QX200微滴式数字PCR方法检测转基因大豆GTS-40-3-2

首次以转基因大豆中结构特异性基因为靶基因,建立了特异的微滴式数字QX200 PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,对其进行准确定量。结果表明:ddPCR对结构特异性基因的检出限为2拷贝/(20μL),检测灵敏度高于国标中qPCR方法。微滴式数字PCR方法是一种准确、高灵敏度的基因拷贝数的分析方法,操作简便,可在转基因检测领域广泛应用。

转基因大豆GTS40-3-2转化事件特异性PCR检测

GTS40-3-2是抗草甘膦转基因大豆,为建立GTS40-3-2大豆转化体特异性PCR检测方法,本研究以GTS40-3-2标准品为实验材料,根据已公布转基因大豆GTS40-3-2基因与大豆基因组连接序列信息,利用Primer5.0软件设计了5对品系特异性引物,对每对引物进行了退火温度、特异性及扩增效率的PCR检测,结果显示,5对特异性引物均能够从GTS40-3-2中扩增出大小约279bp、238bp、470bp、490bp和257bp的预期产物,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2转化事件。以转基因大豆GTS40-3-2含量为5%、2%、1%、0.5%和0.1%的标准品进行PCR灵敏度检测,结果表明5对引物的检测灵敏度均能达到0.1%。通过荧光定量PCR对5对特异性引物的Ct值与溶解曲线比较,最后选择出RRS2引物对为转基因大豆GTS40-3-2品系特异性检测的最适引物。本文结果将为我国未来转基因生物产品成分检测提供科学合理的实验参考。

动物饲料中转基因抗草甘膦大豆GTS40-3-2成分的检测

转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2作为目前在最多国家和地区批准种植的转基因大豆,除榨取大豆油外,剩余的豆粕等副产品被用作动物饲料。通过对山西省太谷周边11个动物养殖户的饲料进行转基因标识情况专项调查,采用定性和定量PCR技术对转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2含有的Ca MV35S启动子、NOS终止子、Cp4-EPSPS及大豆内标Lectin基因进行检测。结果表明:11份饲料全部含有转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS 40-3-2成分,且其含量各不相同,其中蛋鸡饲料GTS 40-3-2转化体的含量最低,但所有饲料均无转基因标识。试验为我国转基因饲料饲用安全性评价体系提供了试验数据支持,同时也对来源于转基因作物的原材料产品的合理应用以及通过转基因饲料喂养动物所产生的农畜产品的安全性评价具有重要的现实和理论意义。

转基因大豆GTS 40-3-2品系特异性环介导等温扩增法检测方法的建立与应用

根据外源插入序列与大豆内源基因边界序列,用设计软件Primer Explorer Version 3设计并筛选了转基因大豆GTS 40-3-2品系的环介导等温扩增引物,并进行了反应体系和反应条件的优化,建立了转基因大豆GTS 40-3-2品系特异性环介导等温扩增检测方法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性评价,结果显示:该方法能够特异、稳定、灵敏地检测大豆及其制品中的转基因大豆GTS 40-3-2成分,检测低限达到0.5%。此外,对12份实际样品的检测结果表明,该方法与实时荧光PCR方法的检测性能相当,结果吻合率为100%,假阳性率和假阴性率均为0。

转基因大豆GTS40-3-2成分现场可视化检测方法的建立

转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检测的敏感性。结果表明:该方法仅对GTS40-3-2转化体产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%。所建立的GTS40-3-2转化体特异性现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于转基因大豆GTS40-3-2成分污染的现场可视化检测。

转基因大豆GTS40-3-2环介导等温扩增检测方法的建立

采用转基因大豆GTS40-3-2品系特异性基因LAMP引物,建立2种转基因大豆GTS40-3-2品系特异性基因等温扩增方法:(1)实时荧光环介导等温扩增方法;(2)反应前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,根据反应后HNB的颜色变化进行判定。对两种方法进行灵敏度、特异性测试,结果表明,两种方法皆能快速、特异性检测出转基因大豆GTS40-3-2品系成分,定性检测限为0.1%。基于颜色判定的LAMP检测方法对设备要求更简单,更适用于日常检验及监管部门进行转基因成分的快速检测。

大豆2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因(Gm VTE3)的克隆及对转基因烟草种子中生育酚组成的影响

【目的】克隆大豆2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因(GmVTE3),研究其在烟草中过量表达对转基因烟草种子中生育酚(维生素E)组分的影响。【方法】利用EST拼接和RT-PCR技术,从大豆中分离了大豆2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶(VTE3)的全长cDNA序列,通过烟草转化研究过量表达VTE3对转基因植株维生素E组分的影响。【结果】GmVTE3全长1026bp,编码342个氨基酸,与其它物种的VTE3氨基酸同源性很高,在烟草中过量表达该基因使烟草种子中γ-生育酚与δ-生育酚的比值最高增加2倍。【结论】首次克隆了大豆2-甲基-6-植基-1,4-苯醌甲基转移酶基因GmVTE3,它能够催化烟草植株中2-甲基-6-植基-1,4-苯醌(MPBQ)的甲基化,从而改变烟草种子中生育酚的组成成分。说明可以利用克隆的GmVTE3来改变植物种子中生育酚的组成和提高α-生育酚的含量。

