玉米粉中转基因Bt176玉米的定量检测

使用根据转基因Bt176玉米中的外源基因CryIA(b)和内源基因Zein设计的引物和TaqMan荧光探针和ABIPRISM 770 0定量PCR仪对玉米粉中Bt176玉米的含量进行了定量检测 ,建立了Bt176玉米参照样品CryIA(b)和Zein的Ct值之差与样品中Bt176玉米含量之间的标准曲线和线性回归方程 。

转基因玉米Bt176品系特异性环介导等温扩增检测方法的研究

根据转基因玉米品系Bt176外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系Bt176的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价。评价结果表明:该方法定性检测低限为0.5%,特异性和稳定性均达到100%。

用实时荧光PCR方法定量检测Bt176转基因玉米

以实时荧光PCR技术鉴定商业化种植的转基因玉米Bt176品系。根据转基因玉米Bt176中内源基因Zein和外源基因cry1Ab设计引物及TaqMan荧光探针,成功建立了检测转基因玉米Bt176品系的实时荧光PCR方法。结果表明,应用实时荧光PCR方法检测转基因作物,不仅可以达到品系鉴定的作用,而且可以用于转基因成分的检测。该方法简便迅速,降低了污染机会,为转基因作物及产品的品系检测提供了新方法。

实时荧光定量PCR检测转基因玉米Bt176测量不确定度分析

应用实时定量PCR方法测定样品中转基因玉米Bt176的含量,并从多个方面来分析测量的不确定度。结果显示,A类不确定度为0.0003,B类不确定度为0.0007,合成不确定度为0.001,有效自由度veff为272,包含概率P为95%,扩展不确定度U=0.002,测量结果为(0.8±0.2)%。不确定度评估结果表明,测量不确定度的主要来源是微量液体转移量的偏差。

转基因玉米Bt176液相芯片检测方法的建立

为建立转基因玉米Bt176的液相芯片检测方法,根据已公布的转基因玉米Bt176外源插入基因CaMV35S启动子序列,外源基因3'端与玉米基因组DNA连接区序列,同时以玉米特异Zein内源基因序列为参照,利用Primer Premier5.0等软件设计特异性引物和探针。将探针与荧光编码微球偶联后,与PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Bio-plex 200)检测荧光信号。检测结果显示,该方法具有高特异性及灵敏度,各条探针之间无交叉反应,最低检测限可达0.01%。初步建立了检测转基因玉米Bt176的液相芯片技术,为其他转基因作物的快速高通量检测提供了借鉴和经验。

转基因玉米Bt176细胞毒性及遗传毒性研究

利用细胞-遗传毒理学技术评价转基因玉米Bt 176细胞毒性及遗传毒性,分别以200,100,50,25,12.5mg·L-1转基因玉米Bt 176全蛋白质作用于人淋巴细胞,并各孵育1.5,6,24 h.检测其细胞毒性损伤及遗传毒性损伤,并与空白组、阳性对照组、非转基因玉米组相比较.结果表明,阳性组与空白组淋巴细胞的遗传及细胞损伤指标存在显著差异.转基因玉米组淋巴细胞遗传及细胞损伤指标与非转基因玉米组淋巴细胞相比无明显差异(P>0.05),且与空白剂组细胞差异不显著(P>0.05).结果还表明,转基因玉米Bt 176与非转基因玉米两者在遗传毒性及细胞毒性上性状相似,实质等同.

转基因抗虫玉米Bt-176食用安全性研究

转基因抗虫玉米Bt-176具有抗鳞翅目尤其玉米螟等害虫及耐草铵膦除草剂等特性。自1995年在美国首次准许无限制种植以来,Bt-176玉米已经在许多国家和地区大面积种植并作为食品和饲料广泛应用。本文从导入基因及表达蛋白的特征、毒理学研究及营养成分分析入手,探讨了Bt-176玉米的食用安全性。

玉米样品中转基因玉米Bt176含量检测

根据其检测特异性,转基因产品检测技术可分为筛选、基因、构建和转化体特异性检测四类。由于转化体特异性检测方法的具有高度特异性,目前,一些发达国家对于转基因产品检测方法正逐步过渡到转化体特异性序列的检测方法。本研究针对转基因玉米Bt176的外源基因3'端与玉米基因组DNA相接区序列设计具有转化体特异性的引物和荧光探针。利用实时荧光定量PCR,以已知Bt176含量样品为标准样品建立内外源基因标准曲线,利用该标准曲线对多个玉米样品Bt176玉米成分含量进行检测,结果显示该方法检测结果准确,检测特异性强,Bt176玉米检测极限浓度达到0.001ng/μL。同时该方法操作简单,适合转基因样品大批量检测。

