重组腺相关病毒介导的TIMP-1载体的构建及鉴定

目的:构建及鉴定载入金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP鄄1)的重组腺相关病毒载体。方法:应用基因重组的方法构建含全长TIMP鄄1的重组腺相关病毒骨架质粒(pAAV鄄TIMP鄄1),利用磷酸钙沉淀法将腺相关病毒载体质粒共转染入HEK293细胞中,分别装配成rAAV鄄TIMP鄄1和rAAV鄄hrGFP,将rAAV鄄hrGFP转导HT1080细胞测定重组病毒的滴度,Westernblot方法检测rAAV鄄TIMP鄄1在HT1080细胞中的表达情况。结果:成功构建rAAV鄄TIMP鄄1,病毒滴度达到109TU/ml,转导细胞后,转导组TIMP鄄1的表达水平高于对照组。结论:构建的rAAV鄄TIMP鄄1,为基因修饰胰岛移植提供了新的手段。