大豆、玉米及其加工产品中转基因成分筛查

目的:近年来,转基因作物大面积种植,具有抗病、抗虫、耐除草剂等性状的作物及其加工产品广泛的出现在市面上。在我国,只有经过农业部审批的转基因作物才能种植或销售,为加强转基因产品的监管,我国发布了一系列转基因产品检测方法,在对外源基因进行检测时,需要有阳性质控。方法:对SN/T 1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》中大豆、玉米共34个品系中的15个外源基因进行筛查,为植物及其加工产品中转基因成分的检测提供参考依据。结果:筛选出15个外源基因的阳性对照。结论:可应用于植物及其加工产品中转基因成分的日常检测,为检测机构开展检测时提供依据。

农作物种子转基因成分检测能力验证样品制备技术分析与总结

能力验证是评价检验机构技术水平和质量控制的重要手段,对近年来陕西省农作物种子检验站承担的各项转基因成分检测能力验证样品的制备工作进行回顾,总结了在能力验证样品制备工作中获取的经验与教训,分析了样品制备工作中一些好的做法和存在的问题,并提出了进一步改进的建议,为能力验证样品制备工作更为科学、规范地开展提供参考。

PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究

根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

食品中转基因成分检测方法的研究进展

随着各国政府和有关食品监督机构对转基因食品检测的日益重视 ,转基因食品检测方法的研究进展十分迅速。这篇文章就目前国内外常用的 2种转基因食品检测方法进行了概述。

饲料原料中转基因成分的PCR检测

采用PCR检测方法从饲料的主要原料豆粕、玉米蛋白粉中成功地检出启动子 35S (35S -promoter ,origi natedfromcauliflowermosaicvirus)、终止子NOS (nopalinesynthase -terminator,derivedfromAgrobacteriumtumefa ciens)、耐除草剂基因EPSPS(5 -enolpyruvylshikimate - 3-phosphatesynthase)和抗虫基因CryIA(b) (delta -endo toxin ,evolvedfromBacillusthuringiensissubsp .kurstaki)等转基因成分 ,并通过扩增玉米自身蛋白基因Zein(apro teinextractedfromcorngluten)及大豆自身基因Lectin(chitin -bindingprotein)的引物和阴阳性对照、阴阳性质控 ,避免假阳性、假阴性结果。该方法已在口岸进口饲料原料转基因检测中得到初步应用。

番茄、甜椒中转基因成分和内源基因的多重PCR检测方法的建立

采用SDS法提取番茄未成熟及成熟果实和甜椒成熟果实中的总DNA,内源rbcL基因扩增结果均为阳性,表明已提取到DNA及DNA中不存在抑制PCR的物质。应用花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子和大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因的三重PCR检测样品DNA中的转基因成分,结果均为阴性。将番茄、甜椒的DNA和阳性质粒pBI121进行混和,作为PCR反应的DNA模板,成功建立了可同时检测内源rbcL基因、nptⅡ基因、CaMV35S启动子和nos终止子的多重PCR方法。多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在转基因产品检测上具有重要的应用价值。

大豆及腐竹中转基因成分的多重PCR分析

采用CTAB法提取大豆干样、新鲜毛豆及腐竹中的总DNA,内源LECTIN基因扩增结果均为阳性,表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质.应用花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(NOS)终止子的二重PCR分析,筛选到7个含转基因成分的样品.半嵌套式PCR检测结果表明阳性样品中的外源目的基因为来自根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因.最后成功进行了扩增内源LECTIN基因、CaMV35S启动子和NOS终止子的三重PCR分析,以及内源LECTIN基因和EPSPS基因的二重PCR分析,得到预期结果.多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在植物产品的转基因成分检测上具有重要的应用价值.

大豆色拉油中转基因成分检测技术研究

针对大豆色拉油中DNA较难提取的问题提出了充分乳化、延长醇沉淀时间和反复富集小片段DNA等措施,有效地从大豆色拉油中提取到DNA,并通过大豆特异内源基因扩增得以证明。从两个不同品种商品大豆色拉油中检测出35S启动子和NOS终止子外源调控序列,并通过增加所用DNA模板用量检测出目的基因EPSPS序列,建立了大豆色拉油中转基因成分检测方法。

饲料中的转基因成分在家禽体内代谢残留的研究

用含20%抗草甘膦转基因豆粕的饲料喂养蛋鸡、番鸭,通过检测其内脏、肌肉、血液、粪便及肠道微生物的豆粕转基因成分,探讨饲料中转基因成分在家禽体内的代谢残留状况。以定性PCR检测含20%转基因豆粕的饲料及蛋鸡、番鸭的八种内脏样品(肠、胰腺、食道、肝、腺胃、肾、心脏、肌胃)、肌肉、血液、蛋品、粪便、肠道微生物的转基因豆粕的工具基因CaMV35S启动子与NOS终止子以及目的基因CP4-EPSPS等外源基因成分。PCR检测结果表明:除了含20%转基因豆粕的饲料外,蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未检出转基因豆粕的CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS等外源基因成分。检测结果表明:长期喂养含20%转基因豆粕饲料的蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未发现有转基因成分残留,说明饲料中的转基因成分,通过肠胃消化后充分降解,不会在鸡、鸭体内残留,也不会通过粪便排泄而扩散到土壤环境中。

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速。

大豆DNA提取方法及降落PCR检测转基因成分的研究

采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落PCR(TD-PCR)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA提取方法,能够满足各种分子生物学分析;TD-PCR显著提高了PCR扩增的特异性和效率,可有效检测大豆转基因成分,具有良好的应用前景。

