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胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性CTL的表达 被引量:4
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作者 唐余燕 陈小华 +2 位作者 汤正好 臧国庆 余永胜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期229-232,共4页
目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-... 目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-Tapasin及空白组(生理盐水)。经肌肉免疫小鼠,ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子;流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞内的细胞因子;CCK-8法检测T淋巴细胞增殖活性。结果实验组能有效刺激小鼠T细胞分泌Th1型细胞因子;FCM检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平明显高于其他组;且实验组T淋巴细胞增殖活性明显高于对照组及空白组。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫C57BL/6小鼠后,能提高T淋巴细胞增殖活性,能有效刺激T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及增加CTLs的表达。 展开更多
关键词 胞质转导肽 TAPASIN T细胞增殖 细胞毒T淋巴细胞
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细胞内转导肽——开启细胞调控之门的钥匙 被引量:1
2
作者 马大龙 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期292-294,共3页
To establish and develop an efficient import system for bio molecules into cells and nucleus is important for the study of signal transduction as well as therapeutic application. A number of peptides have been found t... To establish and develop an efficient import system for bio molecules into cells and nucleus is important for the study of signal transduction as well as therapeutic application. A number of peptides have been found to be able to deliver bio molecules, including proteins, DNAs, and oligonucleotides, into mammalian cells, which are known as transduction peptide or protein transduction domain (PTD). This review gives a brinef introduction to the structures, functions and application of the transduction peptides. 展开更多
关键词 蛋白质转导 导入系统 细胞内转导肽
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胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用
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作者 唐余燕 余永胜 +3 位作者 卓萌 臧国庆 汤正好 陈小华 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期122-129,共8页
目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6... 目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin,IL)-4培养5d,再加入实验组10μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10μg/mL CTP-HBcAg18-27、10μg/mL HBcAg18-27-Tapasin及空白组RPMI1640完全培养液.流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达,ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.结果:体外成功诱导小鼠髓源性DC;CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达;并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F=205.85,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=406.20,P=0.000)];流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F=155.45,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=392.90,P=0.000)],同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.结论:分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟,并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生. 展开更多
关键词 胞质转导肽 HBcAg18-27 TAPASIN 树突细胞 T淋巴细胞
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin通过激活PI3K/Akt通路抑制HBV转基因小鼠特异性CTL凋亡
