利用花粉管通道途径获得转基因小麦

将带有NPT Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农 1 0 3,共结实 1 0 2 5粒 ,其中有 71 8粒种子可以萌发出幼苗 ,在这 71 8株幼苗中 ,经卡那霉素筛选 ,得到 75棵绿色抗性植株 ,提取这些抗性植株的叶片总DNA ,作NPT Ⅱ基因的PCR扩增 ,有 37株为阳性 ,转化率为 5.1 6% ,对其中 9个PCR阳性植株的Southern杂交检测结果表明它们均为转基因植株 .

利用激光微束穿刺法将外源基因导入小麦的研究

用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴ－Ⅱ）基因的质粒ｐＪＩＴ１０１导入京花１号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理，用微米级的激光微束处理，然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年，从１５０个小麦幼胚中，在卡那霉素培养基上筛选出４株绿苗，取两株进行ＮＰＴ－Ⅱ酶活性分析，测到了ＮＰＴ－Ⅱ酶的活性。第二年重复实验，从２４５个小麦幼胚中，经筛选获得１株绿苗，进行了叶片ＤＮＡＰＣＲ扩增检测，转化的绿色小苗扩增出所导入的ＮＰＴ－Ⅱ基因编码的片段。结果表明，外源ＮＰＴ－Ⅱ基因已导入了小麦，并实现了整合表达。

用去柱头滴加法将抗虫基因(CPTI)导入小麦的研究

小麦在世界和我国都是栽培面积很大的粮食作物,在我省是栽培面积最大的作物.然而由于小麦的转化难度较大,转基因研究进展比较迟缓.随着基因转移技术的发展,1992年Vasil等用基因枪法将抗除草剂基因(Bar基因)转化入小麦胚性愈伤组织细胞中,获得了世界上第一株转基因小麦,使小麦转基因研究向前跨了一大步.近年来各国相继以基因枪法为主对小麦进行转化,转化所用基因,除抗除草剂的Bar基因和人工雄性不育基因(TA—Barnase)外,大多数是用的筛选标记基因NPtⅡ、Gus、Hpt等.成卓敏等1993年利用花粉管通道法将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因导入小麦。

小麦转化的方法与前景

10多年来,小麦一直是遗传工程的对象,最初致力于建立细胞悬浮培养和原生质体培养系统,目的是通过原生质体中介的基因转移方法来完成小麦的遗传操纵。尽管目前可以从胚性细胞培养分离出的小麦原生质体获得再生植株,但此法还不能成功地进行小麦转化。随着基因转移的 biolistics 法的发展.人们已把注意力集中到作为外来基因 lecipi-ents 的活体再生组织的应用上。通过采用最佳的粒子辐射条件.并改良未成熟合子胚的盾片组织体细胞的成胚方法,世界上几个前导实验室已成功地完成了小麦转化。该突破标志着通过分子途径改良小麦的新时代已开始。目前挑战在于,运用该项技术来培育优质、抗病及其它附加值特性的优良小麦品种。