多重PCR检测抗草甘膦大豆GTS40-3-

将大豆内源参照基因(Lectin)、外源基因P-CaMV 35S、CP4-EPSPS和T-NOS作为多重PCR检测参数,建立了一种多重PCR检测抗草甘膦大豆GTS40-3-2的方法。反应条件优化结果表明:多重PCR的适宜退火温度为58℃,适宜引物终浓度(μmol·L^(-1))配比为:0.1∶0.2∶0.2∶0.2。采用已知样品对多重PCR体系进行验证,检测结果可靠,证明该多重PCR体系为一种有效的抗草甘膦大豆GTS40-3-2的检测方法。

转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质联合定值研究及不确定度分析

对研制的3个含量水平（A、B和C）的转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质进行了多家实验室联合定值,并进行了相应的不确定度的分析.具体研究过程为提取转基因大豆GTS 40-3-2中的基因组DNA,并采用定量PCR方法进行标准物质的多家实验室联合定值,最后对定值的不确定度进行评估.

饲料中转基因大豆成分检测

转基因农作物的商品化满足了人民日益增长的物质需求,但转基因作物在食用安全性、对生态环境的影响等方面一直备受关注。本研究采用实时荧光PCR方法检测饲料及饲料原料中转基因大豆GTS40-3-2成分,可以准确、快速完成检测,满足饲料中转基因成分的监管需求。实验表明目前饲料中转基因大豆GTS40-3-2成分的占有率较高,应引起相关部门的重视,加大监管力度。

转基因大豆GTS40-3-2定量检测质粒DNA标准物质的研制

一、引言转基因大豆是全世界种植面积最大的转基因作物,由于导入了抗草甘膦基因EPSPS基因(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase),可以编码磷酸烯醇式丙酮酰莽草酸合成酶,能够耐受除草剂草甘膦的伤害,方便大豆农业生产和管理,但是,随着转基因作物在世界范围的广泛种植。

大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pBI121,并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘,通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中,转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％(质量分数)NaCl的培养基比较,转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量,结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照(转化pBI121载体)植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见,PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．

大豆及豆制食品中转基因成分检测分析

建立大豆及豆制食品中转基因成分分析的real-time PCR扩增体系和方法。选择市售的大豆、豆粉、豆干、豆腐、豆浆和腐竹等6种大豆及豆制食品,针对不同的样品探索高质量基因组DNA的提取方法,扩增大豆内参基因lectin进行质量检测。针对我国批准的3种主要转基因大豆品系(GTS40-3-2,A2704-12和MON89788)设计特异性的引物和探针,进行real-time PCR检测。购买3种转基因大豆品系的标准品作为质控对照。从该6种大豆及豆制食品中均提取到了高质量的基因组DNA,建立了稳定的针对外源基因特异性、结构特异性和品系特异性片段检测的real-time PCR扩增体系。成功建立了6种大豆及豆制食品中针对3种转基因大豆品系成分检测的real-time PCR方法。

转基因大豆豆粕外源基因和蛋白在SD大鼠体内消化吸收分析

为了评估转基因抗草甘膦除草剂大豆的食用安全性,以20%的比例将转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS40-3-2和其亲本非转基因大豆A5403豆粕分别添加到基础饲料中喂养两代Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用定性、定量PCR和ELISA方法检测转基因大豆成分相关基因和蛋白在长期饲喂的大鼠体内代谢残留状况。结果表明,大鼠喂养转基因大豆豆粕后,除了大鼠肠粪和盲肠内容物检测到有转基因成分的残留,肠道菌群和实质脏器均未发现相关基因和蛋白。结果提示,长期饲喂转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS40-3-2与亲本A5403大豆豆粕对SD大鼠具有同样的食用安全性。

山西市场动物饲料中转基因成分的检测（英文）

为了评估转基因玉米和大豆在山西动物饲料市场的占有率和标识情况,采用改良十六烷基三甲基溴化铵法(Hexadecyltrimethy ammonium bromide,CTAB)提取山西市场抽取的30份鸡和猪饲料,通过定性PCR打包筛查,对检测阳性结果打包饲料拆包并检测CaMV35S启动子、NOS终止子、玉米内标zSSIIb、大豆内标Lectin和Cry IA(b)基因。同时检测玉米和大豆转化体事件MON810和GTS40-3-2。结果表明,83.3%的饲料含有转基因成分。所抽取的玉米、大豆、猪饲料和鸡饲料转基因成分阳性率分别为6.67%、100%、93.3%和73.3%。实时荧光定量PCR检测结果与定性PCR一致。结果提示,鸡和猪饲料中转基因成分在山西市场的占有率较高。