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作者 唐余燕 陈小华 +4 位作者 卓萌 宋琳琳 汤正好 臧国庆 余永胜 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2014年第4期420-424,共5页
目的探讨胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)凋亡。方法 HBV转基因小鼠随机分组,100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin、50μg CTPHBcAg18-... 目的探讨胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)凋亡。方法 HBV转基因小鼠随机分组,100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin、50μg CTPHBcAg18-27-Tapasin、50μg CTP-HBcAg18-27及生理盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次。流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平及细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR表达的变化。结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.74±0.20)%,高于对照组50μg CTP-HBcAg-18-27-Tapasin(2.42±0.53)%及50μg CTP-HBcAg18-27(1.70±0.56)%和空白组(0.66±0.71)%(F=741.45,P=0.000);同时,100μg CTPHBcAg18-27-Tapasin融合蛋白有效抑制特异性CTL凋亡(6.29±0.02)%,低于对照组50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin(7.72±0.15)%及50μg CTP-HBcAg18-27(26.30±1.13)%和空白组(58.26±0.23)%(F=5313,P=0.000),并伴随凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR上调(F=52.61、18.32和94.18,P<0.05)。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin能有效诱导HBV转基因小鼠特异性CTL的表达,抑制其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的激活有关。 展开更多
关键词 胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin P13K Akt通路 细胞毒T淋巴细胞 凋亡 乙肝病毒
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CMC-TAT蛋白转导肽纳米载体体外转染效果评估 被引量:1
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作者 唐朝颖 韩维举 +4 位作者 邓雄威 王方园 袁硕龙 杨仕明 吴南 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期793-797,共5页
目的构建羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体(CTNs),探究CTNs介导miR96转染293细胞和耳蜗基底膜的效率及安全性,为mi R96在内耳的功能研究奠定基础。方法应用羧甲基化的壳聚糖(CMC)与TAT蛋白转导肽合成CTNs,携带标记花青染料荧光(cy3)... 目的构建羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体(CTNs),探究CTNs介导miR96转染293细胞和耳蜗基底膜的效率及安全性,为mi R96在内耳的功能研究奠定基础。方法应用羧甲基化的壳聚糖(CMC)与TAT蛋白转导肽合成CTNs,携带标记花青染料荧光(cy3)的mi R96模拟物(mi R96 mimics),转染293细胞和耳蜗基底膜,利用激光共聚焦荧光显微镜对293细胞和耳蜗基底膜铺片进行荧光阳性细胞计数,以阳离子脂质体作为对照,评价转染效率,采用MTT试验评价CTNs的安全性。结果成功制备了CTNs,纳米颗粒平均直径约186.6nm,粒径分布集中,无明显聚集现象;CTNs-mi R96-cy3转染293细胞的平均阳性细胞率为32.6%,转染耳蜗基底膜毛细胞的平均阳性细胞率为24.4%,均低于阳离子脂质体-mi R96-cy3;MTT试验示CTNs细胞毒性低于阳离子脂质体。结论 CTNs作为一种新型的纳米载体,可携带miR96成功转染耳蜗基底膜,提示了纳米载体作为miRNA载体的可行性,并且安全性较高,但转染效率不足。 展开更多
关键词 羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体 MIRNA miR96 内耳转染
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转导肽疗法用于葡萄膜黑色素瘤和视网膜母细胞瘤
6
作者 J.WilliamHarbour LoriWorley DuanduanMa MichaelCohen 李爱军 《美国医学会眼科杂志(中文版)》 2003年第3期180-180,共1页
目的:确定对原癌蛋白HDM2和Bcl-2有抑制作用的转导肽是否能够对葡萄膜黑色素瘤和视网膜母细胞瘤细胞有选择性的杀灭作用。
关键词 转导肽疗法 葡萄膜黑色素瘤 视网膜母细胞瘤 治疗 肿瘤细胞凋亡
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用 被引量:5
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作者 刘红红 陈小华 +4 位作者 周丽芹 刘雪妮 余永胜 臧国庆 汤正好 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期593-597,共5页
