结直肠癌组织中突变型Axin2对Wnt信号转导系统的调控及其机制

背景与目的:Axin2是近期发现的Wnt信号转导系统的新基因,其在结直肠癌中最主要的突变形式为羧基端缺失突变(mutant-type Axin2,mtAxin2)。本研究的目的在于探索mtAxin2对Wnt信号转导系统的调控作用及其相关机制。方法:采用免疫组化的方法检测大肠癌组织中β-catenin的表达;构建pCMV-Flag-wtAxin2和pCMV-Flag-mtAxin2质粒转染293细胞,采用免疫沉淀(co-immunoprecipitation,IP)和Western印迹杂交研究mtAxin2与Wnt信号转导系统中其它关键蛋白的作用;应用TNTT3/T7体外转录翻译系统体外合成mtAxin2蛋白,用于mtAxin2的体外聚合实验;使用Dual-Luciferase报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性;构建视网膜受体(retinoid receptor,RR)与蜕皮素受体(ecdysone receptor,ECR)质粒,用于恢复mtAxin2的DIX功能区对mtAxin2功能影响的研究。结果:免疫组化检测显示在有Axin突变的结直肠癌标本中β-catenin蛋白在核内积聚,而无Axin突变者在胞浆内。Western印迹杂交显示mtAxin2仍具有与GSK-3β、APC、β-catenin、DVL-1和PP2A形成复合体的功能。将Flag-wtAxin2和Flag-mtAxin2共转染293细胞后,mtAxin2与wtAxin2可竞争性地与β-catenin结合。在TNTT3/T7体外转录翻译实验中,wtAxin2与Flag-wtAxin2结合,而与Flag-mtAxin2不结合,mtAxin2不能形成二聚体或多聚体。pCMV-Flag-mtAxin2-RXR质粒转染293细胞后可降低T细胞转录因子报告基因(T-cell factor,TCF)活性,pCMV-Flag-mtAxin2-ECR质粒转染后TCF活性升高;pCMV-Flag-mtAxin2-RXR和pCMV-Flag-mtAxin2-ECR共转染,TCF活性也下降,显示mtAxin2与RXR融合后,融合蛋白可形成二聚体,恢复了Axin2的功能,致TCF报告基因的活性下降。结论:因为缺失DIX区,mtAxin2不能形成二聚体,干扰了β-catenin的降解,引起β-catenin在核内的积聚进而激活Wnt信号转导系统。

缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响

目的 探讨缺锌对大鼠脑肌醇磷脂信号转导系统的影响。方法 2 4只 Wistar大鼠 ,雌雄各半 ,按体重随机分为 A(缺锌组 ) ,B(自由进食组 ) ,C(配对饲养组 )三组 ,每组 8只 ,实验期 40天 ,测定脑锌和血锌含量 ,并观察缺锌对大鼠脑组织内磷脂酶 C(PLC)活性 ,蛋白激酶 C(PKC)活性 ,钙调蛋白 (Ca M)含量 ,及钙依赖性蛋白激酶 (Ca MK )活性的影响。结果 A组大鼠血清和脑锌含量明显降低 ,同时 A组大鼠大脑皮层和海马中 PLC,PKC,Ca MK 活性亦明显低于 B组和 C组。A组大鼠脑组织 Ca M含量明显低于 B组 ,与 C组无显著性差异。

丙型肝炎病毒与MAPK信号转导系统

0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是一种正链RNA病毒,其致病机制与DNA病毒和逆转录病毒有明显的区别[1].在病毒的生活周期中,HCV基因组编码多种结构和非结构蛋白,自身结合形成同二聚体形式,或与其他HCV病毒蛋白、细胞蛋白结合形成异二聚体,甚至是多聚体形式在肝细胞内存在[2].

丙型肝炎病毒与JAK-STAT信号转导系统

0引言 丙型肝炎病毒(HCV)感染具有显著的慢性化倾向,而且只有部分患者对于干扰素α(IFN α)的治疗有较好的应答.为什么会存在这种情况和差别,这是与HCV-肝细胞之间相互作用的分子生物学机制和基础来决定的[1].

Ras-MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑中的作用

目的 探讨 Ras- MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑中的作用 .方法 以卵蛋白诱导并激发的豚鼠哮喘模型为研究对象 ,选择末次诱喘后即刻至 2 4 0 min间数个时间点 ,采用 Dot- blot分子杂交法检测气道 ras m RNA水平 .免疫组化 ABC法研究气道 Ras和 MAPK蛋白的表达情况 .结果 与正常对照组相比 ,哮喘组豚鼠气道上皮水肿、脱落 ,平滑肌层及基底膜显著增厚 .诱喘后 ras m RNA的表达水平明显上调 ,30 min达高峰并维持至 12 0 min.各级气道的上皮和平滑肌细胞 Ras表达量显著增加 ,而 MAPK只在气道平滑肌层呈现高表达现象 .结论 Ras- MAPK信号转导系统在哮喘气道重塑早期发挥重要作用 。

