过介导经典通路参与纤维化的发生。文章结合炎性反应和免疫应答、非编码RNA(ncRNA)以及信号通路之间串扰的相互作用,对TGF-β_(1)诱导各脏器纤维化的具体分子机制进行综述。

2型糖尿病肾病大鼠白细胞介素-6、白细胞介素-10、转化生长因子-β_(1)、组蛋白去乙酰化酶4表达及其与血糖、尿蛋白-肌酐比值的相关性

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)大鼠白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)表达及其与血糖、尿蛋白-肌酐比值(UACR)的相关性。方法采用随机数字表法将64只健康雄性Sprague Dawley大鼠分为对照组(n=32)和DN组(n=32)。DN组大鼠给予高脂高糖饲料及腹腔注射链脲佐菌素40 mg·kg^(-1)制备DN模型,DN模型大鼠造模成功后正常饮食饮水。对照组大鼠正常饮食饮水,经腹腔注射等剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。于造模后第0、4、8、12周分批处死2组大鼠,于每次处死前称大鼠体质量;使用血糖仪及配套试纸检测大鼠血糖;收集尿液,使用全自动生物化学分析仪检测大鼠尿微量白蛋白、尿肌酐水平,并计算UACR;于大鼠处死后立即取出双侧肾脏,其中一侧肾脏去除包膜后称肾质量,并计算肾脏指数(KI)。采用Western blot法检测2组大鼠肾组织中IL-6、IL-10、TGF-β_(1)、HDAC4蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组大鼠血清中IL-6、IL-10、TGF-β_(1)和HDAC4水平,采用Pearson相关分析DN大鼠血清IL-6、IL-10、TGF-β_(1)、HDAC4水平与血糖、UACR的相关性。结果造模后第0、4、8、12周,DN组大鼠血糖水平及UACR均显著高于对照组(P<0.05)。造模后第0周,2组大鼠的体质量比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后第4、8、12周,DN组大鼠的体质量均显著低于对照组(P<0.05)。造模后第0、4周,2组大鼠的KI比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后第8、12周,DN组大鼠的KI显著高于对照组(P<0.05)。造模后第0、4、8、12周,DN组大鼠血清中IL-6、HDAC4、TGF-β_(1)水平均显著高于对照组,IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)。造模后第0周,DN组大鼠肾组织中IL-10相对表达量显著高于对照组(P<0.05);造模后第8周,DN组大鼠肾组织中IL-10相对表达量显著低于对照组(P<0.05);造模后第4、12周,2组大鼠肾组织中IL-10相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模后第0、4、8、12周,DN组大鼠肾组织中IL-6、HDAC4相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。造模后第0周,2组大鼠肾组织中TGF-β_(1)相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);造模后第4、8、12周,DN组大鼠肾组织中TGF-β_(1)相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,DN组大鼠血清IL-6、TGF-β_(1)水平与血糖呈正相关(r=0.614、0.514,P<0.05),血清IL-10水平与血糖呈负相关(r=-0.448,P<0.05),血清HDAC4水平与血糖无相关性(r=-0.177,P>0.05)。DN组大鼠血清IL-6、TGF-β_(1)水平与UACR呈正相关(r=0.405、0.470,P<0.05),血清IL-10、HDAC4水平与UACR无相关性(r=-0.134、-0.124,P>0.05)。结论DN大鼠IL-6、TGF-β_(1)、HDAC4表达上调,IL-10表达下调;DN大鼠血清IL-6、TGF-β_(1)水平与血糖、UACR呈显著正相关,血清IL-10水平与血糖呈显著负相关。

左心室舒张功能结合血清微小RNA-152-5p、潜在转化生长因子结合蛋白2水平与射血分数保留的心力衰竭患者左心室重构的相关性

目的探讨左心室舒张功能结合血清微小RNA-152-5p(miR-152-5p)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP-2)水平与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者左心室重构的相关性。方法选取2019年8月至2020年8月在唐山中心医院进行治疗的HFpEF患者48例为HFpEF组,同期健康体检者52例为对照组。以实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验法分别检测血清miR-152-5p、LTBP-2水平。研究对象均进行超声心动图检查,收集二尖瓣环舒张早期峰值速度(E')、晚期峰值充盈速度(A)、二尖瓣口舒张早期峰值充盈速度(E)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、舒张末期后壁厚度(PWTd)、舒张末期室间隔厚度(IVSTd),并计算E/A、E/E'及左心室质量(LVM)值。使用Pearson法分析血清miR-152-5p、LTBP-2、E/A、E/E'与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM之间的相关性。结果HFpEF组患者E/A值低于对照组,血清miR-152-5p、LTBP-2水平及E/E'值高于对照组,差异有统计学意义(t=12.722、21.830、9.882、15.979,P<0.05)。HFpEF组患者的LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM水平高于对照组,差异有统计学意义(t=2.044、2.894、5.733、3.973,P<0.05)。HFpEF组患者血清miR-152-5p、LTBP-2、E/E'表达水平均与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM呈正相关(r=0.447、0.425、0.437、0.473、0.414、0.338、0.422、0.347、0.492、0.412、0.385、0.367,P<0.05);E/A与LVIDd、IVSTd、PWTd、LVM呈负相关(r=-0.441、-0.374、-0.369、-0.438,P<0.05)。结论血清miR-152-5p、LTBP-2水平以及E/E'值、E/A水平与HFpEF患者左心室重构有关。