目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导体外培养的小鼠髓源性树突状细胞(Dc)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用。方法体外分离、培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和IL-4培养5d,... 目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导体外培养的小鼠髓源性树突状细胞(Dc)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用。方法体外分离、培养近交系BALB/c小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和IL-4培养5d,再加入脂多糖诱导成熟。10,ug/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、50,ag/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin、10p.g/LCTP-HBcAg18-27及RPMI-1640培养液加入培养介质。流式细胞术测定DC表面分子表达,EusA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞术检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子。多个样本均数间的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。结果成功体外诱导小鼠髓源性DC;CTP—HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD86及主要组织相容性复合体-1分子的表达;509g/LCTP—HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平为(61.12±10.25)pg/mL,依次高于10/xg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组的(50.43±10.42)pg/mL、10〉g/LCTP-HBcAgl8m组的(40.17±8.54)pg/mL和空白组的(30.51±8.03)pg/mL(F=15.85,P=0.030和P=0.037);CTP—HBcAg18-27-Tapasin诱导DC刺激T淋巴细胞增值能力明显高于对照组;流式细胞仪检测融合蛋白诱导的CTL水平50μg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为(2.05±0.41)%、10μg/LCTP-HBcAg18-27-Tapasin组为(1.06±0.10)%,高于10〉g/LCTP-HBcAg18-27组的(O.45±0.11)%和空白组的(O.09±0.02)%(F=60.22,P=0.003)。结论CTP-HBcAg18-27-Tapasin可以促进DC的分化、成熟,增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力并能增加CTL的表达。 展开更多
关键词 胞质转导肽 HBcAg18-27 Tapasin树突细胞 T淋巴细胞 细胞分裂
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TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白的跨膜转导研究 被引量:3
8
作者 吴永红 石锦平 +3 位作者 何国维 任长虹 高艳 张成岗 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期39-45,共7页
TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子... TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子克隆技术构建了原核表达载体pET28b-EGFP和pET28-TAT-EGFP,继而利用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达了靶蛋白并结合荧光显微观察、SDS-PAGE和Western blot等鉴定技术获得表达靶蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)细胞,最后将其涂布到含有Kana+的LB固体培养基上直接饲喂野生型N2株系线虫,利用荧光显微镜观察绿色荧光信号在线虫体内的分布。结果证明,TAT-EGFP融合蛋白较之于EGFP可高效、可溶性表达,而且通过直接饲喂秀丽线虫表达靶蛋白的大肠杆菌48小时后,TAT-EGFP荧光信号明显分布于线虫肠壁细胞,而EGFP荧光信号则分布在秀丽线虫肠腔,空载体对照组未见任何荧光信号,说明TAT蛋白转导肽能够高效介导外源蛋白在秀丽线虫体内跨膜转导。同时,通过比较空载体对照组与实验组线虫微分干涉图像,未见线虫出现明显的细胞形态变化,说明TAT蛋白转导肽介导的外源蛋白跨膜转导作用是安全的,为在秀丽线虫体内直接研究外源蛋白的功能以及进行蛋白药物的研发提供了重要参考。 展开更多
关键词 TAT蛋白转导肽 原核表达 线虫 跨膜转导
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HIV-1TAT蛋白转导肽的研究进展 被引量:12
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作者 吴永红 张成岗 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期66-73,共8页
TAT蛋白转导肽是人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)编码的一段富含碱性氨基酸、带正电荷的多肽,属于蛋白转导域家族的一员。长期研究发现其全长及11个碱性氨基酸富集区的核心肽段(YGRKKRRQRRR)不仅能够在... TAT蛋白转导肽是人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)编码的一段富含碱性氨基酸、带正电荷的多肽,属于蛋白转导域家族的一员。长期研究发现其全长及11个碱性氨基酸富集区的核心肽段(YGRKKRRQRRR)不仅能够在包括蛋白质、多肽及核酸等多种外源生物大分子的跨膜转导过程中具有重要作用,而且能够携带这些外源生物大分子通过活体细胞的各种生物膜性结构(如细胞膜和血脑屏障等)并发挥生理功能,但其跨膜转导机制仍不明确。新近研究还发现TAT核心肽段在促进外源蛋白高效表达过程中也具有重要作用,能够显著增加外源蛋白高效、可溶性表达的水平,显示了TAT蛋白转导肽的新功能。以TAT蛋白转导肽跨膜转导作用的长期研究背景为基础,分别从TAT蛋白转导肽的结构特点、其跨膜转导作用的影响因素及其作用机制等方面进行了系统综述,进一步结合TAT蛋白转导肽的最新研究进展分别从药物研发、机制探索及新功能的开发等方面展望了后续研究方向与应用价值,不仅为深入阐述TAT蛋白转导肽的跨膜转导作用的功能意义提供了参考依据,而且为TAT蛋白转导肽在微生物工程及蛋白质工程等领域的潜在应用价值提供了重要参考信息。 展开更多
