白细胞介素2转基因瘤苗研究现状

1989年Tepper等把白细胞介素4（IL-4）基因转入乳腺癌细胞发现可以诱导机体特异性抗肿瘤作用,从而拉开了基因瘤苗研究的序幕.白细胞介素2（IL-2）是抗原活化的TH细胞分泌的细胞因子,在兔疫功能调节,尤其是在抗肿瘤免疫调节中起着重要的作用.近年来,国内外学者对IL-2基因瘤苗的研制作了大量的工作,本文就此进展作一综述.1 基因转移技术把IL-2基因转染肿瘤细胞,并获得较高水平的表达,是转基因瘤苗研究的关键技术.理想的技术方法能够使目的基因高效地导入人肿瘤细胞,并且操作简便,具有安全性.1.1 理化方法 包括电穿孔,颗粒轰击技术,DNA直接注射,脂质载体法,磷酸钙沉淀法,DETE-葡聚糖法等。磷酸钙沉淀法尚能形成稳定的整合和长期高效表达,在一定条件下仍不失为一个较为简便和有效的方法.脂质载体法是在体内外均可使用的方法.

转反义vp1基因水稻再生苗的获得及分子鉴定

应用超级双元载体和农杆菌介导转基因技术 ,试图将反义vp1基因引入到容易穗萌的保持系冈 46B和容易诱导愈伤组织的籼稻品种R893与容易转化的粳稻品种粳 16中 ,结果冈 46B获得再生苗 41株 ,R893获得再生苗 43株 ,粳 16获得再生苗 2 6株。经PCR检测 ,仅粳 16中有 2株携带潮霉素抗性基因 ,其中 1株携带反义vp1基因 ;冈 46B和R893中未能获得转基因再生苗。

转hGM-CSF基因肿瘤细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

利用逆转录病毒中介基因转移体系将ｈＧＭ—ＣＳＦ基因导入大鼠Ｗａｌｋｅｒ瘤细胞ＷＴ２５６中，经ＰＣＲ和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测证实，ｈＧＭ—ＣＳＦ基因已成功导入ＷＴ２５６细胞，生物学活性检测表明，转基因瘤细胞分泌一定水平ｈＧＭ—ＣＳＦ。转基因细胞经Ｘ线灭活，接种荷瘤的Ｗａｌｋｅｒ瘤模型。

Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化

本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料。本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系。用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况。结果表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50%。在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-Mechlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系。通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低。通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料。

肿瘤疫苗的研究进展

近年来随着分子生物学的发展和基因工程技术的出现，肿瘤疫苗的研究有很大飞跃，成为肿瘤主动性免疫治疗的重要手段之一。本文从转基因瘤苗、树突状细胞（ＤＣ）与瘤苗、抗独特型瘤苗。

mAFP基因转染树突状细胞免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响

目的:探讨用mAFP基因转染的树突状细胞(dendritic cells,DC)瘤苗免疫对小鼠诱发性肝癌发生的影响。方法:诱导、扩增C57BL/6J小鼠DC。将表达小鼠AFP基因(mAFP)的重组腺病毒转染DC。80只C57BL/6J雄性小鼠随机分为A、B、C、D组,每组20只。以单纯DC为A组;将表达mAFP基因的重组腺病毒转染DC(pAd-BM5-mAFP-DCs)为B组;表达mAFP基因的质粒DNA(pAdBM5-mAFP)为C组;以单纯PBS(磷酸缓冲液)注射为对照组D组。免疫方法:实验组在每只小鼠的左胁部注射5×105个细胞(0.1ml/次),连续免疫3天,以后每7天接种疫苗1次,继续免疫4次。正常对照组,仅注射0.1ml PBS。在接种免疫的同时,给以二乙基亚硝胺(DEN)、四氯化碳(CCl4)和乙醇联合诱癌。诱癌20周后处死小鼠,检查成瘤情况。同时对肝脏标本进行组织病理学检查。结果:80只免疫小鼠中,A组肝细胞癌发生率为70%;B组肝细胞癌发生率仅为25%;C组肝癌发生率为65%;D组肝癌发生率为75%。B组与其它对照组比较有显著性差异(p<0.05),其他各组比较无显著性意义。结论:转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL/6J小鼠,能激发较强的抗肿瘤免疫反应,降低肝癌的发生率。

新型肿瘤疫苗研究现况及进展

肿瘤疫苗是肿瘤主动特异性免疫治疗 (activespecificimmunotherapy)的核心。由于肿瘤细胞缺乏特异性抗原及必要的抗原呈递而使肿瘤疫苗制备非常困难。由于分子免疫学及基因工程技术的迅速发展 ,出现了转基因瘤苗、DC及B细胞瘤苗、核酸瘤苗、抗独特型瘤苗及HSP 多肽复合物瘤苗等新型高效瘤苗。本文就此作一综述 ,并介绍新的瘤苗制备和构建方法。

培养基和培养条件对‘砀山酥梨’转基因试管苗生根的影响

为优化‘砀山酥梨’转基因试管苗的生根条件,解决梨试管苗生根的难题,以‘砀山酥梨’转基因试管苗作为试验材料,研究了基本培养基类型、培养方式、不同的间苯三酚(PG)浓度、不同的IBA浓度和暗培养时间对生根的影响。结果表明:采用两步生根法,试管苗在附加80 mg/L PG和20 mg/L IBA的ASH基本培养基上暗培养7d后转入附加80 mg/L PG的ASH培养基上进行光照培养,生根率达到91.7%。

甲胎蛋白基因转染树突状细胞瘤苗对诱发性小鼠肝癌发生发展的免疫抑制作用

目的构建小鼠甲胎蛋白（mAFP）基因转染的树突状细胞（DC）瘤苗，评价其在C57BL／6J小鼠自然肝癌诱发过程中的免疫保护作用。方法诱导、扩增DC。将表达mAFP的重组腺病毒颗粒转染DC，检测转染前后DC细胞表面分子MHCI、MHCII、CD18a（LFA）、CD54（ICAM）、CD80（B7．1）和CD86（B7．2）等的变化。80只C57BL／6J雄性小鼠随机分为单纯接种DC组、接种转mAFP基因DC（pAdBM5-mAFP-DC）组、单纯接种重组质粒（pAdBM5-mAFP）组和正常对照组，每组20只。实验组在每只小鼠的左肋部注射5×10^5个细胞，连续免疫3d，以后每7d接种疫苗1次，继续免疫4次；正常对照组仅注射0．1ml PBS。在接种免疫的同时，给以二乙基亚硝胺（DEN）、四氯化碳（CCl4）和乙醇联合诱癌。诱癌20周后处死小鼠，检查成瘤情况，并对肝脏标本进行组织病理学检查。结果成功构建了转基因pAdBM5-mAFP-DC瘤苗；mAFP基因转染后的DC表面高表达MHCⅠ、MHCⅡ、CD18a、CD54、CD80和CD86等共刺激分子，其分子表达率分别为69．3％、41．0％、42．1％、63．2％、39．4％和38．6％，与转染前差异有统计学意义（P〈0．05）。单纯接种DC组、pAdBU5-mAFP-DC组、pAdBM5-mAFP组和正常对照组的肝癌发生率分别为65．0％、25．0％、70．0％和75．0％，pAdBM5．mAFP．DC组与其他组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论pAdBM5-mAFP-DC瘤苗免疫自然诱癌的C57BL／6J小鼠，可降低肝癌的发生率，对肝癌的发生有免疫保护作用。