大豆加工食品中转基因成分多重PCR检测体系的建立

以大豆内源基因 (Lectin)、筛选基因 3 5S启动子 (Cauliflowermosaicvirus 3 5S ,CaMV3 5S)、Nos终止子 (Nopalinesynthase,Nos)和外源基因 (5 enolpyruvylshikimate 3 phosphatesynthase ,Ep sps)为检测对象 ,通过对PCR扩增体系中各引物终浓度及PCR扩增过程中退火温度的探讨 ,研究了不同引物终浓度配比及退火温度对转基因大豆多重PCR检测的影响 ,建立了大豆加工食品中转基因成分多重PCR检测体系。结果表明 ,当各组引物的终浓度分别为 1 0、2 0、2 0、3 0 μmol/L即引物终浓度配比为 1∶2∶2∶3 ,退火温度为 5 5 4℃时 ,所建立的多重PCR检测方法能够有效地检测出大豆中的转基因成分 ,具有特异性好 ,简便 ,快速 ,准确等优点。

马铃薯及其制品中转基因成分的多重PCR检测

采用CTAB法提取15个马铃薯及其制品样品中的总DNA,内源PATA基因的PCR扩增结果均为阳性,表明已提取到DNA。应用根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子和大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因的二重PCR对样品进行转基因成分检测,结果均为阴性。将马铃薯DNA和阳性质粒pBI121混合作为PCR的反应模板,建立了内源PATA基因、花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子、nos终止子和nptⅡ基因之间的多重PCR检测方法。多重PCR方法具有节约试剂、节省时间等特点,在转基因产品检测上的应用值得推广。

常见食用菌中转基因成分定性PCR检测方法的建立

将食用菌转基因研究用的质粒载体(p301-bG1)DNA,添加到19种常见食用菌样品中,作为模拟阳性样品,从中提取出DNA用于PCR分析,建立了常见食用菌中3个大小分别为165、398、599bp的外源基因(NOS、BAR、GUS)的特异性DNA片段的定性PCR检测方法,还进行了二重与三重PCR分析,并通过不同的模板DNA浓度对PCR扩增结果的影响,分析了PCR检测的灵敏度。

9种大豆制品中转基因成分定性PCR检测

本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆腐、豆皮、豆豉中含有转基因成分,而其它产品中未发现转基因成分存在。

食品中转基因成分的检测

文章对当前几种比较常用的食品中转基因成分的检测方法进行了概述,比较了各种检测方法的优缺点;简述了基因芯片技术、近红外光谱分析技术等在转基因产品检测中的应用。

大豆油中转基因成分的Nested PCR和Semi-nested PCR检测方法研究

对大豆油中DNA提取方法进行了研究,结果表明CTAB、SDS和Wizard试剂盒提取大豆油DNA均具有良好的效果。利用nested PCR和semi-nested PCR检测大豆(Roundup Ready)油中的转基因成分发现,该方法能够检测到大豆原油中的Lectin基因(112bp)、CaMV35S基因(147bP)和CP4-EPSPS基因(205bp),检测灵敏度达到10-6ng/μl;但该方法未能从人豆成品油(一级)中扩增到上述基因,当中的转基因成分DNA含量低于10-12ng/μl。

深圳市场4种国产农产品转基因成分监测结果

目的:为了解并掌握目前深圳市居民食品中转基因成分的实际情况,避免“家底不清”,更有效地对本市的食品安全进行系统监测和预警,为政府制定食品卫生政策提供科学依据和切实保障居民的健康安全利益。方法:按照深圳市食品污染物监测项目方案,首次对本市市场上的4种国产农产品中转基因成分进行监测,采用PCR凝胶电泳法对79份玉米、马铃薯、大豆、西红柿进行检测并用实时荧光PCR方法进行验证。结果:在79份抽检样品中,共检出含有转基因成分的样品4份,总检出率为5.1%。结论:我市食品中转基因成分存在的情况不容忽视,转基因食品未作任何标识的问题普遍存在,值得管理部门高度重视。应加强对流通市场上食品中转基因成分的监测和转基因食品标识的管理。

玉米加工食品中转基因成分的PCR检测

通过分子生物学手段,以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,建立了从玉米加工食品中检测转基因成分的方法。实验分别采用CTAB法(十六烷基三乙基溴化铵)和试剂盒(Kit)方法对市场上选购的玉米片、玉米面、香脆玉米角、窝窝头、爆玉米等5种玉米食品中的DNA进行了提取,并用聚合酶链式反应(PCR)方法对玉米内标基因Inverase进行扩增,采用凝胶电泳对结果分析,比较两种DNA提取方法的优越性;再对通常转入的基因构建元件35S启动子、NOS终止子进行扩增对玉米转基因成分进行检验。结果表明:试剂盒法对玉米加工食品中的总DNA有更好的提取效果,并得到一个适宜的扩增条件参数;5种玉米食品的转基因检测结果均为阳性,即都含有转基因成分。

玉米及其制品中转基因成分的单一PCR及多重PCR检测

采用CTAB法提取玉米及其制品的总DNA,用PCR方法检测其中的转基因成分如花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)胭脂碱合成酶基因(nos)终止子、根癌农杆菌CP4菌株的EPSPS基因、吸水链霉菌(Treptomyceshygroscopicus)bar基因及苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)cryIA(b)基因,筛选到阳性样品,并建立了几组玉米内源zein基因和转基因成分之间的多重PCR检测方法。结果表明,建立的多重PCR方法用于同时检测玉米内源基因和转基因成分是可行的,值得推广;虽然我国还未有已获准商品化生产的转基因玉米,但国外转基因玉米已流入福建省。