关键词 TAT 蛋白转导肽 碱性氨基酸 蛋白转导 外源蛋白表达
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胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞抑制转基因小鼠HBV复制 被引量:3
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作者 唐余燕 陈小华 +4 位作者 周丽芹 卓萌 臧国庆 汤正好 余永胜 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期-,共6页
目的 探讨经分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg18-27经CTP转导体内诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用. 方法 20只HBV转基因小鼠随机分组,100 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin,50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasi,50 μ... 目的 探讨经分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg18-27经CTP转导体内诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用. 方法 20只HBV转基因小鼠随机分组,100 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin,50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasi,50 μg CTP-HBcAg18-27及等渗盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中CTL水平,微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中HBsAg水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平,肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.数据用均数±标准差((x-)±s)表示,用SPSS16.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较采用LSD法. 结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.70%±0.20%),其水平高于对照组50 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin (1.66%±0.53%)及50μg CTP-HBcAg18-27 (1.26%±0.56%)和空白组(0.75%±0.71%),F=741.45,P=0.000.肝脏HE染色及免疫组织化学结果显示实验组肝组织中炎性细胞的数量明显增多及HBsAg的表达显著减少,同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA有明显的抑制作用. 结论 分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg 18-27经CTP转导免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量,显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平,同时抑制肝脏中HBsAg的表达. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 T淋巴细胞 细胞毒性 转基因小鼠 胞质转导肽 HBcAg18-27 TAPASIN
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胞质转导肽介导的蛋白转导技术及其在医学领域中的应用 被引量:2
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作者 卓萌 臧国庆 汤正好 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2013年第3期-,共4页
胞质转导肽(CTP)是一种可携带生物活性大分子(蛋白、多肽、核酸等)转运到细胞胞质的新型转导肽.大部分CTP以及CTP融合蛋白拥有胞质定位而非细胞核定位特点.另外,CTP具有独特的器官或组织趋向性,以及高效的膜穿透能力,这些显著特点使其... 胞质转导肽(CTP)是一种可携带生物活性大分子(蛋白、多肽、核酸等)转运到细胞胞质的新型转导肽.大部分CTP以及CTP融合蛋白拥有胞质定位而非细胞核定位特点.另外,CTP具有独特的器官或组织趋向性,以及高效的膜穿透能力,这些显著特点使其在感染性疾病、癌症、白血病等疾病治疗领域受到广泛关注.此文综述了CTP的分子结构、转导特点及其在医学领域中的应用. 展开更多
关键词 衔接蛋白质类 信号转导 胞质转导肽 应用
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核衣壳蛋白VP39融合TAT转导肽对杆状病毒转导哺乳动物细胞的影响 被引量:1
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作者 李俪 王鑫 +1 位作者 尹隽 钟江 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1558-1563,共6页