转基因抗虫玉米Bt毒蛋白的时空表达分析

对2个转Bt基因玉米抗虫系株系进行Bt毒蛋白表达量的分析测定。结果显示,转基因株系中的毒蛋白可以在其后代稳定的遗传和表达,毒蛋白的表达为组成性表达,在玉米的各个发育时期和植株的各个部位均有表达,但其表达的量有显著差异,毒蛋白表达量随着植株的生长而减少,比较植株的各个器官,叶片毒蛋白含量最高,茎次之,根、种子和花丝中的毒蛋白含量较少。

转基因抗虫玉米Bt蛋白表达量的研究

应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测转基因抗虫玉米不同生长期不同部位的Bt蛋白表达量。结果显示:Bt毒蛋白在玉米乳熟末期的第15叶中表达量(0.225%)最高,在花粉中表达量(0.011%)最低。叶、茎、髓、花丝、穗轴及粒的Bt蛋白含量及比例随着作物的生长呈上升的趋势。Bt毒蛋白最低检出量为0.5ng/mL。

玉米Bt转基因植株抗虫性鉴定研究初报

经室内喂虫和田间接种，鉴定了 Ｍｏ１７ ，４７８ 等４ 个常用自交系及其与９１ － １ － ８ 杂交的抗虫转基因杂种 Ｆ１ 的抗虫性结果表明，不同转基因材料之间以及同一转基因材料的不同单株间抗虫性差异很大，有少量植株表现高度抗性，个别植株几乎没有抗性外源 Ｂｔ 毒蛋白基因在不同遗传背景中的表现不尽相同，在抗性较差的 Ｍｏ１７ 背景中。

应用ELISA定量检测转基因玉米中Bt1蛋白的研究

应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原,通过抗体-抗原-酶标抗体反应,建立了酶联免疫吸附测定法(ELISA),以定量检测转基因玉米中的Bt1表达蛋白。用建立的ELISA法对4种进口玉米产品进行了测定,实验结果得到了免疫印迹分析的验证,并与进口试剂盒方法的定量分析结果相一致,因而建立的ELISA法具有操作简便、快速特异、定量准确、经济实惠的优点,特别适合于大批量检测,有着良好的应用前景。

玉米Bt转基因植株抗虫性量化分析

对 8 7- 1,80 85 ,综 3,N80 8等 4个回交一代Bt转基因材料进行田间抗虫性接卵鉴定的结果表明 ,成株期转基因材料群体茎秆的平均抗虫性较对照提高 45 %以上 ,差异达显著或极显著水平 ,叶片的抗虫性提高 30 %以上 ,不同遗传背景的转基因材料 ,抗性表现不一 .回交一代群体内 ,不同单株的抗虫性差异悬殊 。

转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含有转化体特异性片段（BT11-93bp）和玉米的内标准基因片段（zSSIIb-151bp）的质粒分子pUC57-BT11，经酶切和测序验证后，对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值，结果为1．01±0．叭（k=2）。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较，发现两者标准曲线斜率无显著差异，线性相关系数均〉10．99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定，结果发现采用pUC57．BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值-致，表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。

转基因玉米BT11品系环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

目的建立转基因玉米BT 11品系的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法根据转基因玉米BT 11品系特有序列(AY123624.1和AY629236)设计引物,优化建立LAMP反应体系,对该体系进行特异性、灵敏度、稳定性分析。结果本研究设计的引物具有很好的特异性,可特异性检测出转基因玉米BT 11品系;检测灵敏度可达0.5%;经精密度实验分析,该方法的稳定性良好。结论 LAMP方法检测转基因玉米品系BT 11具有特异性高、稳定性好、快速灵敏、过程可视等优点,具有广阔的应用前景。

mCry1Ac基因在抗虫转基因玉米Bt799中的表达特征

采用双抗夹心酶联免疫法(ELISA)定量检测转mCry1 Ac基因抗虫玉米Bt799在不同生育期不同植株部位的mCry1Ac蛋白含量。结果显示:mCry1 Ac基因在整个生育期玉米叶、茎、根和种子中均能表达,mCry1Ac蛋白含量为(0.82±0.10)^(15.83±1.77)μg·g-1;随着生育期和植株部位的不同,mCry1Ac蛋白含量呈现明显的时空动态变化,其中,叶、茎和根中mCry1Ac蛋白含量随转基因玉米生育期的推移均呈增加趋势,并均在完熟期达最高;在除苗期外的其他各生育期叶中mCry1Ac蛋白含量均显著高于其他植株部位,而在完熟期种子中mCry1Ac蛋白含量在各植株部位中最低,为(2.86±1.71)μg·g-1。