二元信号转导系统与细菌的致病性

二元信号转导系统是广泛存在于细菌中的信号传导机制。病原菌在感染宿主的过程中,能通过该系统密切感受和响应体内外各种微环境的变化,进而调节各种基因表达以完成其致病过程。由于二元信号转导系统在病原菌的致病性方面具有重要作用,将其作为抗感染治疗中的靶点具有良好的应用前景。

IRAK-4:TLR/IL-1R家族共同信号转导系统中的关键因子

最近发现的一种新的白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin1receptorassociatedkinase4,IRAK4)不仅可促使白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK1)磷酸化,还是IRAK1募集于TLR/IL1R复合物的必要条件,从而成为调控IRAK1生物活性以及内毒素胞内信号转导的最关键分子。充分认识IRAK4的作用机制,将有助于设计出新的针对感染性疾病的治疗策略。

Ⅱ型猪链球菌二元信号转导系统2148hk／rr基因敲除突变体的构建

构建猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体。构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为2148hk/rr编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选2148hk/rr编码基因敲除突变体。PCR分析和Southern杂交结果均显示2148hk/rr编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变体构建成功。筛选获得05ZYH33二元信号转导系统2148hk/rr基因敲除突变体,为阐明该调控系统在猪链球菌致病过程中的作用奠定了基础。

高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨基末端激酶和p38信号转导系统的影响

目的:探讨高血糖状态对大鼠骨骼肌和心肌C-Jun氨苯末端激酶(C-JunN-terminalkinase,JNK)和p38激酶活性的作用,进一步了解糖尿病的发病机制,为糖尿病的临床康复治疗提供一些理论依据。方法:12周龄、体质量200～230g的SD大鼠12只,根据是否注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)随机分为高血糖组(n=6)和正常血糖组(n=6)。高血糖组大鼠腹腔内注射STZ(65mg/kg)建立持续高血糖模型(血糖>16mmol/L)。正常血糖组大鼠不注射STZ,维持正常血糖。运用化学发光法测定骨骼肌和心肌JNK和p38活性。结果:骨骼肌和心肌JNK活性在高血糖组明显增高,分别高于正常血糖组1.8倍和1.4倍。骨骼肌和心肌p38活性在高血糖组分别高于正常血糖组的2.0倍和1.6倍。结论:高血糖状态可以激活骨骼肌和心肌JNK和p38信号转导通道。提示细胞信号转导系统参与了糖尿病的发病机制。

猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究

目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统1094HK/1095RR的反应调节因子ciaR基因敲除突变株(ΔciaR),并研究ΔciaR的生物学功能。方法和结果基于同源重组原理筛选ciaR基因缺失株,PCR分析及Southern杂交结果均显示突变株构建成功。通过检测OD600值绘制生长曲线,发现突变株在37℃和40℃其OD600值均明显低于野生株;与40mmol/L过氧化氢共作用15min后涂板计数,突变株存活率明显低于野生株;不同pH值的培养基中培养,发现在pH5.0的酸性环境中突变株OD600值明显低于野生株;野生株与突变株对BALB/c小鼠攻毒(约1×109CFU/只),各10只,两组16h后均死亡9只。结论成功获得05ZYH33ciaR基因敲除突变株;发现删除ciaR基因会导致细菌的生长繁殖能力减弱,抗氧化应激能力下降,在酸性环境生长存活能力下降;但对小鼠毒力无差别。

大鼠胃电节律失常模型中NO/cGMP信号转导系统的作用

目的研究 NO/cGMP 信号转导系统在致大鼠胃电节律失常中的作用.方法建立大鼠胃电节律失常模型,计算机采集并分析正常和模型组大鼠胃电信号;肌间神经丛铺片,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组化法显示正常及模型组肌间神经丛氮能神经,并经图象分析定量;放免法测定正常及模型组胃平滑肌组织 cGMP 含量.结果模型组肌间神经丛氮能神经分布面密度(15.0±4.5)%,cGMP 含量(17.6±4.6)pmol·L^(-1)·g^(-1)及胃慢波异常节律指数(ARI,20.2%±8.7%)、频率变异系数(CV,34.7%±6.3%)均明显高于正常组,分别为(9.1±2.5)%,(11.8±2.1)pmol·L^(-1)·g^(-1),(5.1±1.8)%,(21.0±4.2)%,P<0.01,且模型组氮能神经面密度与该组 ARI 和 CV 呈显著正相关,相关系数 r 分别为0.73和0.69,P<0.05,模型组 cGMP 含量与该组 ARI 和 CV 亦呈显著正相关,相关系数 r 分别为0.78和0.79.P<0.01.结论模型组大鼠胃电节律失常与 NO,cGMP 升高有关,NO通过 NO/cGMP 信号转导系统调控胃电节律.