为了提高昆虫杆状病毒在哺乳动物细胞中转导基因的效率,构建了重组杆状病毒AcRed-tat和AcRed。两者都能在哺乳动物细胞内表达红色荧光蛋白作为报告基因。同时,AcRed-tat带有HIV-1Tat转导肽、病毒主要衣壳蛋白基因vp39及增强型绿色荧光蛋... 为了提高昆虫杆状病毒在哺乳动物细胞中转导基因的效率,构建了重组杆状病毒AcRed-tat和AcRed。两者都能在哺乳动物细胞内表达红色荧光蛋白作为报告基因。同时,AcRed-tat带有HIV-1Tat转导肽、病毒主要衣壳蛋白基因vp39及增强型绿色荧光蛋白(egfp)三者的融合基因,并由杆状病毒多角体启动子表达,能够在昆虫细胞中表达该Tat融合蛋白,并掺入子代病毒粒子。而AcRed作为相应的对照病毒,带有多角体启动子表达vp39和egfp的融合基因。2株病毒分别转导哺乳动物细胞后,利用流式细胞仪检测报告基因的表达水平,发现在CHO和Vero细胞中AcRed-Tat介导的报告基因表达水平明显高于AcRed,而在HEK293细胞中2株病毒介导的报告基因表达水平差异不显著。结果表明Tat转导肽可以提高杆状病毒对一部分哺乳动物细胞的转导效率,为改进杆状病毒-哺乳动物细胞转导载体提供了新的思路。 展开更多
关键词 杆状病毒 哺乳动物细胞 转导 Tat转导肽
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蜱组胺结合蛋白与渗透肽TAT在杆状病毒表达体系中的融合表达和功能分析 被引量:1
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作者 王亚楠 曹杰 +3 位作者 周勇志 张厚双 龚海燕 周金林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期457-460,共4页
为真核融合表达亚洲璃眼蜱(H.asiaticum)唾液腺中的组胺结合蛋白(HBP)与渗透肽TAT,并研究其生物学活性,本研究将编码HBP的基因片段与编码渗透肽TAT基因片段通过酶切位点Eco RⅠ酶切连接后克隆至真核表达载体p Fast Bac HTa中,构建重组杆... 为真核融合表达亚洲璃眼蜱(H.asiaticum)唾液腺中的组胺结合蛋白(HBP)与渗透肽TAT,并研究其生物学活性,本研究将编码HBP的基因片段与编码渗透肽TAT基因片段通过酶切位点Eco RⅠ酶切连接后克隆至真核表达载体p Fast Bac HTa中,构建重组杆粒r Bac-HBP-TAT,转染至sf9昆虫细胞中,制备重组病毒并进行融合蛋白的表达。经SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光试验检测结果表明,HBP-TAT在Bac-to-Bac杆状病毒系统中获得稳定表达,融合蛋白约为31 ku。此外,组胺结合试验证明HBP-TAT具有与组胺结合的能力。本研究为研制新型蜱源抗组胺药物提供了实验依据。 展开更多
关键词 亚洲璃眼蜱 组胺结合蛋白 Bac-to-Bac杆状病毒系统 蛋白转导肽
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细胞穿透肽转运机制、分子改造及相关免疫治疗
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作者 孔祥军 吴玢 +1 位作者 任勇刚 吕凤林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期901-905,共5页
细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)也称为蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有较强的穿膜活性的多肽,可以携带各种生物分子转运到细胞内,这一特点使其在药物转运系统及疾病治疗等领域有着广泛的研究,... 细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)也称为蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有较强的穿膜活性的多肽,可以携带各种生物分子转运到细胞内,这一特点使其在药物转运系统及疾病治疗等领域有着广泛的研究,但是其穿膜转运机制尚不清楚。CPPs的穿膜过程可以分为3步,首先CPPs特殊的生化性质使其与细胞表面相互作用,形成空间优势,然后通过不同的方式进行跨膜转运,之后在CPPs在细胞内有不同的转运路径与定位。这种特性使其在免疫治疗方面有广阔的应用前景。本文就其运转过程的研究做一概括总结。随着研究不断深入,需要对传统的PTD进行改建、开发或者构建新的仿CPPs分子达到提高其运转效率、细胞内特异性定位及靶向不同种类细胞的目的,优化CPPs运转系统,为疫苗设计提供新的思路,并满足基础研究的需要。 展开更多
关键词 细胞穿透 跨膜转运 胞浆转导肽 分子改造 免疫治疗
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CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin联合佐剂CpG ODN免疫转基因小鼠的免疫应答研究 被引量:1
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作者 吴姗姗 唐余燕 +5 位作者 陈小华 张毅 王洁玲 汤正好 臧国庆 余永胜 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第3期271-276,共6页
目的:观察以非甲基化寡聚脱氧核苷酸基序(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)为佐剂联合融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBc Ag18-27-Tapasin免疫乙型病毒性肝炎(hepatitis B virus,HBV)转基因小鼠的免疫反应。方法:HBV转基因小鼠随机分为5组... 目的:观察以非甲基化寡聚脱氧核苷酸基序(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)为佐剂联合融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBc Ag18-27-Tapasin免疫乙型病毒性肝炎(hepatitis B virus,HBV)转基因小鼠的免疫反应。方法:HBV转基因小鼠随机分为5组,实验组:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin+CpG ODN组,对照组:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin,干扰素(IFN-α)组,CpG ODN组,空白组为生理盐水组。