胰岛素样生长因子1对人RPE细胞分泌TGF-β2、MMP-2的影响及机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)表达转化生长因子β2(TGF-β2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响,并探索其作用机制。方法ARPE-19细胞分别按不同浓度IGF-1和不同浓度LY294002培养6 h、12 h、24 h、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,确定IGF-1、LY294002的最佳作用浓度与时间。细胞划痕法检测细胞迁移活性。ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β2浓度。将ARPE-19细胞分为对照组、IGF-1组(80μg·L^(-1) IGF-1)、IGF-1+LY294002组(80μg·L^(-1) IGF-1+30 mmol·L^(-1) LY294002)、LY294002组(30 mmol·L^(-1) LY294002),使用无血清DMEM/F12培养基培养,对照组不做任何处理,分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞中TGF-β2、MMP-2、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的mRNA和蛋白表达量。结果与0μg·L^(-1) IGF-1比较,80μg·L^(-1) IGF-1的细胞活力24 h变化显著(P<0.05),故确定其为IGF-1最佳作用浓度和时间。与0 mmol·L^(-1) LY294002比较,24 h的30 mmol·L^(-1) LY294002接近半数抑制浓度,故确定其为LY294002最佳作用时间和浓度。细胞划痕法检测结果显示,0μg·L^(-1) IGF-1组、40μg·L^(-1) IGF-1组、80μg·L^(-1) IGF-1组细胞迁移率整体比较及两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果显示,0μg·L^(-1) IGF-1组、40μg·L^(-1) IGF-1组、80μg·L^(-1) IGF-1组细胞上清液中TGF-β2浓度整体比较及两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RT-PCR、Western blot检测结果显示,IGF-1、LY294002培养24 h,与对照组比较,IGF-1组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均升高,而LY294002组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均下降(均为P<0.05);与IGF-1组比较,IGF-1+LY294002组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均下降(均为P<0.05)。结论IGF-1能促进ARPE-19细胞增殖、迁移;IGF-1可能通过PI3K/AKT信号通路上调ARPE-19细胞中TGF-β2、MMP-2的表达,参与近视的发生与发展。

SOX9通过转化生长因子β信号通路调节角膜内皮损伤后内皮-间质转化过程

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中SNAIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

转化生长因子-β和镍纹样蛋白与2型糖尿病大血管病变的相关性

目的 探讨转化生长因子-β(TGF-β)和镍纹样蛋白(Metrnl)与2型糖尿病(T2DM)大血管病变的相关性。方法 选取T2DM患者106例,按颈动脉内中层厚度(CIMT)分为单纯T2DM组50例(CIMT≤1.0 mm)、T2DM合并大血管病变组56例(CIMT>1.0 mm),并随机选取同期体检的健康受试者52例为健康对照组。比较3组外周血清中的TGF-β、Metrnl水平,分析各代谢指标与T2DM大血管病变的相关性。结果 T2DM合并大血管病变组TGF-β、Metrnl水平低于单纯T2DM组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清TGF-β与Metrnl水平呈正相关(P<0.05);收缩压、吸烟、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、HOMA-IR是T2DM大血管病变的危险因素,Mernl、TGF-β是T2DM大血管病变的保护因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,TGF-β和Metrnl预测的曲线下面积(AUC)分别为0.757、0.846, TGF-β联合Metrnl预测的AUC为0.901。结论 血清TGF-β和Metrnl水平降低与T2DM大血管病变的发生相关,TGF-β联合Metrnl检测对T2DM大血管病变的早期评估具有重要意义。

疏肝平喘方通过转化生长因子-β_(1)/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的:阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)/叉头框蛋白P3(Foxp3)以及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的干预作用,对转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad信号通路的影响。方法:建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)和TGF-β_(1)水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果:疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β_(1),与地塞米松比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当(均P>0.05);Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当(均P>0.05)。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β_(1)/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。

宫颈癌患者血清白细胞介素-4和转化生长因子-β_(1)的表达及其与临床预后的相关性

目的探讨宫颈癌(CC)患者血清白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))的表达及其与临床预后的相关性。方法选取2017年4月至2018年9月赣南医学院第一附属医院收治的84例CC患者作为观察组,另选取同期84例健康女性体检者作为对照组。采集静脉血取血清,测定血清IL-4、TGF-β_(1)水平。比较两组血清IL-4、TGF-β_(1)表达情况,分析血清IL-4、TGF-β_(1)水平与CC患者临床病理特征及临床预后的关系。结果观察组血清IL-4、TGF-β_(1)水平菌均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、病理类型CC患者的血清IL-4、TGF-β_(1)水平比较差异无统计学意义;CC分化程度越低者IL-4、TGF-β_(1)水平越高,有淋巴结转移者IL-4、TGF-β_(1)水平高于无淋巴结转移者,肿瘤直径>4 cm者IL-4、TGF-β_(1)水平高于≤4 cm者,有复发转移者IL-4、TGF-β_(1)水平高于无复发转移者,且IL-4、TGF-β_(1)水平随着国际妇产科联盟(FIGO)分期增高而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);血清IL-4、TGF-β_(1)水平与分化程度呈负相关(r<0,P<0.05),与FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤直径、复发转移呈正相关(r>0,P<0.05)。结论CC患者血清IL-4、TGF-β_(1)水平异常增高,其水平高低与病情严重程度和临床预后密切相关。