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转座突变株插入位点侧翼序列的研究 被引量:1
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作者 陈志瑾 朱军民 +1 位作者 饶贤才 丛延广 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期518-520,共3页
目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的... 目的比较用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点侧翼序列的3种PCR方法,以选择最有效、最简便的扩增方法进行转座突变基因的分析。方法分别采用step-outPCR、随机引物巢式PCR和反向PCR对弗氏枸橼酸杆菌转座突变株基因组中插入位点的侧翼序列进行扩增,并取产物进行直接测序,以对方法的有效性进行比较。结果随机引物巢式PCR方法简便,但扩增产物的条带较多,不利于后续的测序操作。Step-outPCR产物中非特异性片段更多,方法不可取,反向PCR法最为简便有效。结论反向PCR法适宜用于扩增弗氏枸橼酸杆菌转座突变株插入位点的侧翼序列,可以对突变基因进行定位。 展开更多
关键词 转座突变株 PCR 弗氏枸橼酸杆菌
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转座子挽救法对转座子突变菌株中插入位点的定位分析 被引量:4
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作者 阮红 Bernhard Eikmanns 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期326-330,共5页
为寻找谷氨酸棒杆菌转座子插入突变菌株中的转座子插入位点 ,采用了转座子挽救法对转座子及其插入位点附近的序列进行分离 ,并测定插入位点相邻DNA序列 ,获得了三个转座子插入位点DNA序列 ,其中一个是柠檬酸合成酶基因 ,另两个为目前未... 为寻找谷氨酸棒杆菌转座子插入突变菌株中的转座子插入位点 ,采用了转座子挽救法对转座子及其插入位点附近的序列进行分离 ,并测定插入位点相邻DNA序列 ,获得了三个转座子插入位点DNA序列 ,其中一个是柠檬酸合成酶基因 ,另两个为目前未知基因 ,暂命名为orfA和orfB。该方法简便易行 。 展开更多
关键词 转座子挽救法 转座突变 插入位点 定位分析 插入突变 谷氨酸棒杆菌
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Construction of Mutation Library in Haemophilus parasuis by Inserting Tn5 Transposon and the Screening of Attenuated Strain 被引量:1
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作者 贺云霞 徐慧 +6 位作者 叶飞 孙慧玲 王宏俊 龚玉梅 张莉 黄秀芬 张培君 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第2期295-300,共6页
[Objective] The study aimed to obtain attenuated strain of Haemophilus parasuis.[Method] Tn5 transposon technology was used to construct a library of mutants.Positive mutants were screened by kanamycin resistance.Fals... [Objective] The study aimed to obtain attenuated strain of Haemophilus parasuis.[Method] Tn5 transposon technology was used to construct a library of mutants.Positive mutants were screened by kanamycin resistance.False positive was identified by PCR and then removed.Mice were infected to detect the virulence of mutants.The bionomics of attenuated strains were detected,too.[Result] The attenuated mutants showed similar reproductive activity to that of wild strain.The virulence of mutants was still stable after 30 passages.[Conclusion] This study provided foundation for exploring the virulence factors and pathogenic mechanism of HPS. 展开更多
关键词 Haemophilus parasuis TRANSPOSON Mutation library Attenuated strains
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广藿香青枯病菌致病相关基因的筛选及分析 被引量:2
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作者 张泳 贺红 +1 位作者 李巧 王邦伟 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期249-254,共6页
目的对广藿香青枯病菌致病相关基因进行筛选及分析。方法以广藿香青枯病菌菌株PRS-84的Tn5转座子插入突变株为材料,通过伤根浸泡法分别接种于广藿香植株,筛选致病性减弱的突变株;对筛选获得的突变株进行生长速率、泳动性和生物膜形成等... 目的对广藿香青枯病菌致病相关基因进行筛选及分析。方法以广藿香青枯病菌菌株PRS-84的Tn5转座子插入突变株为材料,通过伤根浸泡法分别接种于广藿香植株,筛选致病性减弱的突变株;对筛选获得的突变株进行生长速率、泳动性和生物膜形成等表型分析;再利用反向PCR扩增致病性减弱突变株Tn5转座子插入位点的侧翼序列并进行序列测定与生物信息学分析。结果筛选得到了2个致病性减弱的突变株(PRS-84-11-33、PRS-84-11-123),它们对广藿香植株的致病性均明显低于野生株PRS-84。与野生株相比,致病性减弱突变株的菌落形态无明显变化,突变株PRS-84-11-123在培养后期生长速率有所升高。突变株PRS-84-11-33及PRS-84-11-123的泳动能力及生物膜形成能力均低于野生株。突变株Tn5转座子插入位点侧翼序列的生物信息学分析表明,这2个致病性减弱突变株的Tn5转座子插入位点基因分别为lptE基因和lon基因。结论该研究筛选获得了与广藿香青枯病菌致病性相关的基因,为了解青枯病菌的致病机制、寻找有效防治广藿香青枯病的方法提供了基础信息。 展开更多
关键词 广藿香 青枯病菌 Tn5转座子插入突变 致病相关基因
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