融合蛋白及CpG ODN经肌肉注射免疫小鼠,流式细胞仪检测病毒特异性T细胞反应(HBV-specific cytotoxic T cell,CTL)变化,全自动免疫分析仪检测血清乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBs Ag)水平,ELISA检测T淋巴细胞培养上清白介素(IL)-2、γ-干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量PCR(real time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测HBV DNA水平,免疫组化观察HBV转基因小鼠肝脏中HBs Ag水平。结果:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin+CpG ODN组中IFN-γ+CD8+双阳性T细胞百分比增高,细胞培养上清IL-2、IFN-γ水平升高,肝脏病理显示炎性细胞增多,免疫组化显示HBs Ag表达水平明显下降,同时对血清HBs Ag及HBV DNA水平进行比较,CTP-HBc Ag18-27-Tapasin有明显抑制作用。结论:CpG-ODN作为佐剂可以增强融合蛋白CTP-HBc Ag18-27-Tapasin诱导的HBV转基因小鼠抗病毒免疫应答。 展开更多
关键词 胞质转导肽 抗病毒反应 佐剂
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TAT介导的金属硫蛋白的穿膜效应及对细胞氧化损伤的修复作用
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作者 马文丽 和柳芝 +2 位作者 杨月 李玉英 王兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1266-1272,共7页
人类免疫缺陷病毒反式激活因子(human immunodeficiency virus transactivator,TAT)蛋白质转导肽是HIV-1编码的反式转录激活因子,富含碱性氨基酸序列,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,例如细胞质膜和血脑屏障等。金属... 人类免疫缺陷病毒反式激活因子(human immunodeficiency virus transactivator,TAT)蛋白质转导肽是HIV-1编码的反式转录激活因子,富含碱性氨基酸序列,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,例如细胞质膜和血脑屏障等。金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质,在维持生物体内金属含量动态平衡、重金属解毒以及防御氧化应激中均发挥重要作用。本研究通过基因重组技术制备由TAT介导的能跨膜进入细胞的重组融合蛋白质TAT-MT,使其进入细胞,高效发挥抗氧化损伤效应。通过体外抗氧化实验测定TAT-MT的体外羟自由基清除率及总抗氧化能力;免疫荧光技术检测其穿膜活性;MTT法研究其对H2O2诱导的293T细胞氧化损伤的修复作用。结果显示,通过长引物PCR技术在目的基因5′-端加入TAT序列,成功构建原核表达载体pET28a-TAT-MT;通过TAT标签的引入显著增加了MT的可溶性表达;进一步通过表达条件的优化成功获得了TAT-MT的高效可溶性表达;采用亲和层析方法对重组蛋白质进行了分离纯化;免疫荧光检测显示,重组蛋白质可以高效进入细胞;体外抗氧化结果显示,当TAT-MT浓度为100μmol/L时,羟自由基清除率达到94.87%±5.18%,说明TAT-MT具有较强的清除羟自由基的能力;MTT结果表明,重组蛋白质对H2O2诱导的293T细胞氧化损伤具有显著的(P<0.05)修复作用。本研究为MT的规模化制备及进一步开发其在生物医药、食品保健及化妆品领域的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 TAT蛋白质转导肽 金属硫蛋白 融合表达 穿膜效应 氧化损伤修复作用
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猪轮状病毒VP融合蛋白的构建及其免疫原性研究 被引量:2
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作者 姚帅 徐进平 《安徽农业科学》 CAS 2018年第19期100-104,共5页
[目的]研究猪轮状病毒VP8与VP7融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪轮状病毒VP8、VP7蛋白与TAT转导肽序列的融合蛋白VP8-VP7-TAT以及VP8-TAT、VP7-TAT。将3种融合蛋白分别经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪... [目的]研究猪轮状病毒VP8与VP7融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪轮状病毒VP8、VP7蛋白与TAT转导肽序列的融合蛋白VP8-VP7-TAT以及VP8-TAT、VP7-TAT。将3种融合蛋白分别经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清特异性抗体Ig G和黏膜特异性抗体Ig A水平;期间观察小鼠体重变化;检测融合蛋白VP8-VP7-TAT的穿肠功能。[结果]腹腔注射组血清中Ig G抗体水平明显高于其他实验组,但其黏膜Ig A抗体水平较低;灌胃组血清中Ig G抗体水平略低于腹腔注射组,但明显高于对照组。灌胃组能诱导较高水平的黏膜Ig A抗体,高于其他实验组;融合蛋白VP8-VP7-TAT诱导产生的血清中Ig G抗体和黏膜Ig A抗体水平均高于VP8-TAT以及VP7-TAT;在实验周期中,各组小鼠体重均正常;融合蛋白VP8-VP7-TAT的穿肠活性较好,与对照组之间差异极显著。[结论]融合蛋白VP8-VP7-TAT经口服或注射小鼠后,能够有效诱导小鼠机体产生体液免疫应答,并且融合蛋白VP8-VP7-TAT经口服可诱导小鼠机体产生较强的黏膜免疫应答。融合蛋白VP8-VP7-TAT相较VP8-TAT、VP7-TAT,能诱导小鼠机体产生更强的免疫应答,具有更强的免疫原性。融合蛋白VP8-VP7-TAT具有穿肠功能。融合蛋白VP8-VP7-TAT经小鼠安全性实验表明具有很好的安全性。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP7 VP8 转导肽 免疫原性
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猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的构建及其免疫原性研究 被引量:1
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作者 王芳 徐进平 《安徽农业科学》 CAS 2018年第13期104-107,169,共5页