转基因抗虫玉米转育株Bt蛋白的表达特性分析

为了对转基因抗虫玉米转育株Bt蛋白的表达特性进行分析,用Cry1Ab/Cry1Ac平板试剂盒定量检测了3种含Bt基因的玉米回交后代品系BC1F1(HZ3152、HZ3342、HC0142)在相同生长时期不同组织和不同生长时期相同组织中Bt蛋白的表达量。结果表明,在乳熟期BC1F1不同组织中Bt蛋白表达含量的高低顺序为:叶片>胚乳>花丝>种子苞叶;在BC1F1不同的生长发育阶段(苗期、抽丝期和乳熟期),叶片中Bt蛋白的含量随生育期的推移呈明显先上升后下降趋势,Bt蛋白含量在抽丝期达到最大,之后又开始下降;苗期(HC0142、HZ3152、HZ3342)Bt蛋白的含量(4.16、3.75和3.72μg·g-1)和乳熟期(5.56、4.58和4.79μg·g-1)的含量分别是抽丝期(6.05、5.36和5.50μg·g-1)的68%、69%、67%和91%、85%、87%。一般在玉米生长后期Bt蛋白的浓度有所下降,但幅度不大,对其抗性不会造成太大影响。该研究表明Bt蛋白在玉米回交后代中可以稳定表达,对Bt的相关研究为转基因育种等提供了参考依据。

双抗夹心荧光免疫吸附测定法(sFLISA)定量检测转基因玉米中Bt蛋白

将量子点（Quantum Dots，QDs）应用于标记羊抗兔多克隆抗体，并利用Bt杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原，通过抗体-抗原-抗体-量子点标记抗体反应，建立了双抗夹心荧光免疫吸附测定法（sFLISA），以定量检测转基因玉米中的Bt表达蛋白。研究结果表明，该方法的最低检测限为3pg／mL，线性检测范围为6-200pg／mL，回收率在90.0％-105.9％，变异系数在3.0％-12.6％。

大气CO_2浓度升高对转基因玉米Bt毒素表达量的影响

大气CO_2浓度升高不仅影响植物营养化学成分的变化,还能够引起植物次生抗虫物质表达量的改变,进而影响作物-害虫的互作关系。本试验利用开顶式气室(OTC)和室内动态气室模拟当前和未来大气CO_2浓度(约390、550、750μL/L)环境,测定了不同大气CO_2浓度下普通玉米‘郑58’和转cry1Ac-m基因玉米的营养物质成分、转cry1Ac-m基因玉米Cry1Ac杀虫蛋白的含量,以及取食不同大气CO_2浓度环境下生长的‘郑58’或转cry1Ac-m基因玉米叶片的亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)初孵幼虫死亡率。结果表明,与对照相比,高大气CO_2浓度(750μL/L)环境下生长的转基因和对照玉米叶片中淀粉、可溶性糖、非结构性碳(TNC)含量及TNC∶N都明显增加,而N含量差异不显著。对照玉米叶片的N含量显著高于转基因玉米,其他营养成分没有显著变化。随着大气CO_2浓度的升高,转基因玉米的Cry1Ac蛋白表达量有下降的趋势,但各处理间差异不显著。亚洲玉米螟取食生长在不同大气CO_2浓度环境下的‘郑58’或转cry1Ac-m基因玉米叶片48h后,死亡率没有显著差异;转cry1Ac-m基因玉米具有显著的杀虫效果。

Bt转基因玉米的抗虫效果及其对田间动物种群影响的初步研究

通过比较Bt转基因玉米和常规玉米 (丹玉 13号 )的玉米螟卵量、被害株数及田间一些动物的种群数量 ,结果表明 :Bt转基因玉米对玉米螟具有较高的抗性 ,而且这种作用是持久的、稳定的。另外还发现 ,Bt转基因玉米对非鳞翅目昆虫及其他动物的影响甚微 。