乳酸菌双组分信号转导系统

乳酸菌广泛应用于食品发酵工业中,其中有些菌种是重要的益生菌。乳酸菌中存在着双组分信号转导系统,参与乳酸菌的多种生理生化过程,是其代谢活动的重要调控机制。本文就双组分信号转导系统的组成、作用机制、类型、特点以及乳酸菌中双组分信号转导系统作一综述。

嗜酸硫杆菌双组分信号转导系统多样性分析

为探索嗜酸硫杆菌（Acidithiobacillus）对极端矿山环境条件感知和反应分子机制的差异,利用生物信息学方法鉴定和分析了两株嗜酸氧化亚铁硫杆菌、一株喜温嗜酸硫杆菌和一株耐冷嗜酸硫杆菌的双组分信号转导系统（TCS）结构多样性特征.结果表明,4株嗜酸硫杆菌拥有27~38个TCS蛋白,聚类分析显示有16组配对的TCS族、4组孤儿组氨酸蛋白激酶（HK）和9组孤儿反应调节蛋白（RR）,与其进化分支有较好的相关性;其中9个配对和5个不配对的TCS蛋白族为嗜酸硫杆菌菌株所共有,其余特有TCS均在一个或几个菌株中缺失.嗜酸硫杆菌菌株共有的TCS功能涉及氮素固定及代谢调节、柠檬酸/苹果酸代谢调节等,特有TCS功能涉及如趋化性调控、重金属响应、铜抗性调控等,这可能有助于菌株在极端矿山环境中生存.

表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS对相关蛋白调控的研究

目的利用双向电泳技术对表皮葡萄球菌菌体蛋白进行蛋白质组学分析,寻找双组分信号转导系统saeRS的调控网络。方法对表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株菌体蛋白进行双向电泳差异比较;电泳图谱采用Image Master 2DPlatinum软件分析;免疫印迹法验证saeRS调控的差异蛋白。结果在表皮葡萄球菌1457双组分信号转导系统saeRS删除株与野生株蛋白质图谱中共发现23个差异表达的蛋白点(10个下调,13个上调)。结论蛋白质双向电泳技术可以成功应用于分析表皮葡萄球菌双组分信号转导系统saeRS的调控网络;此图谱为进一步研究saeRS在表皮葡萄球菌中的调控机制奠定了基础。

MAPK信号转导系统在地塞米松诱导的CEM细胞增殖及凋亡中的作用

目的:探讨MAPK信号转导系统在地塞米松对CEM细胞增殖及凋亡中的作用。方法:台盼蓝拒染法测定增殖率;形态学及流式细胞仪解析细胞凋亡。结果:单用DEX培养24h-72h,细胞的增殖率分别为62.3%、35.5%、11.6%;SB203580预处理后,细胞的增殖率和单用DEX时相比分别升至82.8%、54.7%和48.1%(P<0.05);PD98059预处理后,,细胞的增殖率分别降至52.3%、19.8%和7.1%(P<0.05);SP600125预处理后,细胞的增殖率分别降至51.2%、19.5%和6.9%(P<0.05)。5μmol/LDEX处理CEM细胞36h时,亚二倍体细胞为26.2%,显著高于对照组(P<0.01)。SB203580预处理后,亚二倍体细胞由26.2%降至7.1%(P<0.01);PD98059预处理后,亚二倍体细胞升至38.6%(P<0.05),SP600125预处理后,亚二倍体细胞升至32.3%(P<0.05)。结论:MAPK信号转导通路参与地塞米松诱导的CEM细胞增殖及凋亡,表现为p38MAPK阻断增殖、促进细胞凋亡,ERK和JNK促进增殖、减少细胞凋亡。

葡甲胺-环磷腺苷在信号转导系统中作用的分子生物学基础

细胞信号系统实际上是外界信息在细胞内的传递过程.早在20世纪50年代,Sutherland及Rall发现了环磷腺苷(cAMP)在糖代谢中的重要作用,并据此提出了第二信使学说而获得了1971年生理与医学诺贝尔奖.几乎在同一年代美国华盛顿大学的Kerbs及Fisher阐明了蛋白质磷酸化在糖代谢中的作用,建立了以cAMP为基础的第二信使系统,并进一步证实,蛋白质可逆性磷酸化普遍存在于细胞内其他信号传递系统,因而获得了1992年生理与医学诺贝尔奖,成为细胞信号研究史上的另一里程碑.

破骨细胞的RANK信号转导系统研究进展

信号转导系统(signal transduction system)是由接收信号的特定受体、受体后信号转导通路、转录因子和作用终端组成,信号通过受体激活细胞内的信号转导通路,引发离子通道开放、蛋白质可逆磷酸化反应及基因表达改变等变化,导致一系列生物学效应,调节细胞的增殖、分化、代谢、适应、防御和凋亡等.信号转导系统的过程可概括为:细胞外信号与受体结合→受体将胞外信号转换为胞内信号→启动细胞内信号转导通路→激活转录因子→启动基因的表达→细胞生物学效应.