[目的]研究猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪传染性胃肠炎病毒S1与TAT转导肽序列的融合蛋白S1-TAT,将融合蛋白S1-TAT经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清Ig G抗体和黏... [目的]研究猪传染性胃肠炎病毒S1融合蛋白的免疫原性。[方法]表达和纯化了猪传染性胃肠炎病毒S1与TAT转导肽序列的融合蛋白S1-TAT,将融合蛋白S1-TAT经腹腔注射和灌胃方式免疫昆明小鼠,采集免疫小鼠血液和粪便样品,检测血清Ig G抗体和黏膜Ig A抗体水平,期间观察小鼠体重变化。[结果]腹腔注射组诱导产生的血清Ig G抗体水平明显高于其他试验组(P<0.01),但其黏膜Ig A抗体水平较低;而灌胃组能够诱导中等水平的血清Ig G抗体和较高水平的黏膜Ig A抗体(P<0.01);在试验周期中,各组小鼠体重均正常。融合蛋白S1-TAT的穿肠活性较好,与对照组之间差异极显著(P<0.01)。[结论]融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠后,能够有效诱导小鼠机体产生体液免疫应答,并且融合蛋白S1-TAT经口服可诱导小鼠机体产生黏膜免疫应答;融合蛋白S1-TAT具有穿肠功能;融合蛋白S1-TAT经口服或注射小鼠,均安全。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒S1基因 转导肽 免疫原性
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CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用 被引量:1
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作者 肖恒 王海霞 +3 位作者 陶崑 钟梁 黄世峰 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期954-958,共5页
目的:探讨细胞质转导肽-寡聚化结构域1-血凝素(cytoplasmic transduction peptide-oligomerization domain 1-hemagglutinin,CTP-OD1-HA)和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法:CTP-OD-HA(阳性对照)、CTP-HA(... 目的:探讨细胞质转导肽-寡聚化结构域1-血凝素(cytoplasmic transduction peptide-oligomerization domain 1-hemagglutinin,CTP-OD1-HA)和CTP-OD2-HA融合肽对白血病K562细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法:CTP-OD-HA(阳性对照)、CTP-HA(阴性对照)、PBS(空白对照)、CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA分别预处理K562细胞,并将其分别注射入裸鼠皮下,观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况,TUNEL法检测移植瘤组织中肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:CTPOD1-HA和CTP-OD2-HA处理组移植瘤体积明显小于CTP-HA组(P<0.05),且肿瘤细胞内出现空泡样凋亡改变。TUNEL法检测结果显示,CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤细胞的凋亡改变比CTP-HA组更明显(P<0.05)。CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA处理组肿瘤组织中凋亡相关蛋白Bax蛋白的表达水平明显高于CTP-HA组(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表达水平明显低于CTP-HA组(P<0.05)。结论:CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽能够抑制K562细胞在裸鼠体内的致瘤能力,并促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 白血病 融合蛋白类 bcr—abl 小鼠 细胞质转导肽
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CTP-BCR-ABL抗原肽负载树突状细胞体外致敏T淋巴细胞靶向杀伤CML细胞
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作者 王旭 曾大川 +2 位作者 郑忍忍 黄峥兰 高淼 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第2期353-362,共10页
BCR-ABL为慢性髓细胞白血病特异胞质抗原,为良好的免疫治疗靶标。该研究选择BCR-ABL融合位点的两段抗原肽SSKALQRPV(SS)、GFKQSSKAL(GF)为靶点,与胞质转导肽融合表达,负载小鼠骨髓源性树突状细胞。在胞质转导肽介导下,SS、GF短肽进入树... BCR-ABL为慢性髓细胞白血病特异胞质抗原,为良好的免疫治疗靶标。该研究选择BCR-ABL融合位点的两段抗原肽SSKALQRPV(SS)、GFKQSSKAL(GF)为靶点,与胞质转导肽融合表达,负载小鼠骨髓源性树突状细胞。在胞质转导肽介导下,SS、GF短肽进入树突状细胞并定位于内质网,具备了被树突状细胞识别为内源性抗原并以MHC I类分子递呈的条件。在体外培养中,用致敏的树突状细胞刺激脾脏CD8^(+)T淋巴细胞,获得针对CML的细胞毒性T淋巴细胞,同时检测该细胞毒性T淋巴细胞体外抗CML的效应。结果证实,胞质转导肽介导的GF抗原短肽负载的树突状细胞能够诱导CD8^(+)T淋巴细胞增殖活化并产生针对CML的细胞毒性杀伤效应。因此,GF抗原肽有望作为CML免疫治疗的靶点。该研究为鉴定出靶向CML细胞的T淋巴细胞表面的特异TCR序列准备了条件,进而为后续制备靶向CML的TCR-T细胞奠定了基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 BCR-ABL 慢性髓细胞白血病 胞质转导肽
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